一种观察小鼠左外叶肝脏门静脉以及结扎小鼠左外叶门静脉动物模型制造技术

本发明专利技术公开了一种观察小鼠左外叶肝脏门静脉的方法，包括以下步骤：在对小鼠麻醉开腹后，沿中线切开腹部成2cm切口；显露左外叶脏面，在显微镜下观察包括左中叶和左外叶的左叶门静脉主干；在左叶肝脏蒂处顺时针挑动左外叶肝实质，此时绝大多数小鼠中可观察到包括脏面和/或膈面的左外叶门静脉分支结构。通过观察多个小鼠左外叶门静脉结构，对小鼠的左外叶门静脉分型。根据分型结果，以及各分型的结构特点，对小鼠左外叶门静脉进行结扎。所述左外叶除门静脉外，还包括胆管和动脉。还包括胆管和动脉。还包括胆管和动脉。

【技术实现步骤摘要】
Surg.2014Nov；260(5):839
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46
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discussion846
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7.
[0010]4.Alexandra D,Val
é
rie L,Claude B,Isabelle A L.Associating liver partition and portal vein ligation for staged hepatectomy:establishment of an animal model with insufficient liver remnant.Lab Invest.2019May；99(5):698
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707.

技术实现思路

[0011]本专利技术实施例之一，一种观察小鼠左外叶肝脏门静脉的方法，包括以下步骤：
[0012]在对小鼠麻醉处理后，沿中线切开腹部成2cm切口；
[0013]将左外叶肝脏掀向膈肌侧，显露其脏侧，在25
×
显微镜下观察左叶门静脉主干；
[0014]顺时针挑动门静脉附近的左外叶肝脏实质，观察左外叶和左中叶门静脉分支结构；
[0015]汇总约200例小鼠结构，对小鼠的左外叶肝脏分型；
[0016]本专利技术实施例之一，一种构建左外叶门静脉结扎动物模型的方法，包括以下步骤：
[0017]选择合适的分型小鼠，在25
×
显微镜下，借助显微器械，使用9
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0带线缝合针环绕左外叶门静脉并结扎。
[0018]为构建90％门静脉结扎的PVL和ALPPS动物模型提供分型和技术指导。
附图说明
[0019]通过参考附图阅读下文的详细描述，本专利技术示例性实施方式的上述以及其他目的、特征和优点将变得易于理解。在附图中，以示例性而非限制性的方式示出了本专利技术的若干实施方式，其中：
[0020]图1根据本专利技术实施例之一的小鼠左外叶门静脉分型示例图。
[0021]其中，A.不显露型和分支型并存，
[0022]B.显露差型，
[0023]C.显露一般型，
[0024]D、E.显露佳型，
[0025]F.吲哚菁绿特异性示踪胆管，
[0026]G.动脉变异型。
[0027]图1中，黄色、白色和黑色箭头分别表示胆管、动脉和门静脉；黑色三角示门静脉分支。
[0028]图2根据本专利技术实施例之一的小鼠左外叶门静脉结扎示例。
[0029]图3根据本专利技术实施例之一的小鼠术后三天肝脏再生指标检测示例。
具体实施方式
[0030]根据一个或者多个实施例，一种观察小鼠左外叶肝脏的方法，在对小鼠麻醉后，沿中线切开腹部成2cm切口。将左外叶肝脏掀向膈肌侧，显露其脏面侧，在25
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显微镜(莱卡)下，可见左叶(左中叶和左叶)门静脉汇入左叶肝脏。顺时针挑动该门静脉附近的左外叶肝脏实质，左外叶门静脉、胆管和动脉等结构清晰可见。观察并统计约200例小鼠，可对左外叶
肝脏门静脉分型。
[0031]本公开实施例，利用25
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显微镜，观察小鼠左外叶肝脏蒂的细微结构，归纳总结其结构特点，为结扎左外叶门静脉提供组织结构基础。选择合适的门静脉分型小鼠，并开发出左外叶门静脉结扎方法，从而为构建90％门静脉结扎小鼠动物模型构建打下必要基础。
[0032]由于小鼠体型小，需要在25
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显微镜下才可看清小鼠各肝叶肝脏结构，包括门静脉、胆管和动脉分支。尤其是左外叶，其门静脉支脉与左中叶门静脉同支起源，且分支点靠近左外叶肝实质，经常被肝叶覆盖，不易显现，使得难以成功实施小鼠左外叶门静脉结扎。
[0033]本公开实施例借助25
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显微镜，详细观察了小鼠左外叶肝脏结构，结合统计归纳，总结出了左外叶门静脉的结构特点，并详细分型。通过分型结果，帮助研究者找到适宜左外叶门静脉结扎操作的小鼠，并可根据开发的结扎方法，成功结扎左外叶门静脉，为PVL和ALPPS，联合肿瘤和免疫学研究极限肝功能缺失条件下的肝再生，提供非常有利且必须的方法手段。
[0034]根据一个或者多个实施例，小鼠左外叶肝脏门静脉结扎的动物模型构建方法。在对小鼠样本化处理后，沿中线切开2cm左右开口，向上达剑突，向下达肛门上约1.5cm。露出剑突，向上提起并固定。将暴露的中叶和左外叶肝脏向头侧掀起。将显微镜调至25
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放大倍数，调节显微镜与肝脏的间距，至小鼠左叶门静脉清晰。将观察重点放在左外叶肝脏，借助棉棒顺时针提起左外叶肝实质边缘，可清晰显露左叶门静脉于左外叶和左中叶肝脏起始处的走向。
[0035]对足够多的小鼠左外叶门静脉结构特点的统计，如图1所示，发现除极个例动脉变异(图1G)不可见或只具有极细小门静脉分支外，可依据左中叶门静脉于左叶门静脉分支位置的不同，将左叶门静脉可分为两种：第一种分支深入左外叶肝脏(图1A)，另一种分支显露在左外叶肝脏之外(图1B,C，D，E)。分支深入左外叶肝脏的类型，不论在左外叶的膈肌侧还是脏面侧，都未见左外叶门静脉分支。分支显露在左外叶肝脏之外的类型，根据左外叶门静脉显露程度的不同，分为三种类型：显露差型(图1B)，显露一般型(图1C)和显露佳型(图1D，E)。其中显露差型(图1B)，用棉棒挑起门静脉附近肝实质后，于脏面隐约可见门静脉分支；显露一般型(图1B)，于左外叶脏面侧可见左外叶门静脉分支，而膈肌侧不可见；显露佳型(图1D，E)，在膈肌侧和脏面侧，门静脉分支皆明显可见。另外少部分可见左中叶门静脉出现次级分支(黑色三角)深入左外叶肝实质，称作分支型(图1A上，图1F)。无论哪一种类型，胆管(黄色箭头)都由左外叶肝实质边缘汇入左外叶，使用吲哚菁绿特异性的示踪胆管，如图F，印证了我们的显微观察结果。动脉(白色箭头)细微，成亮红色，随胆管和门静脉(黑色箭头)一并汇入左外叶肝实质。
[0036]本公开实施例中，使用吲哚菁绿示踪小鼠胆管的方法是，经右肾静脉向肝下下腔静脉注释吲哚菁绿生理盐水，并暂时结扎胆总管。吲哚菁绿经血流可特异性的聚集在肝脏，并经由胆管排出。常规视野下，可见吲哚菁绿使胆管显祖母绿色。该使用吲哚菁绿示踪小鼠胆管的方法是保证胆管结扎准确；结扎门静脉分支时，防止误扎胆管，保证胆管完整功能，保证结扎的准确性。在构建小鼠PVL和ALPPS模型前，可帮助研究者清晰发现肝外胆管及分支，极大提高模型构建的准确性。
[0037]其中，具体操作步骤包括，用3ml注射用水溶解10毫克吲哚菁绿，溶解后，混合等比例的生理盐水。用直径30G胰岛素针，经右肾静脉向肝下下腔静脉注射吲哚菁绿0.1ml吲哚
菁绿，同时用9
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0锦纶线对胆总管结扎。吲哚菁绿逐渐聚集在胆管，经过约10分钟后，祖母绿色的胆管清晰可见。
[0038]经过统计，在小鼠中不显露和显露差型占比极少(约1/12)，可作为假手术组。绝大部分小鼠为显露一般型和显露佳型。可基于25
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种观察小鼠左外叶肝脏门静脉的方法，包括以下步骤：在对小鼠麻醉开腹后，沿中线切开腹部成2cm切口；显露左外叶脏面，在显微镜下观察包括左中叶和左外叶的左叶门静脉主干；在左叶肝脏蒂处顺时针挑动左外叶肝实质，此时绝大多数小鼠中可观察到包括脏面和/或膈面的左外叶门静脉分支结构。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通过观察多个小鼠左外叶门静脉结构，对小鼠的左外叶门静脉分型。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，根据分型结果，以及各分型的结构特点，对小鼠左外叶门静脉进行结扎。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述左外叶除门静脉外，还包括胆管和动脉。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在对小鼠处置后，沿中线切开形成2.5cm切口，向上达剑突，向下达肛门上约1.5cm；露出剑突，向上提起并固定，充分暴露小鼠肝脏；将左外叶肝脏向膈肌面掀起，显露其脏面；将显微镜调至25
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【专利技术属性】
技术研发人员：周俭，姚娜，王征，闫加艳，陈霏雨，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：