一种裂解酶酶活性测定方法技术

本发明专利技术提供一种裂解酶酶活性测定方法，该方法包括酶活检测体系、检测方法及应用。本方案包含的裂解酶活性的定性定量检测方法，检测程序简单易操作，反应体系微量化，且数据结果成线性分布，解决了裂解酶的酶活检测和进化筛选过程中耗时长、成本高、可重复性差、难以进行高通量筛选等诸多问题。高通量筛选等诸多问题。高通量筛选等诸多问题。

【技术实现步骤摘要】
一种裂解酶酶活性测定方法


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种能够有效检测裂解酶活性的方法及其应用。

技术介绍

[0002]随着微生物病原体法的演化，以及抗生素药物的滥用，新型耐药机制正不断涌现，多种耐药菌和泛耐药菌的出现已成为21世纪主要的公共卫生威胁之一，严重危害了人们的生命健康安全。此外抗生素也逐渐暴露更多问题，如破坏有益菌群、破坏器官、产生免疫效应、过敏反应等。面对使用经典抗生素产生种种问题，人们迫切寻求一种可替代的治疗方案，而近年来各种来源的胞壁裂解酶走入了人们的视野。这类裂解酶具有降解肽聚糖的潜力，在外源添加时可作为有效的抗菌剂。
[0003]天然裂解酶往往具有高度的宿主特异性和强烈的裂解活性，能破坏细菌生物膜，而且具备绿色安全、不易产生耐药等优势。同时，裂解酶具有无限研究潜力，运用蛋白质工程技术、合成生物学技术将其重组改造，可增强其裂解活性、提高稳定性以及靶向性，这使其在成为新型抗菌药物方面拥有广阔的前景，而且做为大分子蛋白，法规监管路径也很清晰。裂解酶的优势主要在以下三点：（1）不易引起细菌耐药性：裂解酶的结本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种裂解酶酶活性测定方法，其特征在于，其包括如下步骤：第一步，将培养已过对数生长期的特异性底物菌离心，收集菌体，使用0.1M 磷酸盐缓冲液重悬；第二步，将底物菌悬浊液加入测定板，使用酶标仪测量菌体吸光值，将其稀释至OD450nm=0.8~1.1；第三步，将底物菌与裂解酶以15
‑
25：1的比例混合加入多孔板，间隔测定吸光值，观察吸光值变化量；第四步，计算裂解酶活性。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述特异性底物菌选自金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、产气荚膜菌，所述裂解酶选自金黄色葡萄球菌裂解酶、大肠杆菌裂解酶、产气荚膜菌裂解酶；所述特异性底物菌培养已过对数生长期是指培养14
‑
18h。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，第三步中所述裂解酶的浓度稀释至0.2
‑
0.6mg/mL。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，第三步中，底物菌与裂解酶以18
‑
20：1的比例混合加入多孔板。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述测定板是多孔板。6.如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：张慧泽，李瑞琦，张晓立，李华珍，章家泉，
申请(专利权)人：百葵锐天津生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：