本发明专利技术涉及一种重组人轮状病毒VP8抗原(VP8P[6])的单克隆抗体及其应用。所述的重组人轮状病毒VP8P[6]抗原的单克隆抗体，其重链可变区(VH)氨基酸序列为如SEQ ID NO.1所示，轻链(VL+CL)氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。NO.2所示。NO.2所示。
【技术实现步骤摘要】
检测重组人轮状病毒VP8抗原(VP8 P[6])的单克隆抗体及其应用
[0001]本专利技术属于医药生物
，具体的，涉及一种重组人轮状病毒VP8抗原(VP8 P[6])的单克隆抗体及其应用。
技术介绍
[0002]轮状病毒是导致全世界范围内儿童、婴儿腹泻的最常见病原体，是引起严重脱水性腹泻的最常见原因，几乎每个孩子在5岁之前都被轮状病毒感染过，对经济造成巨大的损失。由于缺乏有效的治疗方式，由轮状病毒引发的疾病每年导致约21.5万名婴儿死亡，主要集中于低收入国家。
[0003]人轮状病毒属于呼肠孤病毒科轮状病毒属，为无包膜RNA病毒，颗粒直径约75nm，由三层二十面体蛋白衣壳组成。其基因组为包含11个节段的双链RNA，编码6个结构蛋白(VP1、VP2、VP3、VP4、VP6、VP7)和5个非结构蛋白(NSP1、NSP2、NSP3、NSP4、NSP5)，內壳蛋白为VP6，核蛋白为VP1、VP2和VP3，最外层由两种蛋白形成，VP4和VP7，其中VP4形成刺突样结构。在轮状病毒感染细胞过程中，VP4蛋白经胰蛋白酶作用，裂解形成VP5*和VP8两个功能多肽片段。VP8蛋白主要参与受体识别，对病毒宿主范围和病毒感染具有重要作用。感染过程中宿主产生的VP8特异性单克隆抗体和抗血清，具有中和病毒的能力，可以阻断病毒与宿主细胞的结合和侵入。
[0004]根据VP8核苷酸序列差异，可以将A组轮状病毒分成不同的P基因型，其中P[8]最为常见，P[4]次之，P[6]主要分布在非洲地区。P[4]、P[6]和P[8]型的占比超过90％，所以基于VP8*抗原开发三价疫苗是目前全球轮状病毒候选疫苗的通用设计。
[0005]轮状病毒疫苗研发生产过程中对疫苗主要有效成分的质量监控非常重要。酶联免疫吸附试验(ELISA)具有灵敏、快速、耐受性强的优点，可以用于重组人轮状病毒VP8 P[6]抗原生产过程中的质量控制。
[0006]基于此，提出本专利技术。
技术实现思路
[0007]本专利技术首先涉及一种检测重组人轮状病毒VP8 P[6]抗原的单克隆抗体，其重链可变区(VH)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：
[0008]SEQ ID NO.1：
[0009]EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFPFSSYDMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGSYTNYPDSVKGRFTISRDNARNTLYLQMSSLRSEDTALYYCTKQEVRRFAYWGQGTLVTVSA；
[0010]轻链(VL+CL)氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，
[0011]SEQ ID NO.2：
[0012]DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTITNVQSEDLAEYFCQQYNSYPLTFGGGTRLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDI
NVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC。
[0013]优选的，所述的单克隆抗体为IgG型抗体，的Fc为鼠源Fc；
[0014]优选的，
[0015]所述的重组人轮状病毒VP8 P[8]抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示：
[0016]SEQ ID NO.3：
[0017]DKISDVSTIVPYIGPALNI GSGSG LDGPYQPTTFTPPNDYWILINSNTNGVVYESTNNSDFWTAVVAIEPHVNPVDRQYTIFGESKQFNVSNDSNKWKFLEMFRSSSQNEFYNRRTLTSDTRLVGILKYGGRVWTFHGETPRATTDSSSTANLNNISITIHSEFYIIPRSQESKCNEYINNGL
[0018]其中包括：
[0019]前导序列：DKISDVSTIVPYIGPALN
[0020]连接肽序列：GSGSG
[0021]剩余为P[8]△
VP8*序列。
[0022]所述的重组人轮状病毒VP8 P[6]抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示：
[0023]IDKISDVSTIVPYIGPALNI GSGSG VLDGPYQPTNFKPPNDYWILLNPTNQQVVLEGTNKTDVWVALLLVEPNVTNQSRQYTLFGETKQITVENNTNKWKFFEMFRNNVSAEFQHKRTLTSDTKLAGFMKFYNSVWTFHGETPHATTDYSSTSNLSEVETVIHVEFYIIPRSQESKCSEYINTGL
[0024]其中包括：
[0025]前导序列：IDKISDVSTIVPYIGPALNI；
[0026]连接肽序列：GSGSG；
[0027]剩余为P[6]△
VP8*序列。
[0028]所述的重组人轮状病毒VP8 P[4]抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示：
[0029]IDKISDVSTIVPYIGPALNI GSGSG VLDGPYQPTTFKPPNDYWLLISSNTDGVVYESTNNSDFWTAVIAVEPHVSQTNRQYVLFGENEQFNIENSSDKWKFFEMFKGSSQSDFSNRRTLTSNNRLVGMLKYGGRVWTFHGETPRATTDSSNTADLNNISIIIHSEFYIIPRSQESKCNEYINNGL
[0030]其中包括：
[0031]前导序列：IDKISDVSTIVPYIGPALNI
[0032]连接肽序列：GSGSG
[0033]剩余P[4]△
VP8*序列(64
‑
223，GenBank:AB848998(Japan))。
[0034]本专利技术还涉及编码所述单克隆抗体的核酸片段。
[0035]本专利技术还涉及所述的单克隆抗体在制备检测试剂盒中的应用，所述的检测试剂盒为：检测重组人轮状病毒VP8 P[6]抗原的浓度的检测试剂盒。
[0036]优选的，所述的检测试剂盒为基于阻断ELISA检测原理的检测试剂盒。
[0037]一种检测重组人轮状病毒VP8 P[6]抗原的检测试剂盒，所述的试剂盒包括：
[0038](1)检测有效量的所述单克隆抗体；
[0039](2)必要的二抗、显色试剂、缓冲试剂；
[0040]所述单克隆抗体的重链可变区(VH)氨基酸序列为如SEQ ID NO.1所示，轻链(VL+CL)氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0041]优选的，所述的单克隆抗体为IgG型抗体，Fc为鼠源Fc。
[0042]本专利技术的有益效果在于，
[0043]本专利技术所述的单克隆抗体205单抗，具有本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种检测重组人轮状病毒VP8 P[6]抗原的单克隆抗体，其特征在于吗，其重链可变区(VH)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：轻链(VL+CL)氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；优选的，所述的人轮状病毒VP8 P[6]抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体为IgG型抗体，Fc为鼠源Fc。3.编码权利要求1或2所述单克隆抗体的核酸片段。4.权利要求1或2所述的单克隆抗体在制备检测试剂盒中的应用，所述的检测试剂盒为：...
【专利技术属性】
技术研发人员：方习静，陈静，胡敏，杨增云，张莉，管子超，
申请(专利权)人：上海迈科康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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