软枣猕猴桃光响应基因AaHY5like9及其应用制造技术

本申请属于猕猴桃基因工程技术领域，具体涉及一个软枣猕猴桃光响应基因AaHY5like9及其应用专利申请事宜。软枣猕猴桃光响应基因AaHY5like9碱基序列如SEQ ID No.1所示。该基因所编码蛋白作物转录因子，与光响应相关。本申请中，发明专利技术人利用全基因组水平的家族鉴定，克隆获得了一个与软枣猕猴桃果实品质相关的关键光响应基因AaHY5like9，并结合相关重组表达载体构建和异源转化验证，证实了AaHY5like9具有光响应特征。基于这一结果，可为软枣猕猴桃果实品质调控、以及高品质软枣猕猴桃新品种培育奠定一定基因遗传资源基础。培育奠定一定基因遗传资源基础。

【技术实现步骤摘要】
软枣猕猴桃光响应基因AaHY5like9及其应用


[0001]本申请属于猕猴桃基因工程
，具体涉及一个软枣猕猴桃光响应基因AaHY5like9及其应用专利申请事宜。

技术介绍

[0002]果树生产效益很大程度上取决于果实品质，品质提升是果树育种的重要目标之一。软枣猕猴桃作为近年的一种新兴果品，具有果形特异、果皮可食、无需后熟、采下即食的特性，特别是红色软枣猕猴桃外观鲜艳靓丽，富含花色苷抗氧化物质，受到了广大消费者的喜爱。但实际栽培中，软枣猕猴桃普遍存在着色不良、口感欠佳、采前落果等品质较差的生产问题，进而使得这一果品的推广受到了较大障碍。
[0003]遗传学研究表明，生物表型的显现取决于两个重要因素：遗传因素和环境因素，即基因型和环境因子。其中，基因型从根本上决定了生物是否具有表现该性状的能力，环境因子则对性状强弱具有直接影响。
[0004]近年来，随着基因工程技术的快速进展，以及猕猴桃基因工程的展开，挖掘与猕猴桃果实品质相关基因，对于改善果品品质、培育新品种，都具有极为重要的技术意义。

技术实现思路

[0005]本申请目的在于提供一个与软枣猕猴桃（Actinidia arguta (Sieb. & Zucc) Planch. ex Miq）果实品质调控的光响应基因AaHY5like9，从而为相关果实品质调控、以及软枣猕猴桃新品种培育奠定一定技术基础。
[0006]本申请所采取的技术方案详述如下。
[0007]软枣猕猴桃光响应基因AaHY5like9，其碱基序列如SEQ ID No.1所示，具体序列如下：ATGTCTAGTGAGAAAGAGAAAGAATCGGCCGAGGGCTCGTCGCGATCGACGGCGACCATAAGCCGGTATGAGTCGCAGAAGCGTCGAGACTGGAACACCTTTGGCCAGTATTTGAAAAATCACATGCCGCCTGTACCTCTGTCTCAGTGCACTTGCAACCATGTCCTCGAGTTCCTTCGTTATCTCGATCAGTTCGGGAAGACTAAGGTTCACTTACATGGGTGTGTGTTTTTCGGGCAGCCAGACCCACCTGCCCCGTGCACTTGCCCGCTGAGGCAAGCGTGGGGATCGCTGGATGCCCTGATCGGACGGCTGAGAGCCGCCTATGAGGAGCACGGCGGGTCCCCGGAGACGAACCCATTTGGGAACGGGGCGATACGTGTATATTTACGGGAAGTTAAGGAGTGCCAAGCGAAGGCGCGAGGGATTCCGTACAAGAAGAAGAAGAAGAAGAAGAAGATGATCAAAGCAAACCATGAAGAACTCAAGTCTTCCAAACAGCCCACTTGA。
[0008]所述软枣猕猴桃光响应基因AaHY5like9所编码蛋白光响应蛋白，其氨基酸序列（169aa）如SEQ ID No.2所示，具体为：MSSEKEKESAEGSSRSTATISRYESQKRRDWNTFGQYLKNHMPPVPLSQCTCNHVLEFLRYLDQFGKTKVHLHGCVFFGQPDPPAPCTCPLRQAWGSLDALIGRLRAAYEEHGGSPETNPFGNGAIRVYLREVKECQAKARGIPYKKKKKKKKMIKANHEELKSSKQPT。
[0009]PCR扩增所述软枣猕猴桃光响应基因AaHY5like9用引物对，具体设计如下：
F：ATGTCTAGTGAGAAAGAGAAAGAATCG；R：TCAAGTGGGCTGTTTGGAAGA。
[0010]所述软枣猕猴桃光响应基因AaHY5like9在软枣猕猴桃中应用，软枣猕猴桃光响应基因AaHY5like9所编码蛋白作为转录因子，与光响应相关。
[0011]含有所述软枣猕猴桃光响应基因AaHY5like9的重组超表达载体，以pBI121质粒为载体，重组含有AaHY5like9基因。
[0012]利用所述软枣猕猴桃光响应基因AaHY5like9的拟南芥新品种培育方法，通过超表达软枣猕猴桃光响应基因AaHY5like9，用于调节拟南芥种子发芽后的下胚轴长度。
[0013]多年调查研究中，专利技术人认为，软枣猕猴桃栽培中，光照不良（果园郁蔽）所导致的果实受光不足或者不均，是导致果实品质较差的主要原因。其技术原理是：一方面，光为植株正常进行光合作用提供了能量，保证了果实的生长发育，另一方面，光作为环境信号参与了果实的形态建成。因此，果实生长发育过程中接受足够的光照是高品质果实形成的前提。鉴于基因在果实品质中的决定性作用，因此，通过挖掘关键光响应基因对提升果实品质具有重要的技术意义。
[0014]本申请中，专利技术人利用全基因组水平的家族鉴定，克隆获得了一个与软枣猕猴桃果实品质相关的关键光响应基因AaHY5like9，并结合相关重组表达载体构建和异源转化验证，证实了AaHY5like9具有光响应特征。基于这一结果，可为软枣猕猴桃果实品质调控、以及高品质软枣猕猴桃新品种培育奠定一定基因遗传资源基础。
附图说明
[0015]图1为中华猕猴桃中15个HY5like基因的染色体位置分布示意图；图2为中华猕猴桃中 15个HY5like基因结构分析；图3为中华猕猴桃中 15个HY5like成员与其他32个物种HY5基因的系统发育分析；图4为软枣猕猴桃中AaHY5like基因的同源克隆和候选基因的表达模式分析；其中：a为15个中华猕猴桃中HY5like基因在软枣猕猴桃中的同源克隆结果；b为软枣猕猴桃中AaHY5like2的表达水平分析；c为软枣猕猴桃中AaHY5like9的表达水平分析；d为软枣猕猴桃中AaHY5like11的表达水平分析；e为软枣猕猴桃中AaHY5like2、AaHY5like9、AaHY5like11三个基因的表达模式聚类分析；图5为软枣猕猴桃中AaHY5like9的亚细胞定位结果；其中：a为所构建重组质粒载体pBI121::AaHY5like9结构示意图，其带有35S启动子和GFP标签；b为绿色荧光信号的观察结果，可以看出：只携带GFP标签的空载体pBI121荧光位于细胞核和细胞质，而AaHY5like9
‑
GFP定位于细胞核；图6为拟南芥hy5突变体遗传转化PCR阳性检测结果；其中：前面16个泳道为阳性植株，片段大小670 bp，最后一个泳道为阴性对照（NC）；图7为拟南芥hy5突变体的回补结果；其中：
a为野生型、hy5突变体、AaHY5like9转化hy5突变体的下胚轴表型；b为下胚轴长度统计结果。
具体实施方式
[0016]下面结合实施例对本申请做进一步的解释说明。
[0017]实施例1鉴于光照对果树果实品质的重要影响，结合软枣猕猴桃栽培和果实品质改良需要，专利技术人认为有必要对软枣猕猴桃中光响应相关基因进行进一步挖掘和分析。因此，本实施例首先就相关基因的挖掘过程简要介本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.软枣猕猴桃光响应基因AaHY5like9，其特征在于，其碱基序列如SEQ ID No.1所示，具体序列如下：ATGTCTAGTGAGAAAGAGAAAGAATCGGCCGAGGGCTCGTCGCGATCGACGGCGACCATAAGCCGGTATGAGTCGCAGAAGCGTCGAGACTGGAACACCTTTGGCCAGTATTTGAAAAATCACATGCCGCCTGTACCTCTGTCTCAGTGCACTTGCAACCATGTCCTCGAGTTCCTTCGTTATCTCGATCAGTTCGGGAAGACTAAGGTTCACTTACATGGGTGTGTGTTTTTCGGGCAGCCAGACCCACCTGCCCCGTGCACTTGCCCGCTGAGGCAAGCGTGGGGATCGCTGGATGCCCTGATCGGACGGCTGAGAGCCGCCTATGAGGAGCACGGCGGGTCCCCGGAGACGAACCCATTTGGGAACGGGGCGATACGTGTATATTTACGGGAAGTTAAGGAGTGCCAAGCGAAGGCGCGAGGGATTCCGTACAAGAAGAAGAAGAAGAAGAAGAAGATGATCAAAGCAAACCATGAAGAACTCAAGTCTTCCAAACAGCCCACTTGA。2.权利要求1所述软枣猕猴桃光响应基因AaHY5like9所编码蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，具体如下：MSSEKEKESAEGSSRSTATISRYESQKRRDWNTFGQYLKNHMPPVPLSQCTCNHVLEFLRYLDQFG...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书一页说明书八页序列表电子公布附图三页，
申请(专利权)人：中国农业科学院郑州果树研究所，
类型：发明
国别省市：