包含抗TIGIT抗体和TGF-βR的融合蛋白、其药物组合物及用途制造技术

本发明专利技术属于生物和医药领域，涉及一种包含抗TIGIT抗体和TGF

【技术实现步骤摘要】
in Cancer and Inhibit CD8+ T
‑
cell Function.Cancer ImmunolRes 2019；7:257
–
68)。
[0005]转化生长因子
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β(transforming growth factor
‑
β，TGF
‑
β)超家族是一类功能多样的细胞因子，其又分为TGF
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β、激活素(Activins)、抑制素(inhibins)、生长分化因子(GDF)、胶质源性神经营养因子(GDNFs)、Nodal、Lefty和抗缪勒管激素(anti
‑
M
ü
llerianhormone)(表A)等亚家族。3种TGF
‑
β亚家族的蛋白为别被称为TGF
‑
β1、TGF
‑
β2、TGF
‑
β3，其中TGF
‑
β1是表达最高的亚型。TGF
‑
β1、TGF
‑
β2、TGF
‑
β3与受体结合后通过Smad与非Smad信号通路介导一系列的生物学反应，包括促细胞上皮
‑
间质转化(epithelial
‑
mesenchymal transitions，EMT)、促组织纤维化、促血管生成、促肿瘤的免疫逃逸、抑癌和促癌双重作用等(J Massagu
é
.TGFbeta in Cancer.[J].Cell,2008,134(2):215
‑
230.)。
[0006]TGF
‑
β受体(TGF
‑
βreceptor，TGF
‑
βR)广泛分布在人的正常细胞和肿瘤细胞表面，包括3种受体超家族，I型经典TGF
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β受体家族包括ALK1
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7，其中TGF
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βRⅠ(亦写作TβRI)也称为ALK5；II型经典TGF
‑
β受体家族包括TGF
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βRII(亦写作TβRII)，ActRII，ActRIIB，AMHRII以及BMPRII；Ⅲ型TGF
‑
β受体超家族包括Betaglycan(也称为TGF
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βRIII)和Endoglin；其中TGF
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βRⅠ、TGF
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βRII、TGF
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βRIII各自均可与TGF
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β1、TGF
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β2和TGF
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β3结合(Pawlak John B,Blobe Gerard C，TGF
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βsuperfamily co
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receptors in cancer.DevDyn,2021)。TGF
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β家族及受体见表A(基于Carl
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Henrik Heldin1 and Aristidis Moustakas.Cold Spring Harb Perspect Biol.2016.的综述总结)。TGF
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βRⅠ和TGF
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βRⅡ是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶受体。在TGF
‑
β信号通路中TGF
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βRII是信号转导的核心关键分子，可高亲和力与TGF
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β结合继而与TGF
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βRI二聚体形成异源四聚体受体复合物，通过TGF
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βRⅡ自身磷酸化进而磷酸化并激活TGF
‑
βRⅠ，活化的TGF
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βRⅠ磷酸化下游Smad通路相关蛋白，调控下游靶基因的转录翻译，进而引发疾病相关的生物学反应。TGF
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βRIII与TGF
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β的亲和力较TGF
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βRⅠ和TGF
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βRⅡ弱，且不具有胞内段，无法接到下游信号通路，其功能为俘获TGF
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β并递呈给TGF
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βRII。其它TGF
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β受体亦可结合于TGF
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β(桑晓宏等，靶向TGF
‑
β及受体的小分子抑制剂研究进展[J].药学学报,2019(9).)。
[0007]表A：TGF
‑
β家族及受体
[0008][0009][0010][0011]在肿瘤进展过程中，肿瘤微环境(TME)中肿瘤细胞、间充质成纤维细胞和其他细胞大量分泌TGF
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β，介导免疫抑制。TGF
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β抑制初始T细胞向介导抗肿瘤活性的Th1的分化，缺失了TGF
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βRⅡ的T细胞Th1反应增强(Eduard,Batlle,Joan,et al.Transforming Growth Factor
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βSignaling in Immunity and Cancer.[J].Immunity,2019.)。具有肿瘤杀伤活性的效应T细胞的颗粒酶A、颗粒酶B、穿孔素、γ
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干扰素(IFN
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γ)和FasL在TGF
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β影响下表达量下降，导致肿瘤细胞免疫逃逸。Treg是肿瘤微环境介导肿瘤免疫抑制的关键细胞，可抑制肿瘤杀伤活性的效应性T细胞的功能；肿瘤细胞产生的TGF
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β诱导TME的Treg大量出现，增强了肿瘤抗原的耐受，促使产生肿瘤免疫逃逸(陈丹,冉燕.TGF
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β对肿瘤细胞及肿瘤相关免疫细胞调控的研究进展[J].现代医药卫生,2020,36(09):1354
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1358.)。目前处于临床阶段的靶向TGF
‑
β分子的在研抗体类药物适应症包括黑素瘤、肾细胞癌、乳腺癌、宫颈癌、晚期非小细胞肺癌、前列腺癌、胰腺导管腺癌、晚期实体瘤和转移性实体瘤。
[0012]Fc受体是表达在特定免疫细胞表面，用于识别抗体Fc区域介导免疫应答的免疫球蛋白家族蛋白。抗体Fab区域识别抗原后，其抗体Fc区域与免疫细胞(如杀伤细胞)上的Fc受体结合，启动免疫细胞的应答功能，如吞噬作用及ADCC。
[0013]根据Fc受体识别抗体类型及表达细胞的不同，Fc受体主要分为FcγR、FcαR和FcεR三种类型，FcγR又可分为FcγRI(亦称为CD64)、FcγRII(亦称为CD32)、FcγRIII(亦称为CD16)和FcRn(亦称为Neonatal Fc receptor)四种亚型。其中FcγRI、FcγRII、FcγRIII与
ADCC效应密切相关。FcγRIII是介导ADCC的最主要分子，在不同细胞类型中具有高度同源的FcγRIIIa和FcγRIIIb两种亚型，在FcγRIIIa人群中存在单核干多态性(SNP)位点引起的高亲和力本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
C region(例如NCBI ACCESSION:P01861.1)；轻链恒定区为Ig kappa chain Cregion(例如NCBIACCESSION:P01834)。7.根据权利要求1至6中任一权利要求所述的融合蛋白，其中，所述融合蛋白与配体CD155
‑
hFc
‑
Biotin结合的能力强于对照抗体RG6058(hG4)。8.根据权利要求1至7中任一权利要求所述的融合蛋白，其中，所述融合蛋白以小于0.08nM或小于0.10nM的EC
50
结合TIGIT
‑
mFc；优选地，所述EC
50
通过间接ELISA方法测得。9.根据权利要求1至8中任一权利要求所述的融合蛋白，其中，所述融合蛋白以小于0.3nM、小于0.4nM、小于0.5nM或小于0.6的EC
50
结合TGF
‑
β1、TGF
‑
β2或TGF
‑
β3；优选地，所述EC
50
通过间接ELISA方法测得。10.根据权利要求1至9中任一权利要求所述的融合蛋白，其中，所述抗TIGIT抗体是由杂交瘤细胞株LT019产生的抗体，所述杂交瘤细胞株LT019保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:C2020208。11.根据权利要求1至10中任一权利要求所述的融合蛋白，其中，按照EU编号系统，所述抗TIGIT抗体的重链恒定区具有如下突变组合之一：L234A和L235A；L234A和G237A；L235A和G237A；或者L234A、L235A、G237A。12.根据权利要求1至11中任一权利要求所述的融合蛋白，其中，所述第二蛋白功能区为TGF
‑
β受体、其胞外区或具有TGF
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β受体功能的TGF
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β受体胞外区的截短片段；优选地，所述TGF
‑
β受体为TGF
‑
βRⅠ、TGF
‑
βRII或TGF
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βRIII，或者为TGF
‑
βRⅠ、TGF
‑
βRII或TGF
‑
βRIII的胞外区，或者为TGF
‑
βRⅠ、TGF
‑
βRII或TGF
‑
βRIII的胞外区的截短片段；优选地，所述第二蛋白功能区的氨基酸序列如SEQ ID NOs:33
‑
39中任一序列所示。13.根据权利要求1至12中任一权利要求所述的融合蛋白，其中，所述抗TIGIT抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:27或SEQ ID NO:31所示，并且其轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示。14.根据权利要求1至13中任一权利要求所述的融合蛋白，其中，所述第一蛋白功能区与所述第二蛋白功能区直接连接或者通过连接片段连接。15.根据权利要求14所述的融合蛋白，其中，所述连接片段为(GGGGS)n或(GGGGS)nG，n为正整数；优选地，n为1、2、3、4、5或6。16.根据权利要求1至15中任一权利要求所述的融合蛋白，其中，所述第一蛋白功能区和第二蛋白功能区独立地为1个、2个或者2个以上。17.根据权利要求1至16中任一权利要求所述的融合蛋白，其中，所述TGF
‑
β受体或其胞外片段连接在抗TIGIT抗体的重链的C末端。18.一种融合蛋白，其包含：靶向TIGIT的第一蛋白功能区，和具有TGF
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β结合活性的第二蛋白功能区；其中，
所述第一蛋白功能区为1个，所述第二蛋白功能区为2个；所述第一蛋白功能区为抗TIGIT抗体或其抗原结合片段，所述第二蛋白功能区为TGF
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β受体、其胞外区或具有TGF
...

【专利技术属性】
技术研发人员：王忠民，张鹏，李百勇，夏瑜，
申请(专利权)人：中山康方生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：