一种酿酒酵母mStr003及其在生产β-熊果苷中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种酿酒酵母mStr003及其在生产β

【技术实现步骤摘要】
一种酿酒酵母mStr003及其在生产
β
‑
熊果苷中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种酿酒酵母mStr003及其在生产β
‑
熊果苷中的应用。

技术介绍

[0002]β
‑
熊果苷，又名熊果素，是一种无刺激、无过敏、配伍性强的天然美白活性物质，能够通过抑制体内酪氨酸酶的活性，阻止黑色素的生成，从而减少皮肤色素沉积，祛除色斑和雀斑，同时还有杀菌、消炎的作用，广泛应用于化妆品和医疗行业中。
[0003]目前，β
‑
熊果苷可以通过植物提取、植物细胞培养、化学合成、酶转化、微生物发酵法5种方法得到。其中，植物提取和植物细胞培养方法受转化率低、成本等因素的制约，很少用于工业化生产。化学合成法，将对苯二酚乙酰化得到β
‑
五乙酰熊果苷，后经脱保护得到β
‑
熊果苷；化学合成法，该方法在常压下进行，收率高、原料易得、操作简单，适合大规模的工业化生产，但是该方法催化效率低、选择性低，而且原料剧毒，环境污染大。由于氢醌剧毒，抑制酶的活性，并且底物和产物分离困难，故酶转化也不适于工业化生产。对于微生物发酵法，CN201910968220.6公开了一种生产β
‑
熊果苷的工程菌，其包括在宿主内共表达编码异分支酸合成酶、异分支酸丙酮酸裂解酶、邻氨基苯甲酸5
‑
羟化酶、龙胆酸脱羧酶和葡糖基转移酶的基因，利用上述生产β
‑
熊果苷的工程菌，以葡萄糖、甘油等碳源来生产β
‑
熊果苷，实现了β
‑
熊果苷的从头合成；但基因工程菌存在质粒容易丢失，生产不稳定的问题，使发酵体系中存在大量不合成目标产物β
‑
熊果苷的菌体，造成了碳源的浪费，β
‑
熊果苷转化率降低。CN202111387603.8公开了一种高产β
‑
熊果苷的基因工程菌，其在宿主内整合编码4
‑
羟基苯甲酸羟化酶和葡萄糖基转移酶的基因，但是该菌种在提高β
‑
熊果苷产量的同时也产生了大量的对羟基苯甲酸等副产物。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于利用传统微生物选育手段，筛选一种发酵性能稳定的微生物，用于稳定、高效生产β
‑
熊果苷。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：本专利技术的第一方面，提供了一种酿酒酵母mStr003。该酵母菌株从土壤中筛选得到，已于2022年09月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 20221443，分 类命名为酿酒酵母mStr003（Saccharomyces cerevisiae mStr003），保藏地址为中国湖北武汉，武汉大学。
[0006]本专利技术的第二方面，提供了所述酿酒酵母mStr003的筛选方法，包括下述步骤：S1、向100ml无机盐培养基中加入从化工厂周围采集的土壤样品10g、葡萄糖2g、蛋白胨2g、酵母粉1g、青霉素10mg，在30℃，180rpm条件下振荡培养48h；将上一步的培养液以10%接种量转接至100ml无机盐培养基中，再加入葡萄糖2g、蛋白胨2g、酵母粉1g、青霉素10mg，30℃，180rpm条件下振荡培养24h；将上一步的培养液以5%接种量转接至含有2g葡萄
糖、2g蛋白胨、1g酵母粉和10mg青霉素的100ml无机盐培养基中，在30℃、180rpm条件下培养24h，将经过三轮驯化的菌液涂在YPD固体培养基上，放入30℃恒温培养箱培养48h，挑取单菌落，转接至新的YPD固体培养基上，经过3次分离纯化，获得单一菌落。
[0007]S2、将步骤S1的单一菌落接种到初筛培养基中进行初筛，培养温度为25~32℃，培养3天，选择培养过程中颜色最先由墨绿色变成黄色再恢复成墨绿色的菌株，获得初筛菌株；其中，初筛培养基为：葡萄糖10~30g
∙
L
‑1、酵母粉5~10g
∙
L
‑1、蛋白胨5~10g
∙
L
‑1、NaHPO44~10g
∙
L
‑1、KH2PO43~8g
∙
L
‑1、NH4Cl0.5~2g
∙
L
‑1、溴甲酚绿0.2g
∙
L
‑1、青霉素10mg
∙
L
‑1、对苯二酚0.5~1g
∙
L
‑1、琼脂20g.L
‑1；优选为：葡萄糖10g
∙
L
‑1，酵母粉5g
∙
L
‑1、蛋白胨5g
∙
L
‑1、NaHPO45g
∙
L
‑1、KH2PO43g
∙
L
‑1、NH4Cl1g
∙
L
‑1、溴甲酚绿0.2g
∙
L
‑1、青霉素10mg
∙
L
‑1、对苯二酚0.5g
∙
L
‑1、琼脂20g.L
‑1。
[0008]S3、将步骤S2的初筛菌株转接到复筛培养基中进行复筛，培养温度为28~32℃、摇瓶转速为150~200rpm、培养3~5天，检测发酵液中β
‑
熊果苷含量，选出生长良好、生物学性状较优，β
‑
熊果苷产量高的菌株，该菌株经鉴定为酿酒酵母，分类命名为酿酒酵母mStr003（SaccharomycescerevisiaemStr003）；其中，复筛培养基为：葡萄糖30~60g
∙
L
‑1、酵母粉5~15g
∙
L
‑1、蛋白胨15~25g
∙
L
‑1、Na2HPO44~10g
∙
L
‑1、KH2PO43~8g
∙
L
‑1、NH4Cl0.5~2g
∙
L
‑1、MgSO40.5~2mg/L；优选为：葡萄糖45g
∙
L
‑1、酵母粉8g
∙
L
‑1、蛋白胨20g
∙
L
‑1、Na2HPO46g
∙
L
‑1、KH2PO46g
∙
L
‑1、NH4Cl1g
∙
L
‑1、MgSO40.5mg
∙
L
‑1。
[0009]本专利技术的第三方面，提供了上述酿酒酵母mStr003在生产β
‑
熊果苷中的应用。
[0010]本专利技术的第四方面，提供了一种生产β
‑
熊果苷的方法，利用上述酿酒酵母mStr003发酵生产β
‑
熊果苷。
[0011]本专利技术的优选技术方案中，所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种酿酒酵母mStr003，其特征在于，保藏编号为CCTCC NO:M 20221443。2.权利要求1所述酿酒酵母mStr003在生产β
‑
熊果苷中的应用。3.一种生产β
‑
熊果苷的方法，其特征在于，利用权利要求1所述酿酒酵母mStr003发酵生产β
‑
熊果苷。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，包括下述步骤：将活化后的权利要求1所述酿酒酵母mStr003接种到发酵培养基中，在通气条件下，28~32℃发酵培养65~96h。5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基组成包括：可再生碳源30~60g
∙
L
‑1、酵母粉5~10g
∙
L
‑1、CaCO
3 5~10g
∙
L
‑1、Na2HPO
4 4~10g
∙
L
‑1、KH2PO
4 3~8g
∙
L
‑1、NH4Cl 0.5~2g
∙
L
‑1、MgSO
4 0.5~2mg
∙
L
‑1、FeSO
4 0.5~1mg
∙
L
‑1、CaCl
2 0.5~1mg
∙
L
‑1，pH6.0~7.5。6.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：张凯月，马祥亮，
申请(专利权)人：合肥华恒生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：