一种快速高效的紫花苜蓿毛状根转化体系的建立方法技术

本发明专利技术公开了一种快速高效的紫花苜蓿毛状根转化体系的建立方法，所述方法，包括以下步骤：1)含有marker基因发根农杆菌Ar.1193菌液的制备；2)用步骤1的菌株对苜蓿幼苗进行浸染，并培养；3)对步骤2培养得到的苜蓿幼苗进行毛状根测定。毛状根测定。毛状根测定。

【技术实现步骤摘要】
一种快速高效的紫花苜蓿毛状根转化体系的建立方法


[0001]本专利技术涉及紫花苜蓿生物
，具体涉及一种快速高效的紫花苜蓿毛状根转化体系的建立方法。

技术介绍

[0002]紫花苜蓿(Medicago sativa L.)因产量高、品质优、适口性好、适应性广，被誉为“牧草之王”，已成为全球最重要的饲料作物之一。因紫花苜蓿传统育种周期长、时间成本和经济成本大，所以近些年对紫花苜蓿的基因功能研究、基因编辑等生物育种研究开展的如火如荼。同时，紫花苜蓿也是研究根瘤和根部病害的理想植物，这就对苜蓿相关研究的技术手段提出了更多需求，特别是亟需高效快捷的各类遗传转化体系。
[0003]近年来，紫花苜蓿根癌农杆菌介导的叶盘转化体系已成功建立，但因周期长、效率不稳定等因素，对研究根部相关基因功能和评价基因编辑编辑体系具有耗时长风险大等缺点，应用受限。而近些年研究较多的毛状根体系是一种高效、快速的研究手段，尤其是对于一些对于根癌农杆菌转化不亲和与转化效率低的植物而言，是一种十分重要的研究技术手段，可以弥补根癌农杆菌介导的遗传转化的周期长不稳定等缺陷。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种紫花苜蓿毛状根转化率的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)含有marker基因发根农杆菌Ar.1193菌液的制备；2)用步骤1的菌株对苜蓿幼苗进行浸染，并培养；3)对步骤2培养得到的苜蓿幼苗进行毛状根测定。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1所述的菌液的制备，方法如下：将marker基因转入到pCAMBIA3301超表达载体后，转到发根农杆菌Ar.1193菌株中，阳性单克隆转接于3
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5mL含有相应抗生素(Rif 10mg/mL+Kan50mg/mL)的TY液体培养基中，28
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30℃摇床培养16
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24h，将活化好的菌液4000r/min离心10min后，用500μL不含抗生素的TY液体培养基重悬备用。取200μL活化菌液，正常涂板至相应抗性的TY固体培养基中，28
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30℃培养10
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16h，得到菌液。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的TY培养基(1L)配方：胰蛋白胨(Tryptone)5g，酵母提取物(Yeast extract)3g，氯化钙(CaCl2)0.6g，灭菌备用。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2所述的浸染，方法如下：将胚根约1
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1.5cm的苜蓿幼苗切掉根尖3
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5mm后，用镊子夹住幼苗子叶，切口处轻轻蘸取TY平板上的步骤1得到的菌株后，转入改良的Fahraeus培养基的方皿中进行培养。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2所述的浸染，方法如下：将胚根约1
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1.5cm的苜蓿幼苗切掉根尖3
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5mm后，用镊子夹住幼苗子叶，切口处轻轻蘸取TY平板上的步骤1得到的菌株后，将侵染后的幼苗在Fa培养基中22℃竖直培养7d，16h光照/8h黑暗，一周后，将胚根附近长出的根完全切掉，防止假阳性的出现，但是胚根底...

【专利技术属性】
技术研发人员：丛丽丽，旦真措，张立霞，郭雨寒，刘昊，刘信，李聪，张佳怡，詹惠童，高腾，王增裕，柴茂峰，谢红丽，张昆，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：