一种生物发酵培养制备paraherquamideA的方法技术

本发明专利技术公开了一种生物发酵培养制备paraherquamide A的方法。本发明专利技术产paraherquamide A的青霉菌，其特征在于，命名为青霉(Penicillium sp.)，株号KWF31，保藏号CCTCC NO.M 20221625。本发明专利技术筛选获得了一株能够产paraherquamide A的青霉菌株，并且本发明专利技术经过培养条件优化，使得生物发酵培养时paraherquamide A的产量得到了提高，最高比初始产量(42mg/L)提高了约6倍。并进一步优化了分离纯化的方法，能够获得较为纯净的产物。能够获得较为纯净的产物。能够获得较为纯净的产物。

【技术实现步骤摘要】
一种生物发酵培养制备paraherquamide A的方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种生物发酵培养制备paraherquamide A的方法。

技术介绍

[0002]是由动物保健药和疫苗公司硕腾Zoetis开发的一种新型的绵羊口服短效杀虫药，该药的药效成分是得曲恩特(Derquantel，10mg/mL)和阿维菌素(1mg/mL)。可杀死对含左旋咪唑、苯并咪唑、大环内酯和三氯苯咪唑等杀虫剂形成抵抗力的蠕虫，如捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)、环纹背带线虫(Teladorsagia circumcincta)、蛇形毛圆线虫(Trichostrongylus colubriformis)等。标准剂量为1mL/5kg(药液体积/绵羊体重)，成年绵羊按50kg计算相当于每只绵羊用药一次需要0.5g得曲恩特。根据世界粮农组织的统计数据，世界绵羊存栏量超过10亿只。因此，保守估计得曲恩特的潜在需求量为百吨级甚至更高，市场需求巨大。
[0003][0004]得曲恩特是真菌代谢产物paraherquamide A(简称PHQ A，CAS号77392
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6，化学式如式Ⅰ所示)的化学衍生物，可由paraherquamide A经酰胺羰基还原、脱氧而获得(Mauragis Micheal A,Lipton Micheal F,Veley Micheal F.Process Development and Preparation of 2<br/>‑
Deoxyparaherquamide:Implementation of a Selective Reduction of Secondary Amides on a Kilogram Scale.Organic Process Research&amp;Development,2002,6,192
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196.)，是目前工业生产得曲恩特的工艺路线。该化学反应得率达到75％以上，因此得曲恩特的工业原料供应主要是受paraherquamide A产量影响。而paraherquamide类天然产物产物化学结构复杂，虽然已有利用工业原料异戊二烯或异戊二烯环氧化物化学全合成paraherquamide A的方法，但其化学反应步骤多达46步(Williams Robert M,Cao Jianhua,Tsujishima H,et al.Asymmetric,stereocontrolled total synthesis of paraherquamide A.Journal of American Chemistry Society,2003,125,12172
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12178)，收率极低，不适用于工业生产。利用微生物发酵生产paraherquamide A是目前大规模获得
该化合物的唯一途径。

技术实现思路

[0005]本专利技术针对现有技术中存在的不足，提供了一种生物发酵培养制备paraherquamide A的方法。
[0006]本专利技术首先提供了一种产paraherquamide A的青霉菌，命名为青霉(Penicilliumsp.)，株号KWF31，保藏号CCTCC NO.M 20221625。
[0007]本专利技术又提供了一种生物发酵培养制备paraherquamide A的方法，包括以下步骤：在培养基中接种权利要求1所述青霉菌并进行发酵培养，发酵培养完成后分离纯化获得化合物paraherquamide A，
[0008]其中，培养基中碳源为蔗糖、葡萄糖、麦芽糖和可溶性淀粉中的至少一种；
[0009]氮源为蛋白胨、黄豆饼粉、酵母粉和硝酸盐中的至少一种；
[0010]接种量为孢子终浓度为105～107sp/mL；
[0011]发酵培养温度为20～30℃，发酵培养时初始pH为6.0～9.0。
[0012]培养基中碳源包括可溶性淀粉，可溶性淀粉质量体积比浓度为0.5％～4％；优选的，可溶性淀粉质量体积比浓度为2％～2.5％。更优选的，培养基中碳源包括可溶性淀粉和葡萄糖，其中，葡萄糖的质量体积比浓度为0.5％～4％。
[0013]氮源包括酵母粉，酵母粉质量体积比浓度为0.3％～2.4％；优选的，酵母粉的质量体积比浓度为0.9％～1.8％。更优选的，氮源包括酵母粉和硝酸盐，其中，硝酸盐的质量体积比含量为0.2％～1.6％；优选的，硝酸盐的质量体积比含量为0.6％～1.2％；更优选的，硝酸盐的质量体积比含量为0.6％～0.8％。
[0014]优选的，培养基中还包括无机盐，无机盐包括MgSO4、MnCl2、ZnSO4和CoCl2中的至少一种，MgSO4的质量体积比浓度为0.0125％～0.2000％；MnCl2的质量体积比浓度为0.02％～0.04％；ZnSO4的质量体积比浓度为0.04％～0.08％；CoCl2的质量体积比浓度为0.0025％～0.0400％。更优选的，CoCl2的质量体积比浓度为0.0050％～0.0100％。
[0015]更优选的，无机盐包括MgSO4、MnCl2、ZnSO4和CoCl2，其中，MgSO4的质量体积比浓度为0.1％，MnCl2的质量体积比浓度为0.004％，ZnSO4的质量体积比浓度为0.004％，CoCl2的质量体积比浓度为0.0005％。
[0016]发酵培养时接种量为孢子终浓度为105～106sp/mL；发酵培养温度为20～27℃；发酵培养时初始pH为7.0～7.5。
[0017]分离纯化时使用大孔吸附树脂进行吸附，然后使用体积比浓度为20％的乙醇洗去杂质，然后使用体积比浓度为80％的乙醇解吸；大孔吸附树脂型号为SP825L。
[0018]各组分均按质量体积比浓度计，优化后的最优的培养基配方为SGY(％)：可溶性淀粉3.1％，葡萄糖1.28％，酵母粉1.44％，硝酸钠(NaNO3)0.8％，MgSO
4 0.1％，MnCl
2 0.004％，ZnSO
4 0.004％，CoCl
2 0.0005％。培养条件为接种终浓度105～106sp/mL，发酵温度25℃，初始pH 7.0。
[0019]本专利技术筛选获得了一株能够产paraherquamide A的青霉菌株，并且本专利技术经过培养条件优化，使得生物发酵培养时paraherquamide A的产量得到了提高，最高比初始产量(42mg/L)提高了约6倍。并进一步优化了分离纯化的方法，能够获得较为纯净的产物。
附图说明
[0020]图1为菌株KWF31的菌落图。
[0021]图2为不同碳源对发酵水平的影响结果图。
[0022]图3为可溶性淀粉含量对发酵水平的影响结果图。
[0023]图4为葡萄糖含量对发酵水平的影响结果图。
[0024]图5为不同氮源对发酵水平的影响结果图。
[0025]图6本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种产paraherquamide A的青霉菌，其特征在于，命名为青霉(Penicillium sp.)，株号KWF31，保藏号CCTCC NO.M 20221625。2.一种生物发酵培养制备paraherquamide A的方法，其特征在于，包括以下步骤：在培养基中接种权利要求1所述青霉菌并进行发酵培养，发酵培养完成后分离纯化获得化合物paraherquamide A，其中，培养基中碳源为蔗糖、葡萄糖、麦芽糖和可溶性淀粉中的至少一种；氮源为蛋白胨、黄豆饼粉、酵母粉和硝酸盐中的至少一种；接种量为孢子终浓度为105～107sp/mL；发酵培养温度为20～30℃，发酵培养时初始pH为6.0～9.0。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，培养基中碳源包括可溶性淀粉，可溶性淀粉质量体积比浓度为0.5％～4％；优选的，可溶性淀粉质量体积比浓度为2％～2.5％。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，培养基中碳源包括可溶性淀粉和葡萄糖，其中，葡萄糖的质量体积比浓度为0.5％～4％。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，氮源包括酵母粉，酵母粉质量体积比浓度为0.3％～2.4％；优选的，酵母粉的质量体积比浓度为0.9％～1.8％。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，氮源包括酵母粉和硝酸盐，其中，硝酸盐的质量体积...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐金钟，王品美，陈晓娜，彭加飞，
申请(专利权)人：极致生物技术杭州有限公司，
类型：发明
国别省市：