SMIM26蛋白作为肾癌临床生物标记物的应用制造技术

本发明专利技术公开了SMIM26蛋白作为肾癌临床生物标记物的应用。本发明专利技术采用免疫组化的方法检测了SMIM26蛋白在泛癌组织和相邻癌旁样本中的表达情况，发现SMIM26蛋白特异性的在肾组织和肾癌组织中显著差异表达，其在肾透明细胞癌中低表达，而在癌旁组织中高表达，并且其表达量和肾癌病人的存活时间相关，因此，SMIM26蛋白可作为肾癌临床诊断和预后生物标记物。另外，高表达SMIM26蛋白的肾癌病人存活时间更长，因此，还可将SMIM26用于肾癌治疗方面。还可将SMIM26用于肾癌治疗方面。还可将SMIM26用于肾癌治疗方面。

【技术实现步骤摘要】
SMIM26蛋白作为肾癌临床生物标记物的应用


[0001]本专利技术属于医药
，特别涉及SMIM26蛋白作为肾癌临床生物标记物的应用。

技术介绍

[0002]肾细胞癌(RCC)是发生于肾小管上皮细胞的恶性肿瘤，是最常见的肾脏恶性肿瘤。肾癌早期诊断不明显，临床中大部分肾癌患者在诊断时已经发展为中晚期，严重影响治疗效果。由于缺乏有效的早期筛查生物标志物，超过15％的肾癌患者在临床诊断时已发展为远处转移，转移性肾癌患者5年生存率不到10％。因此探索新的肾癌生物标志物和治疗靶点，才有望提高肾癌早期诊断率和生存率。
[0003]SMIM26(Small Integral Membrane Protein 26)是由长链非编码RNA
‑
LINC00493编码的定位于线粒体的未知功能的新蛋白质。除此以外，目前关于SMIM26蛋白在肿瘤中的表达情况没有任何报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供检测SMIM26蛋白的表达水平的试剂在制备用于肾癌预后风险预测和/或诊断产品中的应用。
[0005]本专利技术的另一目的在于提供SMIM26蛋白在制备治疗肾癌的药物中的应用。
[0006]本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
[0007]检测SMIM26蛋白的表达水平的试剂在制备用于肾癌预后风险预测和/或诊断产品中的应用。
[0008]所述的SMIM26蛋白为由长链非编码RNA
‑
LINC00493编码的蛋白，其NCBI登录号为：NM_001348957.2。
[0009]所述的肾癌为肾透明细胞癌。
[0010]所述的产品包括试剂盒、试纸或芯片。
[0011]本专利技术结合免疫组化实验发现，SMIM26蛋白在肾癌中低表达，而在(肾癌)癌旁组织中高表达，因此，该SMIM26蛋白为肾癌提供一种新的诊断和预后生物标志物。
[0012]SMIM26蛋白在制备用于治疗肾癌的药物中的应用。
[0013]本专利技术通过实验发现，高表达SMIM26蛋白的肾癌病人存活时间更长，因此，可将SMIM26蛋白用于肾癌治疗方面。
[0014]所述的肾癌为肾透明细胞癌。
[0015]本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0016]1、本专利技术采用免疫组化的方法首次检测了SMIM26在泛癌组织和相邻癌旁样本中的表达情况，发现SMIM26蛋白特异性的在肾组织和肾癌组织中显著差异表达，其在肾透明细胞癌(ccRCC)中低表达，而在癌旁组织中高表达，并且其表达量和ccRCC病人的存活时间相关，可以作为一个高效率的ccRCC临床诊断的生物标记物。
[0017]2、本专利技术中大样本肾癌和癌旁免疫组织化学分析和生存曲线分析结果均表明高表达SMIM26的肾透明细胞癌病人存活时间比较高，说明SMIM26是一个有效的肾胞癌诊断和预后生物标记物，可以准确预示着肾透明细胞癌的发生发展，有较强的临床应用前景。
附图说明
[0018]图1是SMIM26在泛癌和癌旁中的染色强度图；其中，A为SMIM26在泛癌和癌旁中的染色情况；B为SMIM26在泛癌和癌旁中的染色强度评分结果。
[0019]图2是SMIM26在人肾癌组织及癌旁组织的表达情况和统计图(图中，T：肾癌组织，N：癌旁组织)；其中，A为SMIM26在人肾癌组织及癌旁组织的表达情况；B为SMIM26在人肾癌组织及癌旁组织的统计结果。
[0020]图3是SMIM26的染色强度以及染色阳性率的评分参考图；其中，A为SMIM26的染色强度评分参考图；B为SMIM26的染色阳性率评分参考图。
[0021]图4是SMIM26表达量与肾癌病人存活时间的关系曲线图。
具体实施方式
[0022]下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。下列实施例中未注明具体实验条件的试验方法，通常按照常规实验条件或按照制造厂所建议的实验条件。除非特别说明，本专利技术所用试剂和原材料均可通过市售获得。
[0023]本专利技术中所述的SMIM26(Small Integral Membrane Protein 26)是由LINC00493编码的定位于线粒体的蛋白质，其NCBI登录号为：NM_001348957.2；其中，实施例中所涉及的anti
‑
SMIM26多克隆抗体的制备方法如下：
[0024](1)将SMIM26蛋白质的编码基因序列和pGEX
‑
4T
‑
1质粒(常规市售)经限制性内切酶Xho1和BamH1酶切后，利用T4连接酶连接，得到重组质粒pGEX
‑
4T1
‑
SMIM26；
[0025](2)将重组质粒pGEX
‑
4T1
‑
SMIM26转化到大肠杆菌BL21中，在37℃恒温摇床经过0.5mM的IPTG诱导3.5小时，接着通过GST蛋白质纯化系统纯化SMIM26蛋白质；
[0026](3)在日本大耳白兔(武汉Proteintech Group公司，雌性，2.1kg)皮下接种100mg的SMIM26蛋白质进行免疫，兔子体内产生anti
‑
SMIM26的抗体；
[0027](4)从日本大耳白兔血清中纯化anti
‑
SMIM26的抗体。
[0028]实施例1SMIM26可以作为肾透明细胞癌诊断的生物标记物
[0029]1、对5例多种肿瘤组织和癌旁组织器官(组织样本芯片购自上海芯超生物科技有限公司)，包括肾癌、肺癌、肝癌、食管癌、胰腺癌、乳腺癌、肠癌、胃癌中的SMIM26蛋白质进行免疫组化检测。对368例肾透明细胞癌(组织样品来自中山大学肿瘤防治中心)以及其中的281例癌旁组织样本中的SMIM26进行免疫组化检测，同时进行生存相关性分析。具体步骤为：
[0030](1)染色
[0031]将上述组织样本芯片和组织样品分别用anti
‑
SMIM26多克隆抗体按照1:500(体积比)进行4℃孵育过夜，之后用PBS缓冲液清洗3次，并用辣根过氧化物酶偶联的二抗(北京中杉金桥生物技术有限公司)孵育，最后用二氨基联苯胺(北京中杉金桥生物技术有限公司)
进行显色。
[0032](2)染色结果判读方法:
[0033]按照染色强度评分：0分(0+)，1分(1+)，2分(2+)。
[0034]染色阳性率评分(X)：0分(0≤X)，1分(0＜X≤25％)，2分(25＜X≤50％)，3分(51＜X≤75％)，4分(75＜X≤100％)，阳性率为染色阳性的细胞占所用细胞的比例。
[0035]总评分：以“染色强度评分”和“染色阳性率评分”的乘积为总评分。
[0036]图3所示为SMIM26的染色强度本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测SMIM26蛋白的表达水平的试剂在制备用于肾癌预后风险预测和/或诊断产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的SMIM26蛋白为由长链非编码RNA
‑
LINC00493编码的蛋白，其NCBI登录号为：NM_001348957.2...

【专利技术属性】
技术研发人员：何庆瑜，孟坤，张志毅，汪洋，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：