一种橙黄乳菇GAF-M-LA1菌株及其分离扩培方法技术

本发明专利技术公开了一种橙黄乳菇GAF

【技术实现步骤摘要】
一种橙黄乳菇GAF
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M
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LA1菌株及其分离扩培方法


[0001]本专利技术涉及菌株分离扩培的
，尤其涉及一种橙黄乳菇GAF
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M
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LA1菌株分离及扩培方法。

技术介绍

[0002]橙黄乳菇是一类常见的菌根性食用菌，主要分布于我国西南地区，其子实体味道鲜美，营养价值高，且富含多种生物活性物质，具有提高人体免疫力，抗癌等功效，深受消费者喜爱。市面上的橙黄乳菇主要依靠野生产地的人工采摘，产量不稳定，供应量小，且随着过度采摘和生境破坏，野外橙黄乳菇数量急剧减少。国内外关于橙黄乳菇的研究主要集中在遗传分类研究、子实体营养成分分析等方面，其菌肉组织培养基及高效菌种扩大繁殖研究较少。随着生活品质提高，野生食用菌市场需求量大，乳菇类真菌的驯化栽培成为食用菌产业中的研究热点。
[0003]乳菇类菌根获取和子实体的人工驯化栽培技术中，因菌株本身活力低下，菌种分离成功率低，扩培生长缓慢，继代培养菌种退化率高，导致菌根合成率低，因此驯化栽培较困难。常用的的真菌分离培养基中橙黄乳菇极易受到杂菌污染而导致分离失败，且在扩大繁殖过程中生长速度缓慢，随着扩培次数增加，菌株活力不断下降。迄今尚无针对橙黄乳菇优质高效菌种的分离及扩大繁殖方法的报道和研究，难以高效获取橙黄乳菇优质菌株进行人工驯化栽培。因此，急需寻找一种能够高效分离高纯度的橙黄乳菇菌种的方法、得到的橙黄乳菇菌丝可以进行多次扩培并且生长快速。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的是提供一种橙黄乳菇GAF
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M
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LA1菌株及其分离扩培方法，以解决橙黄乳菇菌株分离后因菌丝纯度低，导致的菌丝生长慢、扩培困难的问题。
[0005]本专利技术通过以下技术手段解决上述技术问题：
[0006]本专利技术的目的是提供了一种橙黄乳菇GAF
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M
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LA1菌株，所述橙黄乳菇为乳菇属的真菌，保藏信息如下：保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日为2022年06月10日，保藏编号为CGMCC NO.40197，建议分类命名为：橙黄乳菇(Lactarius akahatsu),如序列1“橙黄乳菇GAF
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M
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LA1菌株ITS序列”所示：
[0007][0008]本专利技术的又一目的在于提供了一种橙黄乳菇GAF
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M
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LA1菌株的分离扩培方法，具体方法如下：
[0009]S1.橙黄乳菇GAF
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M
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LA1菌株分离：将外形健康正常、无病虫害、新鲜幼嫩的橙黄乳菇子实体用60
‑
75％酒精处理表面，在无菌条件下取菌盖中间部分切成约0.5
×
0.2cm长条形得到橙黄乳菇菌肉组织，无菌条件下将菌肉组织接到分离培养基上，于生化培养箱中在温度24
±
1℃，湿度60％
‑
80％的条件下避光培养15
‑
20天，分离培养两代后得到高纯度生长旺盛的橙黄乳菇GAF
‑
M
‑
LA1菌株。
[0010]对分离得到橙黄乳菇GAF
‑
M
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LA1菌株进行序列分析，获得了全长为624bp的序列，该橙黄乳菇菌种含有如PatentIn version 3.5NO.1所示的ITS序列，通过https://www.ncbi.nlm.nih.gov/中Nucleotide BLAST对上述ITS序列结果鉴定为橙黄乳菇，序列号为：ON248533。
[0011]S2.橙黄乳菇GAF
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M
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LA1菌株扩培：将橙黄乳菇菌种接种于液体扩培培养基，置于生化培养箱中在温度24
±
1℃，湿度60％
‑
80％的条件下避光培养40
‑
60天得到扩培后的橙黄乳菇GAF
‑
M
‑
LA1菌株。
[0012]进一步，所述步骤S1中分离培养基包括以下质量份原料：葡萄糖1.0
‑
4.0份、磷酸氢二钾0.3
‑
0.6份、氯化铵0.1
‑
0.3份、七水硫酸镁0.05
‑
0.2份、维生素B10.02
‑
0.06份、1wt％氯化钠溶液1.0
‑
3.0份、1wt％氯化钙溶液3
‑
6份、1wt％氯化铁溶液0.5
‑
2.0份、琼脂15
‑
25份。
[0013]进一步，所述步骤S2中液体扩培培养基包括以下原料：新鲜马铃薯汁、植物幼根混合汁液、橙黄乳菇粗酶液和营养物质；
[0014]所述新鲜马铃薯汁、植物幼根混合汁液、橙黄乳菇粗酶液和营养物质的质量比为：(10
‑
20)：(5
‑
15)：(2
‑
4)：(0.5
‑
1.5)；
[0015]所述营养物质包括以下质量份原料：葡萄糖1
‑
3份、麦芽浸粉0.3
‑
0.6份、磷酸氢二钾0.3
‑
0.6份、氯化铵0.3
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0.5份、七水硫酸镁0.1
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0.2份、维生素B10.03
‑
0.06份、维生素B60.03
‑
0.06份、1wt％氯化钠溶液2
‑
3份、1wt％氯化钙溶液3
‑
6份、1wt％氯化铁1
‑
2份。
[0016]进一步，本专利技术还提供了一种液体扩培培养基的制备方法，具体步骤如下：
[0017]将新鲜马铃薯汁和植物幼根混合汁液混合均匀后，加入橙黄乳菇粗酶液于40
‑
80kHz条件下超声使橙黄乳菇粗酶液均匀分布，于25
‑
28℃条件下搅拌2
‑
4h后，于转速为4000
‑
6000r/min的条件下，离心分离去除沉淀取上清液，与营养物质混合无菌过滤后制得液体扩培培养基。
[0018]再进一步，所述植物幼根混合汁液的制备方法如下：
[0019]将马尾松幼根、芒萁幼根和中华绣线菊幼根分别倒入粉碎机中粉碎后得到粒径为400
‑
600μm植物幼根混合粉碎物，倒入厌氧发酵罐后中，在25
‑
35℃下发酵液化5
‑
8天后，在转速为4000
‑
6000r/min的条件下，离心3
‑
5min后进行无菌过滤得到植物幼根混合汁液。
[0020]再进一步，所述橙黄乳菇粗酶液的制备方法如下：
[0021本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种橙黄乳菇GAF
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M
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LA1菌株，其特征在于，一种橙黄乳菇GAF
‑
M
‑
LA1菌株，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏日为2022年06月10日，保藏编号为CGMCC NO.40197。2.一种橙黄乳菇GAF
‑
M
‑
LA1菌株的分离扩培方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：S1.橙黄乳菇GAF
‑
M
‑
LA1菌株分离：取幼嫩橙黄乳菇子实体，消毒切块得到0.5
×
0.2cm长条形菌肉组织；无菌条件下将菌肉组织接种到分离培养基上，置于生化培养箱中避光培养15
‑
20天，分离培养两代后得到高纯度生长旺盛的橙黄乳菇GAF
‑
M
‑
LA1菌株；S2.橙黄乳菇GAF
‑
M
‑
LA1菌株扩培：将橙黄乳菇菌种接种于液体扩培培养基，置于生化培养箱中在温度24
±
1℃，湿度60％
‑
80％的条件下避光培养40
‑
60天得到扩培后的橙黄乳菇GAF
‑
M
‑
LA1菌株。3.根据权利要求2所述的一种橙黄乳菇GAF
‑
M
‑
LA1菌株的分离扩培方法，其特征在于，所述步骤S1中分离培养基包括以下质量份原料：葡萄糖1.0
‑
4.0份、磷酸氢二钾0.3
‑
0.6份、氯化铵0.1
‑
0.3份、七水硫酸镁0.05
‑
0.2份、维生素B10.02
‑
0.06份、1wt％氯化钠溶液1.0
‑
3.0份、1wt％氯化钙溶液3
‑
6份、1wt％氯化铁溶液0.5
‑
2.0份、琼脂15
‑
25份。4.根据权利要求3所述的一种橙黄乳菇GAF
‑
M
‑
LA1菌株的分离扩培方法，其特征在于，所述步骤S2中液体扩培培养基包括以下原料：新鲜马铃薯汁、植物幼根混合汁液、橙黄乳菇粗酶液和营养物质；所述新鲜马铃薯汁、植物幼根混合汁液、橙黄乳菇粗酶液和营养物质的质量比为：(10
‑
20)：(5
‑
15)：(2
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4)：(0.5
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1.5)；所述营养物质包括以下质量份原料：葡萄糖1
‑
3份、麦芽浸粉0.3
‑
0.6份、磷酸氢二钾0.3
‑
0.6份、氯化铵0.3
‑
0.5份、七水硫酸镁0.1
‑
0.2份、维生素B10.03
‑
0.06份、维生素B60.03

【专利技术属性】
技术研发人员：张时馨，耿阳阳，胡伯凯，刘亚娜，王纪辉，郭金鹏，
申请(专利权)人：贵州省核桃研究所，
类型：发明
国别省市：