【技术实现步骤摘要】
用于乌梢蛇药材、标准汤剂及中药配方颗粒多重STR分型的引物及其应用、鉴别方法
[0001]本专利技术涉及中药鉴别
，尤其涉及一种用于乌梢蛇药材、标准汤剂及中药配方颗粒多重STR分型的引物及其应用、鉴别方法。
技术介绍
[0002]我国蛇类物种约有两百余种，其中有20余种为常见蛇类，包括蕲蛇Agkistrodon acutus、乌梢蛇Zaocys dhumnades、金钱白花蛇Bungarus multicinctus、金环蛇Bungarus fasciatus、滑鼠蛇Ptyas mucosus、圆斑蝰Daboia russelii、眼镜蛇Naja naja、赤链蛇Lycodon rufozonatus、王锦蛇Elaphe carinata、灰鼠蛇Ptyas korros、短尾蝮蛇Gloydius brevicaudus、黑眉锦蛇Elaphe taeniura、百花锦蛇Elaphe moellendorffi等，其多数不具有临床药效。由于多种蛇类形态近似，药材鉴别困难，特别是加工处理时剖去内脏后，要进行干燥熏黑处理，皮上...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于乌梢蛇药材、标准汤剂及中药配方颗粒多重STR分型的引物，其特征在于，包括第一引物对、第二引物对、第三引物对和第四引物对；其中，所述第一引物对的上游引物的序列如SEQ ID NO：1所示，其下游引物的序列如SEQ ID NO：2所示；所述第二引物对的上游引物的序列如SEQ ID NO：3所示，其下游引物的序列如SEQ ID NO：4所示；所述第三引物对的上游引物的序列如SEQ ID NO：5所示，其下游引物的序列如SEQ ID NO：6所示；所述第四引物对的上游引物的序列如SEQ ID NO：7所示，其下游引物的序列如SEQ ID NO：8所示。2.如权利要求1所述的引物在(1)或(2)中的应用：(1)鉴别待测样品是否为乌梢蛇、百花锦蛇、王锦蛇和/或灰鼠蛇；(2)制备用于鉴别乌梢蛇、百花锦蛇、王锦蛇和/或灰鼠蛇的试剂盒。3.如权利要求2所述的应用，所述乌梢蛇为药材、标准汤剂或中药配方颗粒；所述百花锦蛇为药材、标准汤剂或中药配方颗粒；所述王锦蛇为药材、标准汤剂或中药配方颗粒；所述灰鼠蛇为药材、标准汤剂或中药配方颗粒。4.如权利要求1所述的引物在(1)或(2)中的应用：(1)鉴别待测样品是否含有乌梢蛇、百花锦蛇、王锦蛇和/或灰鼠蛇；(2)制备用于鉴别待检测样品是否含有乌梢蛇、百花锦蛇、王锦蛇和/或灰鼠蛇的试剂盒。5.一种试剂盒，其特征在于，其包括如权利要求1所述的引物。6.一种基于如权利要求1所述的引物的鉴别方法，其特征在于，包括：提取待检测样品的基因组DNA；以所述基因组DNA为模板，采用如权利要求1所述的引物进行PCR扩增，若扩增产物中含有130
‑
135bp的DNA特征峰，则待检测样品含有乌梢蛇药材、乌梢蛇标准汤剂和/或乌梢蛇中药配方颗粒；若扩增产物中含有180
‑
185bp的DNA特征峰，则待检测样品含有王锦蛇药材、王锦蛇标准汤剂和/或王锦蛇中药配方颗粒；若扩增产物中含有195
‑
198bp的DNA特征峰，则待检测样品含有灰鼠蛇药材、灰鼠蛇标准汤剂和/或灰鼠蛇中药配方颗粒；若扩增产物中含有245
‑
250bp的DNA特征峰，则待检测样品含有百花锦蛇药材、百花锦蛇标准汤剂和/或百花锦蛇中药配方颗粒。7.如权利要求6所述的鉴别方法，其特征在于，提取待检测样品的基因组DNA的方法如下：取待检测样品，加入CTAB沉淀液、蛋白酶K沉淀提取2～3次；取沉淀物加入CTAB提取液、β
‑
巯基乙醇提取，然后加入氯仿
‑
异戊醇萃取2～3次；取萃取后上清液，加入异丙醇或异丙醇
‑
乙酸钠沉淀提取，沉淀物经洗涤、孵育后用水溶解，即得待检测样品的基因组DNA。8.如权利要求6所述的鉴别方法，其特征在于，提取待检测样品的基因组DNA的方法如
下：取待检测样品0.3～0.8g，研磨成粉末，置离心管中，加入1～1.8mL的CTAB沉淀液、15～25μL蛋白酶K，混合均匀，在50～60℃下加热45～65min，冷却至室温后离心，弃去上清液；加入800～1000μL CTAB沉淀液、15～25μL蛋白酶K，混合均匀，在50～60℃下加热45～65min，冷却至室温后离心，弃去上清液；取沉淀加入800～1000μL CTAB提取液，5～15μLβ
‑
巯基乙醇，混合均匀，在60～70℃加热100～150...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗宇琴，宋叶，魏梅，陈向东，孙冬梅，黄上书，范耀耀，潘礼业，
申请(专利权)人：广东一方制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。