一种脱细胞真皮基质及其制备方法和应用技术

本申请提供了一种脱细胞真皮基质；其中，脱细胞真皮基质的胶原蛋白含量为92

【技术实现步骤摘要】
一种脱细胞真皮基质及其制备方法和应用


[0001]本申请涉及生物医用材料
，特别是涉及一种脱细胞真皮基质及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]慢性难愈合创面是由于各种内外界因素引起的机体正常皮肤或组织缺损后，经过>4周的常规治疗干预，仍无法通过自身修复达到功能及解剖完整的创面。慢性难愈合创面俗称溃疡，其中糖尿病皮肤溃疡(diabetic cutaneous ulcers，DCU)是慢性难愈合创面的主要病症之一。DCU是糖尿病的常见并发症，主要病因包括皮肤损伤、外周神经病变和血管病变。基础研究和临床实践证实，神经、血管、免疫、代谢等内源性变化和感染、创伤、压力等外源性因素共同导致了糖尿病创面难愈的发生，各致病因素之间相互作用，构成了糖尿病创面复杂的病理生理过程。DCU患者体内持续的高糖环境会引起代谢及内皮细胞功能紊乱，导致一氧化氮释放和新生血管减少，影响血管舒张功能，出现下肢/神经缺血现象。神经病变和局部血流不足则会引起DCU患者白细胞和免疫功能受损，使伤口组织炎症反应不够充分，再上皮化及血管化能力受损，因而导致其伤口愈合迟缓，易造成感染，严重者甚至截肢。目前，DCU治疗的基本原则是在维持血糖、血压、血脂平稳的基础上，根据患者病情采用抗感染、清创、伤口减压、适当血运重建、选择最佳伤口敷料、负压疗法及氧疗等以促进创面愈合。
[0003]脱细胞真皮基质(Acellular dermal matrix，ADM)将真皮组织通过一系列物理化学及生物学方法去除表皮及皮内具有免疫原性的细胞成分，保留胶原等细胞外基质成分与结构，得到的一种具有三维空间结构的胶原基质材料。大量研究已经证实，ADM具有可诱导组织再生性，可为细胞提供生存及活动的微环境，促进细胞生长增殖，有助于促进新生血管和上皮形成，使组织完成愈合过程。有研究报道ADM有助于慢性难愈合创面的愈合，但创面愈合率仍不尽如人意，因此临床亟需寻找新的治疗策略以提高慢性难愈合创面的愈合率。

技术实现思路

[0004]本申请的目的在于提供一种脱细胞真皮基质，用于治疗慢性难愈合创面。具体技术方案如下：
[0005]本申请第一方面提供了一种脱细胞真皮基质；其中，所述脱细胞真皮基质的胶原蛋白含量为92
‑
98wt％；所述脱细胞真皮基质来源于动物胎皮；所述动物胎皮选自胎牛皮、胎猪皮或胎羊皮中的至少一种；优选地，所述动物胎皮选自胎牛皮。
[0006]本申请第二方面提供了一种脱细胞真皮基质的制备方法，其包括以下步骤：
[0007]前处理：取动物胎皮，纯化水洗涤3
‑
8次，将所述动物胎皮置于0.1
‑
1wt％氯化钠溶液中，振荡5
‑
13h，水分拧干，去除表皮层、皮下组织层，获得动物真皮片；
[0008]脱脂：按照料液质量体积比1g：5
‑
20mL将所述动物真皮片与脱脂试剂混合，振荡30
‑
120min；其中，所述脱脂试剂选自40
‑
80wt％乙醇溶液、0.5
‑
2wt％氢氧化钠溶液、50
‑
100wt％异丙醇溶液中的至少一种；
[0009]消毒：按照料液质量体积比1g：10
‑
30mL将所述动物真皮片与消毒剂混合，振荡30
‑
120min；其中，所述消毒剂选自0.01
‑
0.2wt％过氧乙酸溶液、10
‑
50wt％乙醇溶液、0.01
‑
0.1wt％新洁尔灭溶液中的至少一种；
[0010]脱细胞：按照料液质量体积比1g：5
‑
20mL将所述动物真皮片与脱细胞试剂混合，振荡30
‑
120min；其中，脱细胞试剂选自0.5
‑
2wt％氢氧化钠溶液、0.2
‑
2wt％胰蛋白酶
‑
乙二胺四乙酸(EDTA)溶液中的至少一种；
[0011]去α
‑
Gal抗原：按照料液质量体积比1g：3
‑
20mL将所述动物真皮片与0.2
‑
5U/mLα
‑
半乳糖苷酶溶液混合，24
‑
37℃，振荡15
‑
30h；
[0012]灭菌：采用辐照灭菌进行灭菌处理；其中，所述辐照灭菌为钴60辐照灭菌，辐照剂量为15
‑
25kGy。
[0013]本申请的第三方面提供了本申请第一方面所述的脱细胞真皮基质或本申请第二方面所述的制备方法制备得到的脱细胞真皮基质在用于治疗慢性难愈合创面中的用途；优选地，所述慢性难愈合创面为糖尿病皮肤溃疡。
[0014]本申请提供的脱细胞真皮基质的制备方法，采用特定的前处理、脱脂、消毒、脱细胞、去α
‑
Gal抗原以及灭菌的方法相结合，在有效去除动物组织抗原性物质的同时，还能最大限度的保留材料中生物活性成分和结构的完整性，表现出优良的促血管化效果，为营养物质的运输提供必要条件，进一步加快创面愈合进程。此外，采用本申请无机离子添加的方法，在制备过程中有效复合了无机离子，一方面可以调节血管内皮细胞活性及血管化生长因子的高效表达，从而表现出优良的促血管化效果，为营养物质的运输提供必要条件，进一步加快创面愈合进程；另一方面，还可以调节免疫细胞的炎症因子表达，具有抗炎效果。进一步地，本申请的制备条件简单、质量可控、成本低廉。
[0015]采用本申请的制备方法制备的脱细胞真皮基质，在具有良好的生物相容性和促血管化效果的同时，还可以减少炎症细胞因子分泌，有效提高慢性难愈合创面的愈合率，为临床慢性难愈合创面的治疗提供解决方案。
[0016]当然，实施本申请的任一产品或方法并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的实施例。
[0018]图1为填充了实施例1中的脱细胞真皮基质的糖尿病皮肤溃疡模型大鼠创面愈合苏木精
‑
伊红染色图(HE染色图)；
[0019]图2为填充了实施例2中的脱细胞真皮基质的糖尿病皮肤溃疡模型大鼠创面愈合HE染色图；
[0020]图3为填充了实施例3中的脱细胞真皮基质的糖尿病皮肤溃疡模型大鼠创面愈合HE染色图；
[0021]图4为填充了实施例4中的脱细胞真皮基质的糖尿病皮肤溃疡模型大鼠创面愈合HE染色图；
[0022]图5为填充了实施例5中的脱细胞真皮基质的糖尿病皮肤溃疡模型大鼠创面愈合HE染色图；
[0023]图6为填充了实施例6中的脱细胞真皮基质的糖尿病皮肤溃疡模型大鼠创面愈合HE染色图。
具体实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脱细胞真皮基质；其中，所述脱细胞真皮基质的胶原蛋白含量为92
‑
98wt％；所述脱细胞真皮基质来源于动物胎皮；所述动物胎皮选自胎牛皮、胎猪皮或胎羊皮中的至少一种；优选地，所述动物胎皮选自胎牛皮。2.根据权利要求1所述的脱细胞真皮基质，其中，所述脱细胞真皮基质还包括无机离子，所述无机离子的含量为0.01
‑
0.2wt％；所述无机离子选自Mg
2+
、Zn
2+
、Cu
2+
、Ag
+
中的至少一种，优选为Cu
2+
。3.根据权利要求1
‑
2中任一项所述的脱细胞真皮基质，其中，所述脱细胞真皮基质为粉末状、絮状或膜片状，优选为絮状。4.根据权利要求1
‑
2中任一项所述的脱细胞真皮基质，其中，所述脱细胞真皮基质还包括甲磺酸去铁胺，所述甲磺酸去铁胺的含量为0.01
‑
0.1wt％。5.一种脱细胞真皮基质的制备方法，其包括以下步骤：前处理：取动物胎皮，纯化水洗涤3
‑
8次，将所述动物胎皮置于0.1
‑
1wt％氯化钠溶液中，振荡5
‑
13h，水分拧干，去除表皮层、皮下组织层，获得动物真皮片；脱脂：按照料液质量体积比1g：5
‑
20mL将所述动物真皮片与脱脂试剂混合，振荡30
‑
120min；其中，所述脱脂试剂选自40
‑
80wt％乙醇溶液、0.5
‑
2wt％氢氧化钠溶液、50
‑
100wt％异丙醇溶液中的至少一种；消毒：按照料液质量体积比1g：10
‑
30mL将所述动物真皮片与消毒剂混合，振荡30
‑
120min；其中，所述消毒剂选自0.01
‑
0.2wt％过氧乙酸溶液、10
‑
50wt％乙醇溶液、0.01
‑
0.1wt％新洁尔灭溶液中的至少一种；脱细胞：按照料液质量体积比1g：5
‑
20mL将所述动物真皮片与脱细胞试剂混合...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘昌毅，穆梦雅，冉永峰，江涛，李志宏，
申请(专利权)人：杭州华迈医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：