一种检测白血病干细胞的检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种检测白血病干细胞的检测试剂盒。本发明专利技术针对白血病细胞的IL1RAP标志物蛋白制备并获得了特异性的单克隆抗体，该抗体能够有效的识别白血病细胞的IL1RAP的表达量。将其制备成为相应的试剂盒可以用于检测和识别IL1RAP，应用价值较大。应用价值较大。应用价值较大。

【技术实现步骤摘要】
一种检测白血病干细胞的检测试剂盒


[0001]本申请涉及生物领域，具体的涉及一种检测白血病干细胞的检测试剂盒。

技术介绍

[0002]白细胞介素
‑
1(IL
‑
1)通过刺激T淋巴细胞、B淋巴细胞增殖，诱导产生黏附分子及其他炎症细胞因子等方式，在启动免疫炎症反应的级联事件中发挥重要作用。IL
‑
1可与白细胞介素
‑
1受体(IL
‑
1R)、白细胞介素
‑
1受体辅助蛋白(IL
‑
1RAP)结合形成复合物，募集下游衔接蛋白—髓系分化初级反应蛋白88激活IL
‑
1受体相关激酶(IRAKs)及其他蛋白激酶，在感染、组织损伤或应激过程中诱导急性期反应、促炎介质的合成。
[0003]白细胞介素1受体辅助蛋白(IL
‑
1RAP)是IL
‑
1信号通路的一种辅助蛋白，其定位于染色体3q28，它与IL
‑
1RI同属于免疫球蛋白超家族成员。IL
‑
1RAP共有6种不同的剪接体，编码3种不同形式蛋白(I型、Ⅱ型、Ⅲ型)。相关研究表明，mIL
‑
1RAP和sIL
‑
1RAP在IL
‑
1信号传导中的作用是相反的，mIL
‑
1RAP通过与IL
‑
1/IL
‑
1RI的复合物结合启动IL
‑
1的信号转导。sIL
‑
1RAP不含跨膜区及胞内结构域，其被分泌到细胞外，可以竞争性抑制mIL
‑
1RAP与IL
‑
1/IL
‑
1RI复合物之间的作用。此外，它可以使IL
‑
1仅和IL
‑
1β与人Ⅱ型IL
‑
1受体结合的亲和力增加约100倍，从而增强了IL
‑
1RⅡ抑制IL
‑
1信号传导的能力。众所周知，IL
‑
1与多种疾病的发生、发展密切相关，IL
‑
1RAP作为其辅助蛋白发挥着重要的生物学功能。
[0004]IL
‑
lRAcP及IL
‑
lRAcPb蛋白拥有相同的细胞外N
‑
端结构，但细胞内C
‑
端结构存在差异。对于体外培养的基因敲除小鼠的海马神经元，给予IL
‑
ip刺激不能使其IkB、P38、Src发生磷酸化，进而不能释放NF
‑
kB易位人细胞核；而对于体外培养的基因敲除小鼠的海马神经元，给予IL
‑
1刺激则不影响P38磷酸化。另外，与野生型及II1rap基因敲除型小鼠相比，Il
‑
1racpb基因敲除小鼠更易受中枢神经系统局部炎症的刺激，并表现出更严重的神经元变性。向野生型小鼠腹腔注射IL
‑
1或脂多糖，下丘脑
‑
垂体
‑
肾上腺轴可被激活，血清中皮质醇及IL
‑
6水平均有所升高。与对照组野生型小鼠相比，向基因敲除小鼠腹腔注射脂多糖可引起血清中皮质醇和IL
‑
6水平显著升高，而注射IL
‑
1β后小鼠血清中皮质醇升高不显著且IL
‑
6维持在基础水平。此外，向基因敲除小鼠的脑室注射IL
‑
lβ后，小鼠血清中皮质醇升高亦不显著，IL
‑
6亦维持在基础水平。然而，在II1rap表达缺陷的小鼠淋巴瘤细胞中，过表达外源性后，给予小鼠IL
‑
1β刺激可激活P38、ERK1/2及JNK,而过表达外源性Il
‑
1racpb则不能引起相同的效应。上述结果提示，IL1RAP是个体接受IL
‑
1刺激后进行免疫应答过程中不可缺少的重要成分。
[0005]基于IL1RAP标志物在白血病细胞中的重要作用，针对该标记物进行研究已经是重要的研究方向。研究表明流式细胞术检测慢性髓系白血病患者干、祖细胞亚群(CD34+、CD34+CD38
‑
)上的IL1RAP表达水平明显高于正常人。IL1RAP作为白血病干细胞(LSC)的表面标志，和CML胞内标志BCR
‑
ABL融合基因及Ph染色体密切相关。分析不同分期CML患者IL1RAP表达情况发现，无论治疗前、治疗后(治疗方案：造血干细胞移植、酪氨酸激酶抑制剂、羟基脲)IL1RAP蛋白随着CML疾病进展表达上调。IL1RAP表达和血常规及年龄、性别的相关性分析结
果显示，IL1RAP除了和中性粒细胞呈负相关以外，和其他指标无统计学相关性。结论IL1RAP作为LSC的新型标志蛋白，和CML临床分期密切相关。

技术实现思路

[0006]本专利技术克服现有技术的缺陷，提供了一种特异性检测白细胞的方法。
[0007]具体的本专利技术通过检测白细胞介素
‑
1受体辅助蛋白的表达量来实现的。
[0008]“白细胞介素
‑
1受体辅助蛋白”、“IL1RAP”和“IL1
‑
RAP”特定地包括人IL1RAP蛋白，例如在GenBankAccessionNo.AAB84059，NP_002173.1和UniProtKB/Swiss
‑
ProtAccessionNo.Q9NPH3
‑
1中公开的(另见Huang等人，1997，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.94(24)，12829
‑
12832)。IL1RAP在科学文献中也已知为IL1R3、C3orf13、FLJ37788、IL
‑
1RAcP和EG3556。
[0009]进一步的，本专利技术提供了一种特异性针对IL1RAP的单克隆抗体，该抗体的重链可变区的氨基酸序列以及轻链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1和2所示。
[0010]进一步的，本专利技术提供了特异性针对IL1RAP的单克隆抗体在制备用于检测细胞中IL1RAP表达量的试剂中的用途。
[0011]进一步，本专利技术还提供了一种鉴别能够结合至IL1RAP的的方法是将蛋白质暴露于该抗体。
[0012]进一步的，本专利技术还提供了一种鉴别的试剂盒。所述试剂盒含有本专利技术的单克隆抗体。
[0013]选地或另外地，所述试剂盒可包含校准物或对照，和/或用于进行测定的至少一种容器(例如，管、微量滴定板或条带，其可以已经包被有单克隆抗体)，和/或缓冲液，诸如测定缓冲液或洗涤缓冲液，其任一个都可提供为浓缩溶液、用于可检测标记物的底物溶液(如酶标记物)或终止溶液。优选地，试剂盒包含所有组分，即执行测定所必需的试剂、标准物、缓冲剂、稀释剂等。指导还可以包括用于产生标准曲线的指导。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种IL1RAP单克隆抗体，其中所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。2.一种白血病干细胞IL1RAP标志物检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒中含有IL1RAP单克隆抗体，其中所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID...

【专利技术属性】
技术研发人员：常学梅，张弘毅，
申请(专利权)人：广州东秀科技有限公司，
类型：发明
国别省市：