本发明专利技术公开了一种骨髓基质干细胞冻存液及其制备方法和应用，每100ml所述骨髓基质干细胞冻存液包括：乙二醇8～12ml、猴头菇多糖1～2g、黄芩苷0.2～0.8g、羟乙基淀粉2～5g、乙酰胺1～3g、维生素C 0.1～0.3g、谷胱甘肽1～3g、青霉素0.2～0.5g、DMSO 5～8g，余量为DMEM培养基。本发明专利技术骨髓基质干细胞冻存液中通过猴头菇多糖以及黄芩苷的添加，能够保持骨髓基质干细胞活力，更好的维持长期冻存细胞后的存活率和分化能力，相比现有冻存液，显著提高了骨髓基质干细胞长期冻存复苏后细胞存活率以及分化能力。能力。
【技术实现步骤摘要】
一种骨髓基质干细胞冻存液及其制备方法和应用
[0001]本专利技术涉及细胞冻存液
，具体涉及一种骨髓基质干细胞冻存液及其制备方法和应用。
技术介绍
[0002]骨髓基质细胞(bone marrow stromal cell)，是指成体骨髓中的一类多能干细胞。具有分化成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和其他几种结缔组织细胞(如腱细胞)的潜能，亦可转分化成心肌细胞、骨骼肌细胞；因此，骨髓基质干细胞的应用越来越广泛。
[0003]骨髓基质干细胞在体外经过连续培养、冻存和复苏后仍具有分化潜能，在组织损伤修复中具有重要作用，因此，研究一种能够长期有效冻存骨髓基质干细胞并维持其优异的分化能力尤为关键。
[0004]目前，骨髓基质干细胞的冻存液一般采用二甲基亚砜、培养基、血清进行细胞冻存，但现有冻存液对骨髓基质干细胞的冻存效果并不理想，细胞存活率偏低。
[0005]有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
[0006]本专利技术的目的在于提供一种骨髓基质干细胞冻存液及其制备方法和应用，该骨髓基质干细胞冻存液能够长期保存骨髓基质干细胞，并具有较高的细胞存活率。
[0007]为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：
[0008]本专利技术第一方面提供了一种骨髓基质干细胞冻存液，每100ml所述骨髓基质干细胞冻存液包括：
[0009]乙二醇8～12ml、猴头菇多糖1～2g、黄芩苷0.2～0.8g、羟乙基淀粉2～5g、乙酰胺1～3g、维生素C 0.1～0.3g、谷胱甘肽1～3g、青霉素0.2～0.5g、DMSO 5～8g，余量为DMEM培养基。
[0010]优选地，每100ml所述骨髓基质干细胞冻存液包括：
[0011]乙二醇10ml、猴头菇多糖1.5g、黄芩苷0.5g、羟乙基淀粉3g、乙酰胺2g、维生素C 0.2g、谷胱甘肽2g、青霉素0.3g、DMSO 6.5g，余量为DMEM培养基。
[0012]本专利技术第二方面提供一种上述骨髓基质干细胞冻存液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
[0013](a)将乙二醇、羟乙基淀粉、乙酰胺、维生素C、谷胱甘肽和青霉素溶解于DMEM培养基中，过滤除菌，得到混合物；
[0014](b)将猴头菇多糖和黄芩苷溶解于混合物，再次过滤除菌，即得所述骨髓基质干细胞冻存液。
[0015]本专利技术第三方面提供了一种上述骨髓基质干细胞冻存液在骨髓基质干细胞冻存中的应用。
[0016]本专利技术第四方面提供了一种骨髓基质干细胞的冻存方法，采用上述骨髓基质干细
胞冻存液进行冻存。
[0017]优选地，所述冻存液中骨髓基质干细胞的浓度为(1～20)
×
106个/ml。
[0018]优选地，所述冻存液中骨髓基质干细胞的浓度为1
×
107个/ml。
[0019]优选地，所述冻存方法包括如下步骤：
[0020]将骨髓基质干细胞接种至所述冻存液中，先在0～4℃放置10～20min，再在﹣15℃预冻1～2h，然后，以2～4℃/min降温至﹣80℃并保持2～5h，最后，转移至液氮中保存。
[0021]优选地，所述冻存方法包括如下步骤：
[0022]将骨髓基质干细胞接种至所述冻存液中，先在2℃放置15min，再在﹣10～﹣20℃预冻2h，然后，以3℃/min降温至﹣80℃并保持4h，最后，转移至液氮中保存。
[0023]与现有技术相比，本专利技术的有益效果至少包括：
[0024]本专利技术骨髓基质干细胞冻存液中通过猴头菇多糖以及黄芩苷的添加，能够保持骨髓基质干细胞活力，更好的维持长期冻存细胞后的存活率和分化能力，相比现有冻存液，显著提高了骨髓基质干细胞长期冻存复苏后细胞存活率以及分化能力。
具体实施方式
[0025]下面将结合实施例对本专利技术技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本专利技术的保护范围。
[0026]需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本专利技术所属领域技术人员所理解的通常意义。
[0027]实施例1
[0028]本实施例为一种骨髓基质干细胞冻存液，每100ml该骨髓基质干细胞冻存液包括：
[0029]乙二醇8ml、猴头菇多糖1g、黄芩苷0.8g、羟乙基淀粉2g、乙酰胺1g、维生素C 0.3g、谷胱甘肽3g、青霉素0.2g、DMSO 5g，余量为DMEM培养基。
[0030]上述骨髓基质干细胞冻存液的制备方法，包括如下步骤：
[0031](a)将乙二醇、羟乙基淀粉、乙酰胺、维生素C、谷胱甘肽和青霉素溶解于DMEM培养基中，过滤除菌，得到混合物；
[0032](b)将猴头菇多糖和黄芩苷溶解于混合物，再次过滤除菌，即得所述骨髓基质干细胞冻存液。
[0033]实施例2
[0034]本实施例为一种骨髓基质干细胞冻存液，每100ml该骨髓基质干细胞冻存液包括：
[0035]乙二醇12ml、猴头菇多糖2g、黄芩苷0.2g、羟乙基淀粉5g、乙酰胺3g、维生素C 0.1g、谷胱甘肽1g、青霉素0.5g、DMSO 8g，余量为DMEM培养基。
[0036]上述骨髓基质干细胞冻存液的制备方法，包括如下步骤：
[0037](a)将乙二醇、羟乙基淀粉、乙酰胺、维生素C、谷胱甘肽和青霉素溶解于DMEM培养基中，过滤除菌，得到混合物；
[0038](b)将猴头菇多糖和黄芩苷溶解于混合物，再次过滤除菌，即得所述骨髓基质干细胞冻存液。
[0039]实施例3
[0040]本实施例为一种骨髓基质干细胞冻存液，每100ml该骨髓基质干细胞冻存液包括：
[0041]乙二醇10ml、猴头菇多糖1.5g、黄芩苷0.5g、羟乙基淀粉3g、乙酰胺2g、维生素C 0.2g、谷胱甘肽2g、青霉素0.3g、DMSO 6.5g，余量为DMEM培养基。
[0042]上述骨髓基质干细胞冻存液的制备方法，包括如下步骤：
[0043](a)将乙二醇、羟乙基淀粉、乙酰胺、维生素C、谷胱甘肽和青霉素溶解于DMEM培养基中，过滤除菌，得到混合物；
[0044](b)将猴头菇多糖和黄芩苷溶解于混合物，再次过滤除菌，即得所述骨髓基质干细胞冻存液。
[0045]实施例4
[0046]本实施例为一种骨髓基质干细胞的冻存方法，该骨髓基质干细胞的冻存方法包括如下步骤：
[0047]按照冻存液中骨髓基质干细胞的浓度为1
×
106个/ml，将骨髓基质干细胞接种至实施例1的冻存液中，先在0℃放置10min，再在﹣20℃预冻1h，然后，以2℃/min降温至﹣80℃并保持2h，最后，转移至液氮中保存。
[0048]实施例5
[0049]本实施例为一种骨髓基质干细胞的冻存方法，该骨髓基质干细胞的冻存方法包括如下步骤：
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种骨髓基质干细胞冻存液，其特征在于，每100ml所述骨髓基质干细胞冻存液包括：乙二醇8～12ml、猴头菇多糖1～2g、黄芩苷0.2～0.8g、羟乙基淀粉2～5g、乙酰胺1～3g、维生素C 0.1～0.3g、谷胱甘肽1～3g、青霉素0.2～0.5g、DMSO 5～8g，余量为DMEM培养基。2.根据权利要求1所述的骨髓基质干细胞冻存液，其特征在于，每100ml所述骨髓基质干细胞冻存液包括：乙二醇10ml、猴头菇多糖1.5g、黄芩苷0.5g、羟乙基淀粉3g、乙酰胺2g、维生素C 0.2g、谷胱甘肽2g、青霉素0.3g、DMSO 6.5g，余量为DMEM培养基。3.权利要求1或2所述的骨髓基质干细胞冻存液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(a)将乙二醇、羟乙基淀粉、乙酰胺、维生素C、谷胱甘肽和青霉素溶解于DMEM培养基中，过滤除菌，得到混合物；(b)将猴头菇多糖和黄芩苷溶解于混合物，再次过滤除菌，即得所述骨髓基质干细胞冻存液。4.权利要求1或2所述的骨髓基质干细胞冻存液在骨...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘保池，高飞，郭秋平，
申请(专利权)人：湖南华启细胞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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