一种甲型流感病毒和腺病毒抗原定量检测试剂盒、制备方法及定量检测方法技术

本发明专利技术提供了一种甲型流感病毒和腺病毒抗原定量检测试剂盒、制备方法及定量检测方法，涉及生物技术领域。本发明专利技术提供的甲型流感病毒和腺病毒的定量检测试剂盒，包括：量子点微球标记的甲型流感病毒抗体、量子点微球标记的腺病毒抗体、复溶液A、复溶液B和检测试纸；检测试纸的检测线上包被有甲型流感病毒捕获抗体和腺病毒捕获抗体。该甲型流感病毒和腺病毒的定量检测试剂盒灵敏度高、特异性强、稳定性好、对模拟样本反应灵敏，能实现对甲流病毒和腺病毒抗原的同步定量检测，有效提高诊断效率。且检测操作流程简单、高效，能在15min内报告结果，适用于呼吸道感染及发热患者的现场快速检测。速检测。速检测。

【技术实现步骤摘要】
一种甲型流感病毒和腺病毒抗原定量检测试剂盒、制备方法及定量检测方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种甲型流感病毒和腺病毒抗原定量检测试剂盒、制备方法及定量检测方法。

技术介绍

[0002]呼吸道病毒感染是临床最常见的疾病之一，其病原学复杂，感染后的症状相似，流行区域重叠，在临床上难以区分。精确的病原学分析是确诊依据，也是合理选择治疗方案的基础，因此呼吸道病毒快速检测已成为当务之急。目前最常见的呼吸道病毒感染是流感病毒和腺病毒。甲型流感病毒(Influenza A Virus，IAV)是流感季节最常见的病毒，通常在冬季流行，约占流感病毒感染总数的75％。我国甲型流感的暴发从未停止。IAV具有很强的变异性，它是引起人类、家畜及禽类流感流行的主要病毒。甲型流感病毒可分为不同的血清亚型，目前已知有16种不同的HA亚型和9种NA亚型。人腺病毒(Human adenovirus，ADV)52种血清型中约有1/3都与人类疾病有关。ADV主要感染儿童及免疫低下人群，该病原体具有强传染性，一旦出现感染很容易导致重症甚至死亡。近日来多个省市出现了关于游泳池引发集体腺病毒感染的新闻。甲型流感病毒的持续流行和腺病毒的暴发给人们的生活和社会公共防疫系统带来了极大的干扰和压力，IAV和ADV已经成为流行病学的主要研究对象之一。因此甲流和腺病毒的检测可作为呼吸道感染患者的重要筛查项目。
[0003]在传染性疾病流行期，早期快速诊断对于患者治疗和疫情防控至关重要，目前IAV和ADV常用的实验室检测方法主要包括病毒分离培养、核酸检测、免疫荧光法等。当2009甲型H1N1流感病毒在全球范围内流行后，世界卫生组织(WHO)和美国疾病预防控制中心(CDC)推荐的实验室检测方法均为实时荧光PCR法。但这些方法需要配备完善的实验室及特殊仪器设备，操作复杂且耗时较长，难以满足现场快速检测的需求。由于感染呼吸道病毒的患者呼吸道黏膜中含有高浓度的病毒，因此直接检测病毒抗原的免疫学方法是个理想的选择。目前应用最广泛的现场快速检测(Point
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of
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care testing,POCT)技术是胶体金免疫层析法，该技术以简便、快速、半定量等优点被视为目前最有潜力的现场快速检测工具，且操作简便，可在15min左右报告结果，非常适合现场快速检测。但胶体金免疫层析法的灵敏度较低，为了提高检测灵敏度，近年来，越来越多的新型纳米材料被用作免疫产品标记物，如纳米荧光染料、上转换纳米颗粒、量子点微球和纳米磁珠等。在这些材料中，荧光量子点微球(Quantum Dot Microsphere Nanobeads，QBs)具备光稳定性好、荧光强度高、发射波长可调等优越的发光性能，且在量子点表面修饰
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COOH、
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NH2等不同的官能团后很容易与抗体等生物大分子进行偶联。因此，基于荧光量子点微球标记的免疫层析产品的灵敏度与稳定性优于胶体金免疫层析产品，且结合荧光检测设备还能实现定量检测。国内外也有一些提高甲流和腺病毒检测灵敏度及呼吸道病毒联合检测的相关研究，不过联合检测可能会耗时更久，甚至需要使用特殊仪器。过去十年中，多通路现场快速检测技术的研究也越来越多。目前作为呼吸道感染患者的重要筛查项目，甲流和腺病毒抗原联合检测的研究十分必要。
[0004]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的第一目的在于提供一种甲型流感病毒和腺病毒的定量检测试剂盒，实现对甲型流感病毒/腺病毒抗原的快速联合检测，以解决上述问题中的至少一种。
[0006]本专利技术的第二目的在于提供上述定量检测试剂盒的制备方法。
[0007]本专利技术的第三目的在于提供一种甲型流感病毒和腺病毒的定量检测方法。
[0008]第一方面，本专利技术提供了一种甲型流感病毒和腺病毒的定量检测试剂盒，包括：量子点微球标记的甲型流感病毒抗体、量子点微球标记的腺病毒抗体、复溶液A、复溶液B和检测试纸；
[0009]所述复溶液A包括：0.03
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0.125mol/L Tris
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HCl、0.5
‑
5wt％Tween
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20、1.5
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6wt％糖、0.1
‑
1wt％牛血清白蛋白和0.1
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1wt％聚乙二醇20000，pH为7.0
‑
10.0；
[0010]所述复溶液B包括：0.01
‑
0.15mol/L Tris
‑
HCl、0.5
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3.5wt％Tween
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20、1.5
‑
6wt％糖、0.1
‑
1wt％牛血清白蛋白和0.1
‑
1wt％聚乙二醇20000，pH为7.0
‑
10.0；
[0011]所述检测试纸的检测线上包被有甲型流感病毒捕获抗体和腺病毒捕获抗体。
[0012]作为进一步技术方案，所述复溶液A包括：0.075mol/L Tris
‑
HCl、3wt％Tween
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20、3wt％糖、0.5wt％牛血清白蛋白和0.5wt％聚乙二醇20000，pH为8.5；
[0013]所述复溶液B包括：0.075mol/L Tris
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HCl、3wt％Tween
‑
20、3wt％糖、0.5wt％牛血清白蛋白和0.5wt％聚乙二醇20000，pH为7.5。
[0014]作为进一步技术方案，所述甲型流感病毒抗体和甲型流感病毒捕获抗体为鼠抗甲型流感病毒单克隆抗体。
[0015]作为进一步技术方案，所述甲型流感病毒抗体选自菲鹏生物股份有限公司，批号为20201012；所述甲型流感病毒捕获抗体选自菲鹏生物股份有限公司，批号为20200702。
[0016]作为进一步技术方案，所述腺病毒抗体和腺病毒捕获抗体为鼠抗腺病毒单克隆抗体。
[0017]作为进一步技术方案，所述腺病毒抗体选自中美歆新生物科技有限公司，批号为A016；所述腺病毒捕获抗体选自中美歆新生物科技有限公司，批号为A477。
[0018]作为进一步技术方案，所述检测试纸为双通道检测试纸；
[0019]所述双通道检测试纸的检测线分别包被有甲型流感病毒捕获抗体和腺病毒捕获抗体，质控线包被羊抗鼠IgG多克隆抗体。
[0020]作为进一步技术方案，所述检测线的划膜抗体浓度分别为：
[0021]甲型流感病毒捕获抗体：0.3
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0.9mg/mL；
[0022]腺病毒捕获抗体：0.7
‑
2.0mg/mL。
[0023]作为进一步技术方案，所述检测线的划膜抗体浓度分别为：
[0024]甲型流感病毒捕获抗体：0.8mg/mL；
[0025]腺病毒捕获抗体：1.0mg/mL。
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种甲型流感病毒和腺病毒的定量检测试剂盒，其特征在于，包括：量子点微球标记的甲型流感病毒抗体、量子点微球标记的腺病毒抗体、复溶液A、复溶液B和检测试纸；所述复溶液A包括：0.03
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0.125mol/L Tris
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HCl、0.5
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5wt％Tween
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20、1.5
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6wt％糖、0.1
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1wt％牛血清白蛋白和0.1
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1wt％聚乙二醇20000，pH为7.0
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10.0；所述复溶液B包括：0.01
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0.15mol/L Tris
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HCl、0.5
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3.5wt％Tween
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20、1.5
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6wt％糖、0.1
‑
1wt％牛血清白蛋白和0.1
‑
1wt％聚乙二醇20000，pH为7.0
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10.0；所述检测试纸的检测线上包被有甲型流感病毒捕获抗体和腺病毒捕获抗体。2.根据权利要求1所述的定量检测试剂盒，其特征在于，所述复溶液A包括：0.075mol/L Tris
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HCl、3wt％Tween
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20、3wt％糖、0.5wt％牛血清白蛋白和0.5wt％聚乙二醇20000，pH为8.5；所述复溶液B包括：0.075mol/L Tris
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HCl、3wt％Tween
‑
20、3wt％糖、0.5wt％牛血清白蛋白和0.5wt％聚乙二醇20000，pH为7.5。3.根据权利要求1所述的定量检测试剂盒...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘琪琦，李小燕，周喆，赵昶旭，王菲，张力，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：