一种稳定的重组人神经生长因子的液体制剂制造技术

本发明专利技术属于生物制药生产技术领域，具体公开了一种稳定的重组人神经生长因子的液体制剂，包括NGF蛋白、缓冲剂体系、稳定剂以及增溶剂；所述NGF蛋白为0.1mg/mlNGF蛋白；所述缓冲体系包括缓冲剂以及注射用水，所述缓冲剂包括但不限于组氨酸盐酸、柠檬酸或柠檬酸钠；所述稳定剂包括但不限于蔗糖或甘露醇；所述增溶剂包括但不限于聚山梨酯80或聚山梨酯20；本发明专利技术提供的液体制剂在储存期间能保持稳定性，具有较低的聚集体及其片段化；在2～8℃条件下，放置24个月后，制剂的外观、浓度和pH、抗体纯度均无明显变化。无明显变化。

【技术实现步骤摘要】
一种稳定的重组人神经生长因子的液体制剂


[0001]本专利技术涉及生物制药生产
，具体为一种稳定的重组人神经生长因子的液体制剂。

技术介绍

[0002]神经生长因子(nerve growth factor，NGF)能促进中枢和外周神经元的生长、发育、分化、成熟，维持神经系统的正常功能，加快神经系统损伤后的修复。NGF广泛分布于机体各组织器官中(包括脑)，在靶组织中的浓度与交感神经和感觉神经在靶区分支的密度和mRNA的含量有关。神经生长因子家族包括：神经生长因子、脑源性神经营养因子、神经营养素
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3、神经营养素
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4/5、神经营养素
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6和神经营养素
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7等，主要为前4种。NGF为神经生长因子家族中最主要的一类，在组织中主要以前体的形式存在，在颌下腺中加工形成成熟的NGF。在胚胎发育的一定时期内，NGF为效应神经元生存所必须。
[0003]神经生长因子对许多疾病的治疗有效。对于延缓神经退行性病变，或者刺激脊髓损伤患者运动神经的生长，其效果尤为显著；神经生长因子也被用来加速烧伤康复，消减化疗和放疗的副作用，治疗压疮和根除角膜溃疡。
[0004]由于NGF为二聚体结构，其蛋白质稳定性比一般的化学和物理降解途径更复杂。如果重组蛋白质是C末端缺失NGF变异体的混合物，蛋白质的稳定性就更复杂，因此，需要一种能够使得NGF稳定的含NGF液体制剂，它能够安全有效的用于哺乳动物的治疗，尤其是用于人。现有的液体制剂在冷藏条件下稳定性依旧差，因此，提出一种稳定的重组人神经生长因子的液体制剂。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种稳定的重组人神经生长因子的液体制剂，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种稳定的重组人神经生长因子的液体制剂，包括NGF蛋白、缓冲剂体系、稳定剂以及增溶剂；
[0007]所述NGF蛋白为0.1mg/mlNGF蛋白；
[0008]所述缓冲体系包括缓冲剂以及注射用水，所述缓冲剂包括但不限于组氨酸盐酸、柠檬酸或柠檬酸钠；
[0009]所述稳定剂包括但不限于蔗糖或甘露醇；
[0010]所述增溶剂包括但不限于聚山梨酯80或聚山梨酯20。
[0011]优选的，以浓度份数计，由以下成分组成包括0.1mg/mlNGF蛋白，10～30mmol/L缓冲剂，200～260mmol/L稳定剂，0.02～0.06％(w/v)增溶剂，缓冲体系调节PH至5.5～6.5。
[0012]优选的，包括0.1mg/ml NGF蛋白，10～30mmol/L组氨酸盐酸缓冲溶液，200～270mmol/L蔗糖，0.02～0.06％(w/v)聚山梨酯80，缓冲体系调节pH至6.0～6.5。
[0013]优选的，所述氨酸盐酸缓冲溶液的浓度为20mmol/L，所述蔗糖的浓度为230mmol/
L，所述聚山梨酯80的含量为0.02％(w/v)，所述PH为6.0。
[0014]本专利技术还提供了神经生长因子的液体制剂的制备方法，包括如下步骤：
[0015]步骤一：制备缓冲体系：称取处方量的缓冲剂，加入注射用水溶解，调节pH；
[0016]步骤二：用上述步骤配制的缓冲体系对重组人神经生长因子进行原液超滤浓缩，置换重组人神经生长因子蛋白的原始缓冲体系，再加入处方量的蔗糖和聚山梨酯80，搅拌均匀，再用缓冲体系调节蛋白浓度为0.1mg/ml，经0.22μm滤膜进行无菌过滤后灌装即得。
[0017]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0018]本专利技术提供的液体制剂在储存期间能保持稳定性，具有较低的聚集体及其片段化；在2～8℃条件下，放置24个月后，制剂的外观、浓度和pH、抗体纯度均无明显变化。
具体实施方式
[0019]下面通过实施例的方式进一步说明本专利技术，所列案例只是制剂筛选试验的部分，并不能因此将本专利技术限制在所述的是实施例范围之中。下列实施例中未注明的具体条件的试验方法，按照常规方法和条件，或者按照商品说明书选择。实施例中稳定性试验，相关生物学检验按照中国药典的规范进行。实施例中所述的试剂、均为药用级，市面均有销售。
[0020]实施例1：本专利技术提供一种技术方案：一种稳定的重组人神经生长因子的液体制剂，包括NGF蛋白、缓冲剂体系、稳定剂以及增溶剂；
[0021]所述NGF蛋白为0.1mg/ml NGF蛋白；
[0022]所述缓冲体系包括缓冲剂以及注射用水，所述缓冲剂包括但不限于组氨酸盐酸、柠檬酸或柠檬酸钠；
[0023]所述稳定剂包括但不限于蔗糖或甘露醇；
[0024]所述增溶剂包括但不限于聚山梨酯80或聚山梨酯20。
[0025]优选的，以浓度份数计，由以下成分组成包括0.1mg/mlNGF蛋白，10～30mmol/L缓冲剂，200～260mmol/L稳定剂，0.02～0.06％(w/v)增溶剂，缓冲体系调节PH至5.5～6.5。
[0026]优选的，包括0.1mg/ml NGF蛋白，10～30mmol/L组氨酸盐酸缓冲溶液，200～270mmol/L蔗糖，0.02～0.06％(w/v)聚山梨酯80，缓冲体系调节pH至6.0～6.5。
[0027]优选的，所述氨酸盐酸缓冲溶液的浓度为20mmol/L，所述蔗糖的浓度为230mmol/L，所述聚山梨酯80的含量为0.02％(w/v)，所述PH为6.0。
[0028]本专利技术还提供了神经生长因子的液体制剂的制备方法，包括如下步骤：
[0029]步骤一：制备缓冲体系：称取处方量的缓冲剂，加入注射用水溶解，调节pH；
[0030]步骤二：用上述步骤配制的缓冲体系对重组人神经生长因子进行原液超滤浓缩，置换重组人神经生长因子蛋白的原始缓冲体系，再加入处方量的蔗糖和聚山梨酯80，搅拌均匀，再用缓冲体系调节蛋白浓度为0.1mg/ml，经0.22μm滤膜进行无菌过滤后灌装即得。
[0031]上述提供的液体制剂在储存期间能保持稳定性，具有较低的聚集体及其片段化；在2～8℃条件下，放置24个月后，制剂的外观、浓度和pH、抗体纯度均无明显变化。
[0032]实施例2：缓冲体系pH值的筛选
[0033]在pH5.0
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6.5、组氨酸、枸橼酸缓冲液中，配制浓度约为0.1mg/mLNGF蛋白，含230mmol/L蔗糖蔗糖、200mg/L聚山梨酯20的NGF制剂，将每种制剂过滤灌装，加塞，轧盖，封口。将样品进行40℃高温强制降解实验考察稳定性，以pH、蛋白含量、SEC(分子排阻色谱)、
Tm(熔解温度)、RP(反向色谱)为评价指标，实验结果见表1，结果表明，pH在5.0的枸橼酸缓冲体系中，高温四周出现了沉淀，其余各个处方间没有显著性差异，随着PH升高，Tm有升高趋势。综合考虑，最优选pH为6.0的组氨酸缓冲体系。
[0034]表1.pH5.0
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种稳定的重组人神经生长因子的液体制剂，其特征在于，包括NGF蛋白、缓冲剂体系、稳定剂以及增溶剂；所述NGF蛋白为0.1mg/mlNGF蛋白；所述缓冲体系包括缓冲剂以及注射用水，所述缓冲剂包括但不限于组氨酸盐酸、柠檬酸或柠檬酸钠；所述稳定剂包括但不限于蔗糖或甘露醇；所述增溶剂包括但不限于聚山梨酯80或聚山梨酯20。2.根据权利要求1所述的一种稳定的重组人神经生长因子的液体制剂，其特征在于：以浓度份数计，由以下成分组成包括0.1mg/ml NGF蛋白，10～30mmol/L缓冲剂，200～260mmol/L稳定剂，0.02～0.06％(w/v)增溶剂，缓冲体系调节PH至5.5～6.5。3.根据权利要求1所述的一种稳定的重组人神经生长因子的液体制剂，其特征在于：包括0.1mg/ml NGF蛋白，10～30mmol/L组氨酸盐酸缓冲溶液，200～270mmo...

【专利技术属性】
技术研发人员：李巍巍，石曼，罗银波，
申请(专利权)人：白帆生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：