基于NKA-9型大孔树脂对驱虫斑鸠菊总黄酮粗提物的纯化生产方法技术

本发明专利技术涉及一种基于NKA

【技术实现步骤摘要】
基于NKA
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9型大孔树脂对驱虫斑鸠菊总黄酮粗提物的纯化生产方法


[0001]本专利技术涉及的是一种中草药中黄酮类化合物分离纯化技术，具体涉及一种基于均匀设计的NKA
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9型大孔树脂对驱虫斑鸠菊总黄酮粗提物的纯化生产方法。

技术介绍

[0002]驱虫斑鸠菊为菊科植物驱虫斑鸠菊(Vernonia anthelmintica(L.)willd)的成熟果实。具有清除异常黏液质，驱虫、消肿、散寒止痛的功效，现多用于治疗湿寒性胃痛及肝病，白癜风等疾病。驱虫斑鸠菊药材中黄酮类成分是治疗白癜风的主要活性成分，主要通过促进黑素细胞中优黑素的合成从而发挥其有效地促进黑素合成的作用。
[0003]大孔树脂是一种不溶于酸、碱及各种有机溶剂的新型高分子材料，通过利用化合物与大孔树脂之间吸附力的不同及不同物质分子量大小的差异进行分离。与其他分离技术相比具有稳定性高、比表面积大、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长等优点，被广泛用于各类天然产物的分离纯化。文献(杨科等，大孔树脂纯化驱虫斑鸠菊总黄酮的工艺研究，中成药，2013，35(10)：2268
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2271)采用LS
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300B大孔树脂富集驱虫斑鸠菊总黄酮成分，该方法存在周期长、成本高的问题，且纯化后驱虫斑鸠菊总黄酮的体外抗氧化作用未见报道。本专利技术通过对大孔树脂的筛选，并对其动力学进行研究，将均匀设计理论和单因素相结合，选取具有代表性的数据进行部分考察，将具有交互作用的因素建立相应因素水平表，最后测试驱虫斑鸠菊总黄酮回收率，从而通过较少优选次数找出最佳参数，成功将驱虫斑鸠菊总黄酮纯度提升至81.4％。体外抗氧化结果表明纯化后的驱虫斑鸠菊总黄酮对DPPH和ABTS自由基具有较强的清除作用。

技术实现思路

[0004]本专利技术目的是提供一种利用NKA
‑
9型大孔树脂对驱虫斑鸠菊总黄酮粗提物进行纯化的生产方法。
[0005]本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：
[0006]本专利技术其特点在于：包括如下步骤：
[0007]步骤一：利用加热回流法对驱虫斑鸠菊药材进行总黄酮的提取；
[0008]步骤二：驱虫斑鸠菊总黄酮的纯化；
[0009](1)对大孔吸附树脂进行预处理；
[0010](2)大孔树脂的筛选：将步骤一中得到的驱虫斑鸠菊总黄酮粗提液加入等量预处理好的大孔吸附树脂中，取等量乙醇溶液解吸，于室温充分吸附、解吸12
‑
24h，测定溶液吸光度。总黄酮含量采用NaNO2溶液
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Al(NO3)3溶液
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NaOH溶液显色法测定；
[0011](3)对筛选的大孔吸附树脂进行吸附动力学模型、吸附等温线模型回归方程拟合；
[0012](4)均匀设计与统计分析：a.依次调节上样液浓度为0.5～8.5mg/mL；上样液pH为1～8；乙醇洗脱液浓度为10％～90％；洗脱流速为0.5～3mL/min进行单因素考察，并绘制筛
选树脂的动态泄露曲线与洗脱曲线，用(2)中方法测定所得驱虫斑鸠菊提取液中总黄酮含量；b.根据a.中考察结果筛选出上样液浓度、上样液pH、洗脱液浓度三因素，以总黄酮回收率为优化指标，使用均匀设计表U
10
(103)进行驱虫斑鸠菊总黄酮纯化生产方法优化；
[0013]步骤三：纯化后驱虫斑鸠菊总黄酮体外抗氧化作用
[0014](1)清除1，1
‑
二苯基
‑2‑
三硝基苯肼(DPPH)自由基活性能力：称量驱虫斑鸠菊总黄酮提取物、纯化物和L
‑
抗坏血酸(Vc)使其浓度呈梯度。取适量DPPH试剂，加入10～20倍量的乙醇溶液，混匀后避光保存。按比例1∶4取待测液和DPPH溶液混合，室温避光反应25～30min，测定其在517nm波长处的吸光度值，计算自由基清除率；
[0015](2)清除2，2
‑
联氮
‑
二(3
‑
乙基
‑
苯并噻唑
‑6‑
磺酸)二铵盐(ABTS)自由基活性能力：将ABTS溶液与过硫酸钾溶液按比例混匀，于暗处反应14～16h得到ABTS工作液。按比例1∶9取(1)配制的梯度溶液与稀释40～50倍的ABTS工作液混合，室温避光反应8～12min，测定其在734nm波长处的吸光度值，计算自由基清除率。
[0016]步骤二中，所述的大孔吸附树脂为D101型、AB
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8型、NKA型、NKA
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9型、X
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5型、DM130型、DM301型、LS
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300型、LS
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300B型号大孔树脂中的一种或几种，作为优选，所述的大孔吸附树脂为NKA
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9型号的大孔吸附树脂。
[0017]本专利技术提供了一种利用NKA
‑
9型大孔树脂对驱虫斑鸠菊总黄酮粗提物进行纯化的生产方法，通过设计筛选，并对吸附热力学及其动力学进行研究，采用单因素和均匀设计法相结合得到最佳工艺参数，将驱虫斑鸠菊总黄酮纯度提升至81.4％。缩短了生产周期，具有快捷、高效、经济的特点。得到了纯度高、质量稳定、抗氧化作用好的驱虫斑鸠菊总黄酮产品。
附图说明
[0018]图1为驱虫斑鸠菊总黄酮纯化生产流程图；
[0019]图2为驱虫斑鸠菊总黄酮含量测定标准曲线；
[0020]图3为驱虫斑鸠菊总黄酮在不同树脂上的吸附能力和解吸能力以及解吸率；
[0021]图4、5分别为驱虫斑鸠菊总黄酮在NKA
‑
9树脂上的吸附拟一阶动力学和拟二阶动力学回归线；
[0022]图6为不同温度下驱虫斑鸠菊总黄酮在NKA
‑
9树脂上的吸附曲线；
[0023]图7、8分别为不同温度下驱虫斑鸠菊总黄酮在NKA
‑
9树脂上的Langmuir模型和Freundlich模型的线性相关关系；
[0024]图9为不同上样液浓度对驱虫斑鸠菊总黄酮吸附率的影响；
[0025]图10为不同pH对驱虫斑鸠菊总黄酮吸附率的影响；
[0026]图11为NKA
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9大孔树脂动态泄露曲线；
[0027]图12为不同洗脱液浓度对驱虫斑鸠菊总黄酮解吸率的影响；
[0028]图13为不同洗脱流速对驱虫斑鸠菊总黄酮解吸率的影响；
[0029]图14为驱虫斑鸠菊总黄酮在NKA
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9树脂上的洗脱曲线；
[0030]图15、16分别为驱虫斑鸠菊总黄酮清除DPPH和ABTS自由基活性测定。
[0031]从图2可以看出标准曲线具有很好的线性关系(R2＞0.999)；图3中NKA
‑
9大孔树脂的解吸率为89.37％明显高于其他树脂；图4、图5表明拟一阶动力学方程能较好地描本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于NKA
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9型大孔树脂对驱虫斑鸠菊总黄酮粗提物的纯化生产方法，本发明其特征在于：包括如下步骤：步骤一：利用加热回流法对驱虫斑鸠菊药材进行总黄酮的提取；步骤二：驱虫斑鸠菊总黄酮的纯化；(1)对大孔吸附树脂进行预处理；(2)大孔树脂的筛选：将步骤一中得到的驱虫斑鸠菊总黄酮粗提液加入等量预处理好的大孔吸附树脂中，取等量乙醇溶液解吸，于室温充分吸附、解吸12
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24h，测定溶液吸光度。总黄酮含量采用NaNO2溶液
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Al(NO3)3溶液
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NaOH溶液显色法测定；(3)对筛选的大孔吸附树脂进行吸附动力学模型、吸附等温线模型回归方程拟合；(4)均匀设计与统计分析：a.依次调节上样液浓度为0.5～8.5mg/mL；上样液pH为1～8；乙醇洗脱液浓度为10％～90％；洗脱流速为0.5～3mL/min进行单因素考察，并绘制筛选树脂的动态泄露曲线与洗脱曲线，用(2)中方法测定所得驱虫斑鸠菊提取液中总黄酮含量；b.根据a.中考察结果筛选出上样液浓度、上样液pH、洗脱液浓度三因素，以总黄酮回收率为优化指标，使用均匀设计表U
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(103)进行驱虫斑鸠菊总黄酮纯化生产方法优化；步骤三：纯化后驱虫斑鸠菊总黄酮体外抗氧化作用；(1)清除1，1
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二苯基
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三硝基苯肼(DPPH)自由基活性能力：称量驱虫斑鸠菊总黄酮提取物、纯化物和L
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抗坏血...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦冬梅，郑萌玥，陈卫军，邹楠，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：