一种基于太赫兹的无酶检测外周血游离microRNAs的方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种基于太赫兹的无酶检测外周血游离microRNAs的方法及试剂盒，通过设计合理的尺寸，并利用纳米颗粒及磁性纳米颗粒组装成3D纳米磁性网络，解决了太赫兹波长与待测miRNAs的物理衍射尺度失匹配问题；所形成的纳米颗粒高折射率引起的表面等离子体共振及磁性纳米粒子的电磁响应机制实现THz超材料共振峰频移信号的双重放大效果，解决了生物样本中miRNA无酶、无扩增式检测的灵敏度问题。利用本发明专利技术的生物传感器具有灵敏度高、特异性强，并且可实现高通量检测，为高重现性、高通量检测miRNAs提供了更具临床应用前景的技术平台。测miRNAs提供了更具临床应用前景的技术平台。测miRNAs提供了更具临床应用前景的技术平台。

【技术实现步骤摘要】
一种基于太赫兹的无酶检测外周血游离microRNAs的方法及试剂盒


[0001]本专利技术涉及医学检测领域，具体涉及一种基于太赫兹的无酶检测外周血游离microRNAs的方法，还涉及基于太赫兹的无酶检测外周血游离microRNAs的试剂盒。

技术介绍

[0002]微小RNA(microRNA)是一种内源性长约21
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25nt的单链短小、非编码RNA分子，通过调控基因调节细胞的生长、凋亡和信号传导。现有大量研究显示肿瘤患者的肿瘤组织及外周血中均可检测到多种microRNA分子的异常表达，从而说明microRNA可作为灵敏度高及特异性强的肿瘤标记物，对预测肿瘤的发生、发展及药物敏感性具有重要作用。目前，外周血microRNA较为成熟的检测方法主要有：克隆测序、Real
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Time PCR、RNA印迹杂交、微阵列芯片技术；微量外周血microRNA通常需要通过扩增进行检测，但由于microRNA序列较短，普通PCR难以进行，虽然目前已有基于茎
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环(stem
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>loop)及基于p本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于太赫兹的无酶检测外周血游离microRNAs的方法，其特征在于：利用纳米磁珠修饰三环链接发夹式探针识别待测靶标microRNA，然后结合金纳米颗粒修饰的桥接探针形成纳米磁珠与金纳米粒子交叉叠加的3D纳米磁性网络，然后用太赫兹超材料纳米生物传感器检测；所述太赫兹超材料纳米生物传感器含有THz超材料芯片，所述THz超材料芯片高阻硅为基片光刻技术将金属沉积在基片表面，形成金属方形开口谐振环，所述谐振环的内环在四条边上对称开口，外环在四个角对称开口。2.根据权利要求1所述基于太赫兹的无酶检测外周血游离microRNAs的方法，其特征在于：所述纳米磁珠修饰三环链接发夹式探针由三环链接发夹式探针和纳米磁珠结合，所述三环链接发夹式探针由4条探针序列构成，分别记为Seq A、Seq B、Seq C及Seq D，所述Seq A、Seq B和Seq C为发夹结构且其中一条序列的3
’
端修饰有氨基，所述发夹结构包括茎环区，互补区和杂交区，所述茎环区与待测靶标microRNA分子互补，所述互补区位于茎环区两端，互为反向互补退火后形成双链结构，杂交区位于发夹结构序列的3
’
端，且分为杂交区Ⅰ和杂交区Ⅱ；所述Seq D包括杂交区Ⅰ和杂交区Ⅱ，Seq A、Seq B、Seq C和Seq D的杂交区Ⅰ和杂交区Ⅱ交叉互补，杂交形成三环链接发夹式探针修饰纳米磁珠。3.根据权利要求1所述基于太赫兹的无酶检测外周血游离microRNAs的方法，其特征在于：所述结合金纳米颗粒修饰的桥接探针由巯基核酸探针、桥接探针和金纳米颗粒构成，所述巯基核酸探针的3
’
端修饰有巯基，所述巯基核酸探针与桥接探针的一端互补；所述桥接探针的游离端与三环链接发夹式探针的反向重复序列互补。4.根据权利要求1所述基于太赫兹的无酶检测外周血游离microRNAs的方法，其特征在于：所述谐振环呈阵列排列形成检测区域。5.根据权利要求1所述基于太赫兹的无酶检测外周血游离microRNAs的方法，其特征在于：所述金属沉积的厚度为200nm。6.根据权利要求1所述基于太赫兹的无酶检测外周血游离microRNAs的方法，其特征在于：所述检测区域的单元面积为1
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1cm。7.根据权利要求1所述基于太赫兹的无酶检测外周血游离microRNAs的方法，其特征在于：所述金属为高折射率金属粒子，所述金属粒子选自Au、Ag或Fe。8.根据权利要求1所述基于太赫兹的无酶检测外周血游离microRNAs的方法，其特征在于：所述太赫兹超材...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨翔，田晖艳，黄国荣，府伟灵，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：