一种基于生物发光测定蛋白连接酶活力的组合物、方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种基于生物发光测定蛋白连接酶活力的新方法，该方法对各种蛋白连接酶普遍适用，可用于已知蛋白连接酶的表征、活力跟踪及抑制剂筛选，也可用于从植物及其它来源筛选各种新型蛋白连接酶。本发明专利技术的特征是通过重组表达或其它方法在无活力的NanoLuc萤光素酶大片段(LgBiT)的C

【技术实现步骤摘要】
一种基于生物发光测定蛋白连接酶活力的组合物、方法及其应用


[0001]本专利技术涉及生物检测、酶学及基因工程技术，具体来说，本专利技术涉及一种基于生物发光测定各种蛋白连接酶活力的新方法，包括该方法的关键设计、组分、步骤以及该方法的各种应用。

技术介绍

[0002]蛋白连接酶(或称多肽连接酶)是一类特殊的蛋白酶，它们可以通过转肽机制将两条肽链通过肽键连接在一起，或将一条肽链通过肽键形成环肽。目前研究较多的蛋白连接酶包括革兰氏阳性细菌来源的分选酶(sortase)和一些植物来源的天冬酰胺蛋白酶(asparaginyl endopeptidase，缩写为AEP)型蛋白连接酶，如蝶豆(Clitoria ternatea)来源的Butelase
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1和蓝花耳草(Oldenlandia affinis)来源的OaAEP1等。蛋白连接酶广泛用于蛋白质和多肽的修饰及环肽合成，具有重要的应用开发价值，因此需要对已知蛋白连接酶进行活力表征，并不断筛选鉴定各种新型蛋白连接酶，以期获得各种性能更优、更实用的蛋白连接酶。目前测定蛋白连接酶活力的方法通常本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于测定蛋白链接酶活力的组合物，包括对应的连接型LgBiT蛋白和连接型SmBiT；所述连接型LgBiT蛋白的特征在于在LgBiT的C
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端融合待测蛋白连接酶识别的氨基酸序列；连接型SmBiT的特征在于在SmBiT的N
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端引入待测蛋白连接酶识别的亲核进攻序列。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：当待测蛋白连接酶为Sortase A连接酶时，所述LgBiT连接型蛋白为LgBiT
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long
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LPETG，其氨基酸序列如Seq ID NO.6所示；所述SmBiT连接型蛋白为4G
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SmBiT，其氨基酸序列如Seq ID NO.15所示。3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，当待测蛋白连接酶为天冬酰胺蛋白酶型蛋白连接酶时，所述LgBiT连接型蛋白为LgBiT
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NHV，其氨基酸序列如Seq ID NO.8所示；所述SmBiT连接型蛋白GI
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SmBiT，其氨基酸序列如Seq ID NO.16所示。4.根据权利要求1所述的，其特征在于：当待测蛋白连接酶为脯氨酰胺蛋白酶型蛋白连接酶时，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭占云，张聪慧，邵晓霞，
申请(专利权)人：同济大学，
类型：发明
国别省市：