一种用于抑制由猪链球菌感染引起IGF-1R转录水平上调的中药方剂的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用于抑制由猪链球菌感染引起IGF

【技术实现步骤摘要】
一种用于抑制由猪链球菌感染引起IGF
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1R转录水平上调的中药方剂的制备方法


[0001]本专利技术涉及猪链球菌性脑膜炎的药物应用
，特别涉及一种用于抑制由猪链球菌感染引起IGF
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1R转录水平上调的中药方剂的制备方法

技术介绍

[0002]猪链球菌是一种革兰氏阳性菌，可引起猪产生脑膜炎、败血症、关节炎和心内膜炎等临床症状。猪链球菌感染范围目前主要在东南亚的猪肉消费和养猪国家，对养猪业造成了巨大的经济损失，成为影响中国养猪业的主要传染病之一。更为重要的是，猪链球菌是一种重要的人畜共患病原体，最公众健康构成重大威胁，主要通过与病猪和猪肉的密切接触从猪传播给人类，可导致人类脑膜炎、链球菌中毒性休克综合征，严重情况下甚至可能导致死亡。无论猪和人，猪链球菌感染最显著的特点都是引起急性脑膜炎，最终导致严重的中枢神经系统(CNS)损害和死亡，死亡率为68％。此外，人感染后会出现严重的后遗症，比如永久性耳聋和心内膜炎。
[0003]目前国内外仍以抗生素类治疗为主，但长期使用抗生素类药物治疗畜禽疾病容易造成病原微生物耐药性的产生，且易造成动物性食品药物残留，因此开发无耐药性、毒副作用小的药物有较大的发展前景。
[0004]胰岛素样生长因子受体蛋白1(insulin
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like growth factor 1receptor，IGF
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1R)为酪氨酸激酶受体家族的主要成员之一，广泛分布于上皮细胞和间充质细胞，在正常生长和发育中起关键作用。研究表明，IGF
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1R信号通路的表达与细胞的增殖、分化，抑制凋亡有关，目前在癌症研究(如胰腺癌、乳腺癌、肺癌和结肠癌的恶性表型的发展和维持)和病毒(如呼吸道合胞病毒、博尔纳病病毒)等治疗疾病方面已有多项研究报道，但目前暂无关于结合IGF
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1R信号通路治疗细菌导致脑膜炎的相关研究。并且鬼臼毒素等IGF
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1R小分子抑制在使用后普遍都存在毒副作用大、生物利用度低、容易产生耐药性和价格昂贵的缺点，因此在临床治疗中受到限制。
[0005]中药资源充裕，价格适中，含有多种营养成分和化学成分，经过数千年的临床实践，具有明确的治疗效果，具有多组分、多靶点、多路径的综合治疗品质，并且不会出现耐药性和药物残留等问题。同时中药对机体的副作用较小，因此在临床上有很好的应用价值。
[0006]综上所述，由于该病在公共卫生中的危害性和畜禽养殖中的“限抗令”，我们亟需开发一种安全有效的新型药物来治疗该病。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种用于抑制由猪链球菌感染引起IGF
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1R转录水平上调的中药方剂的制备方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0008]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种用于抑制由猪链球菌感染引起IGF
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1R转录水平上调的中药方剂的制备方法，包括能下调由猪链球菌引起升高的IGF
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1R转
录水平的中药药物之间根据中药配伍原则进行配合制备，其制备方法包括以下步骤：
[0009]S1：配药，首先将各种药物按照比重进行配置，将药材准备好，然后准备药物重量10倍的蒸馏水；
[0010]S2：浸泡，将准备好的药材加入药物重量10倍的蒸馏水将药物浸泡一段时间；
[0011]S3：一次熬煮，将浸泡一段时间后的药材，使用武火煮沸后文火熬煮一段时间，对熬制后的药液进行过滤，收集药液；
[0012]S4：二次熬煮，准备6倍量药重的蒸馏水，然后往药渣加入6倍量药重的蒸馏水再煎煮一段时间，对熬制后的药液进行过滤，收集药液；
[0013]S5：蒸汽灭菌，合并步骤S3和步骤S4的2次药液，旋转蒸发浓缩至药液中生药含量为1.0g/mL，进行高温高压蒸汽灭菌一段时间，然后保存备用。
[0014]优选的，所述中药方剂应用到猪链球菌感染小鼠脑膜炎模型和猪链球菌感染hBMEC体内模型进行验证对IGF
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1R的作用效果。
[0015]优选的，所述步骤S2中的浸泡时间具体为30min，所述步骤S3中的文火熬煮时间具体为15min，所述步骤S4中的文火煎煮时间具体为15min，所述步骤S5中的蒸汽灭菌温度为115℃，时间为15min，且药剂保存的温度为4℃。
[0016]优选的，所述下调IGF
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1R的中药及及份数包括甘草10份，钩藤30份，天麻20份，栀子10份，当归10份，川芎10份，石菖蒲15份，水牛角20份和大青叶10份。
[0017]一种用于抑制由猪链球菌感染引起IGF
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1R转录水平上调的中药方剂的制备方法，
[0018]实验方法：建立猪链球菌感染小鼠脑膜炎模型，将88只6周龄雌性BALB/C小鼠分为实验组和观察组，实验组随机分成8组，每组5只，观察组随机分为8组，每组6只，分组与实验组相同，各组小鼠分笼饲养，入笼后适应性饲养7天；
[0019]给药方案：SC19感染组、中药方剂治疗组、磺胺嘧啶钠治疗组、中药方剂+磺胺嘧啶钠治疗组分别采用尾静脉注射方式进行SC19攻毒，每只注射100μL菌液，攻毒剂量为108CFU/只；其余各组采用尾静脉注射方式注射无菌PBS100μL/只，攻毒24h后每天固定时间为小鼠给相应药物，连续给药3天，实验组给药3天后处死小鼠，进行后续实验；观察组每日观察小鼠症状并记录各组小鼠死亡率；
[0020]载菌量测定：在无菌条件下从实验小鼠中收集脑组织于2mL无菌研磨管中，加入无菌PBS进行匀浆，梯度稀释后取100μL涂布TSA平板，置于37℃培养箱培养16
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18h。观察结果并进行SC19计数，单菌落数目在30
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300内为有效计数，通过统计和计算确定每克均质组织中CFU数值。
[0021]组织IGF
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1R和炎症因子水平检测：荧光定量PCR进行检测各组小鼠脑组织IGF
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1R和炎性因子IL
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6、IL
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1β和TNF
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α的表达水平。
[0022]组织血脑屏障通透性评估：通过检测各组小鼠脑组织伊文思蓝外渗含量评估血脑屏障通透性。
[0023]细胞通透性检测：在Transwell小室中培养hBMEC细胞至致密单层，实验分组使用SC19(108CFU/孔)刺激1.5h后继续添加相应浓度的药物处理hBMEC细胞，并在添加药后3h、6h、9h、12h分别测定上层小室中hBMEC的(Transendothelial electrical resistance，TEER)数值，记录并计算数值下降百分比。
[0024]优选的，所述小鼠分组实验组和观察组的8组分别为空白对照组、中药方剂对照
组、磺胺嘧啶钠对照组、中药方剂+磺胺嘧啶钠对照组、SC19感染组、中药方剂治疗组、磺胺嘧啶钠本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于抑制由猪链球菌感染引起IGF
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1R转录水平上调的中药方剂的制备方法，其特征在于，能下调由猪链球菌引起升高的IGF
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1R转录水平的中药之间根据中药配伍原则进行选择并制备，其制备方法包括以下步骤：S1：配药，首先将各种药物按照比重进行配置，将药材准备好，然后准备药物重量10倍的蒸馏水；S2：浸泡，将准备好的药材加入药物重量10倍的蒸馏水将药物浸泡一段时间；S3：一次熬煮，将浸泡一段时间后的药材，使用武火煮沸后文火熬煮一段时间，对熬制后的药液进行过滤，收集药液；S4：二次熬煮，准备6倍量药重的蒸馏水，然后往药渣加入6倍量药重的蒸馏水再煎煮一段时间，对熬制后的药液进行过滤，收集药液；S5：蒸汽灭菌，合并步骤S3和步骤S4的2次药液，旋转蒸发浓缩至药液中生药含量为1.0g/mL，进行高温高压蒸汽灭菌一段时间，然后保存备用。2.根据权利要求1所述的一种用于抑制由猪链球菌感染引起IGF
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1R转录水平上调的中药方剂的制备方法，其特征在于，所述下调IGF
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1R的中药包括钩藤、栀子、川芎、甘草、水牛角、石菖蒲、当归、大青叶和天麻。3.根据权利要求1所述的一种用于抑制由猪链球菌感染引起IGF
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1R转录...

【专利技术属性】
技术研发人员：金卉，陈礼颖，王德海，胡薛英，石德时，肖运才，贺艳玲，滑柯鑫，王浩宇，许千帅，龚慧敏，孙煜，王铭杨，马宾，关傲寒，高远，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：