一种防治烟草青枯菌的复合菌剂及其制备、施用方法技术

本发明专利技术公开了一种防治烟草青枯菌的复合菌剂及其制备、施用方法，该复合菌剂包括枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、第二解淀粉芽孢杆菌和甲基营养型芽孢杆菌，其中，所述枯草芽孢杆菌为Bacillus subtilis LX4，保藏编号为CGMCC No.8265，所述第一解淀粉芽孢杆菌为Bacillus amyloliquefaciens Ba

【技术实现步骤摘要】
一种防治烟草青枯菌的复合菌剂及其制备、施用方法


[0001]本专利技术涉及一种防治烟草青枯菌的复合菌剂及其制备、施用方法，属于青枯病防治


技术介绍

[0002]烟草青枯病是一种由茄科劳尔氏菌(Ralstoniasolanacearum,简称青枯菌)引起的毁灭性的土传性病害。烟草青枯病是贵州省烟田土传病害危害最深、防控难度最大的病害，仅2015年烟草青枯病对贵州产区造成的产量损失率就高达1％，产值损失达到2456万元。青枯菌主要从土壤中侵染作物根系，其在土壤中生存能力强，且土壤中青枯菌的数量与植物青枯病发病率呈显著正相关。烟草青枯病的发生是烟草、病原菌、环境共同作用的结果，环境温度、湿度、土壤pH及土壤中青枯菌的群体数量等都与烟草青枯病的发生有密切的关系。
[0003]根际促生菌(PGPR)是一种绿色环保的阻控病害的手段，在促进植物生长的同时能够抑制有害生物。PGPR通过直接(利用性竞争)和间接竞争(拮抗性竞争)等方式抵御病原菌对根系的入侵。前者主要是指PGPR与病原菌争夺根际资源，资源利用效率决定着竞争结果。后者即PGPR利用根际养分资源(如分泌物)产生一些对青枯菌有抑制作用或有毒的物质，使病原菌生长(资源利用效率)受到抑制或者被杀死。目前已有大量PGPR防控烟草青枯病的报道，例如专利文献一种兼抗烟草黑胫病和青枯病的生防菌株Trb3(CN201210159083.X)、一种防治烟草青枯病的生防放线菌菌株及其应用(CN201510010789.3)、链霉菌LC
‑
7菌株及其产生的抗生素在防治烟草青枯病中的应用(CN201510937911.1)、一种防治烟草青枯病的青霉xfsf
‑
8菌株及应用(CN201610307739.6)、一株高产拮抗烟草青枯病活性物质的内生解淀粉芽孢杆菌(CN201510698909.3)、用于防治烟草青枯病的解淀粉芽孢杆菌B011及其应用(CN201510066359.3)、一种能够防治烟草青枯病的解淀粉芽孢杆菌的制备及应用(CN202011192377.3)、青枯病防病促生菌剂及其应用(CN202010009707.4)，以上各种文献分别报道了解淀粉芽孢杆菌、链霉菌LC
‑
7菌株等微生物通过植物免疫激发、产生抗生物质等机制，减少烟草病害发生。然而大多数PGPR在温室生防效果较好，施入土壤后无法稳定抵御病原菌对根系的入侵，导致实际防控效果并不好。有必要对此进行研究改进。

技术实现思路

[0004]基于上述，本专利技术提供一种防治烟草青枯菌的复合菌剂及其制备、施用方法，能够显著提高对土壤中青枯病的防治效果，以克服现有技术的不足。
[0005]本专利技术的技术方案是：
[0006]第一方面，本专利技术提供一种防治烟草青枯菌的复合菌剂，所述复合菌剂由枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、第二解淀粉芽孢杆菌和甲基营养型芽孢杆菌组成，其中，所述枯草芽孢杆菌为Bacillus subtilis LX4，保藏编号为CGMCCNo.8265，所述第一解淀粉芽孢杆菌为Bacillus amyloliquefaciens Ba
‑
S，保藏编号为CGMCC No.8262，所述第二解淀
粉芽孢杆菌为Bacillus amyloliquefaciens LX7，保藏编号为CGMCC No.8267，所述甲基营养型芽孢杆菌为Bacillus methylotrophicus VC110，保藏编号为CGMCC No.16521。
[0007]优选的，每毫升复合菌剂中枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、第二解淀粉芽孢杆菌和甲基营养型芽孢杆菌的细胞总数比为1～9
×
109：1～9
×
109：1～9
×
109：1～9
×
109。
[0008]第二方面，本专利技术提供一种制备上述防治烟草青枯菌的复合菌剂的方法，将纯化后的四株菌分别接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，以170rpm、30℃振荡培养24h，然后以5％接种率接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，以170rpm、30℃振荡培养48h。发酵液6000
×
g转速下离心10min，收集菌体后用同体积灭菌后的去离子水进行重悬。以1L培养液计，四种青枯菌拮抗菌48h的扩繁数量可以达到1～9
×
109cfu/mL。将重悬后的四种菌液以1：1：1：1体积比混合均匀后备用。
[0009]第三方面，本专利技术还提供一种上述复合菌剂实施方法，分别包含菌剂方式施用和菌肥方式施用。菌剂方式施用：四种菌液重悬混合液以每株烟10mL进行灌根，封窖时，按每株20mL进行灌根；菌肥方式施用：四种菌液重悬混合液以30％接种量与常规有机肥进行吸附混合，搅拌均匀后，以每株烟100g有机肥加以施用。
[0010]本专利技术的有益效果是：本专利技术通过将枯草芽孢杆菌LX4、解淀粉芽孢杆菌Ba
‑
S、解淀粉芽孢杆菌LX7和甲基营养型芽孢杆菌VC110组合成复合菌剂，在施入土壤后既可以与青枯菌竞争营养位点，又能够通过代谢产物阻止青枯菌生长，从可稳定抵御青枯菌对根系入侵，切实提高实际防控效果。
附图说明
[0011]图1为烟草青枯菌及筛选到的PGPR菌株及拮抗Rs菌落形态；
[0012]图2为96孔微孔板的试验图；
[0013]图3为不同PGPR菌株基础生态位宽度和重叠指数；
[0014]图4为断棒模型设计PGPR群落组合；
[0015]图5为不同菌肥组合盆栽试验。
具体实施方式
[0016]为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术。但是本专利技术能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似改进，因此本专利技术不受下面公开的具体实施的限制。
[0017]枯草芽孢杆菌为Bacillus subtilis LX4，保藏编号为CGMCC No.8265，第一解淀粉芽孢杆菌为Bacillus amyloliquefaciens Ba
‑
S，保藏编号为CGMCC No.8262，第二解淀粉芽孢杆菌为Bacillus amyloliquefaciens LX7，保藏编号为CGMCC No.8267，甲基营养型芽孢杆菌为Bacillus methylotrophicus VC110，保藏编号为CGMCC No.16521。
[0018]牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏5.0g，氯化钠5.0g，蛋白胨10g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH 7.0
‑
7.2，121℃灭菌20min，用于细菌的培养。
[0019]将纯化后的上述四株菌分别接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，以170rpm、30℃振荡培养24h，然后以5％接种率接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，以170本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种防治烟草青枯菌的复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂由枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、第二解淀粉芽孢杆菌和甲基营养型芽孢杆菌组成，其中，所述枯草芽孢杆菌为Bacillus subtilis LX4，保藏编号为CGMCCNo.8265，所述第一解淀粉芽孢杆菌为Bacillus amyloliquefaciens Ba
‑
S，保藏编号为CGMCC No.8262，所述第二解淀粉芽孢杆菌为Bacillusamyloliquefaciens LX7，保藏编号为CGMCC No.8267，所述甲基营养型芽孢杆菌为Bacillus methylotrophicus VC110，保藏编号为CGMCC No.16521。2.根据权利要求1所述的防治烟草青枯菌的复合菌剂，其特征在于，每毫升复合菌剂中枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、第二解淀粉芽孢杆菌和甲基营养型芽孢杆菌的细胞总数比为1～9
×
109：1～9<...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘艳霞，彭宇，李想，张恒，郭亮，方正华，朱经伟，李寒，杨磊，芶剑渝，
申请(专利权)人：贵州省烟草科学研究院，
类型：发明
国别省市：