玫瑰黄链霉菌LN33在促进烟草生长发育方面的应用制造技术

本发明专利技术涉及玫瑰黄链霉菌LN33在促进烟草生长发育方面的应用，属于农业微生物技术领域，本发明专利技术通过在烟草育苗基质中拌入所述菌株发酵液，使烟草种子快速萌发、烟苗长势一致、提高了烟苗的农艺性状和育苗效率，同时，LN33菌株发酵液能显著促进MS培养基培养下烟苗的生长发育，进一步说明LN33菌株对烟苗的促生作用，可为烟草生产中施用生防菌剂及生物菌肥提供理论依据。供理论依据。供理论依据。

【技术实现步骤摘要】
玫瑰黄链霉菌LN33在促进烟草生长发育方面的应用


[0001]本专利技术属于农业微生物
，具体涉及玫瑰黄链霉菌LN33在促进烟草生长发育方面的应用。

技术介绍

[0002]20世纪90年代以来，可持续发展逐渐成为世界大多数国家的基本发展战略，农业可持续发展也成为各国首先重视的课题。为克服传统农业生产力水平较低，集约化农业造成的环境污染、生态失衡等弊病，世界各国陆续开始了生态农业的研究和探索，以保护现有的生态环境，修复以前被破坏的生态环境，为人类提供健康的农产品。
[0003]化肥是农业生产过程中作物增产的重要贡献因子，但随着化肥的持续多年施用，特别是过量施肥，土壤中养分配比不合理，同时土壤有机质得不到及时补充，导致了严重的土壤问题，其中土壤微生物菌群种类与数量的减少是一个不可忽视的问题。微生物菌肥是指含有特定微生物活体且能应用于农业生产的制品，其通过微生物的生命活动促使作物健康生长、抗逆性增强、产量提高，在改善土壤微观环境、提高化肥利用率等方面的作用日益受到人们的关注。
[0004]我国是一个烟草大国，烟草作为我国重要的经济作物之一，其种植面积和总产量位居世界第一位。自20世纪50年代末期，我国烟草品质有所下降，主要表现是烟叶薄、油润差、香气不足、劲头小等。链霉菌隶属于原核生物界、放线菌目（Actinobacterales ）链霉菌科（Streptomycetaceae），是具有非常复杂生命周期的革兰氏阳性菌。链霉菌以菌丝体的形式定殖于多种植物体的根、茎、叶等部位而发挥功能。链霉菌属也是一类重要的生防菌，其次级代谢产物不仅能产生各种抗生素，而且能产生植物激素类物质。相关研究表明链霉菌可抑制烟草上的多种病原菌，如炭疽病原菌、赤星病菌、花叶病毒等，其次生代谢产物也对烟草的生长具有一定的促进作用。烟草种子萌发和幼苗生长是烟草优质高产栽培的基础，提高种子萌发率，增强幼苗生长能力对提高烟叶质量意义重大。

技术实现思路

[0005]育苗是烟草生产中的关键环节之一，培育壮苗是生产优质烟叶的基础。但在育苗的过程中往往存在着种子萌发缓慢、萌发后烟苗长势不整齐，烟苗素质相对较弱，移栽大田之后缓苗期长等问题。针对上述问题，本专利技术的目的一在于玫瑰黄链霉菌（Streptomyces roseoflavus ）LN33在促进烟草生长发育方面的应用，目的二在于提供一种烟草育苗促进剂，目的三在于提供一种烟草育苗基质的拌菌方法，目的四在于提供一种促进烟草生长发育的方法。本专利技术通过在烟草育苗基质中拌入LN33菌株发酵液，使烟草种子快速萌发、烟苗长势一致、提高了烟苗的农艺性状和育苗效率，同时，LN33菌株发酵液能显著促进MS培养基培养下烟苗的生长发育，进一步说明LN33菌株对烟苗的促生作用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用的具体方案如下：本专利技术的第一方面是请求保护玫瑰黄链霉菌LN33在促进烟草生长发育方面的应
用。
[0007]本专利技术的第二方面是请求保护一种烟草育苗促生剂，所述烟草育苗促生剂包含所述玫瑰黄链霉菌LN33。
[0008]本专利技术的第三方面是请求保护一种烟草育苗基质的拌菌方法，包括以下步骤：步骤一、拌菌：制备玫瑰黄链霉菌LN33的发酵液；在装盘播种前3至7天前，将所述发酵液拌入烟草育苗基质中，拌菌量为所述烟草育苗基质重量的5
‰
～6
‰
，拌菌后基质整体含水量保持在30%；步骤二、堆置发酵：在堆置场地事先铺设防渗膜，将经步骤一混拌均匀的基质堆制在防渗膜上，基质堆制高度在1.2～1.5 m、宽度在2～3 m、长度在3～4 m；其中，长型堆在上方每隔20～30 cm用木棒扎孔，锥形堆在堆高三分之二处斜向内扎孔。
[0009]优选地，步骤一所述发酵液的制备方法为：首先将玫瑰黄链霉菌LN33菌株进行活化，然后接种于大豆酵母液体培养基中，然后在温度28℃、转速170 rmp条件下震荡培养8～9 d。作为更进一步地优选，将玫瑰黄链霉菌LN33划线接种于高氏1号培养基中，28℃下培养5~7天，进行活化；用打孔器在已经活化号的培养基上打取菌饼接种于大豆酵母液体培养基中，接种量为：每150mL 大豆酵母液体培养基接种5~7块菌饼。
[0010]本专利技术的第四方面是请求保护一种促进烟草生长发育的方法，所述方法采用以下任意一种方式进行：方式一：将烟草种子经灭菌后接种于MS培养基中进行萌发培养；将烟草黄链霉菌LN33发酵液稀释成10
6 cfu/mL的菌体悬浮液，以每株烟草苗吸取500 μL菌体悬浮液进行烟苗根部接种，然后继续培养；方式二：采用上述拌菌方法对烟草育苗基质进行拌菌处理，获得拌菌基质；将所述拌菌基质置于穴盘中，每穴点播1~2粒烟草种子，进行培养。
[0011]有益效果：本专利技术提供一种促生烟草玫瑰黄链霉菌（Streptomyces roseoflavus）LN33菌株及发酵液，用于促进烟苗生长的应用。将菌株发酵液拌入烟草漂浮育苗基质中，能明显提高烟草种子萌发速度，促进烟草幼苗根的发育，增强烟苗的叶宽、叶长、株高、使烟苗长势一致，同时，LN33菌株发酵液能显著促进MS培养基培养下烟苗的生长发育，进一步说明LN33菌株对烟苗的促生作用，实际应用中有助于提高烟草的农艺性状，减少化学肥料使用。
附图说明
[0012]图1为LN33菌株在高氏1号培养基上的菌落形态正面观；图2为LN33菌株在高氏1号培养基上的菌落形态背面观；图3为LN33菌株的系统发育树；图4为LN33发酵液对MS培养基培养下烟苗生长28天的促生效果（a为不加菌液的对照组，b为加菌液处理组）；图5为LN33发酵液拌入基质对烟苗生长35天的促生效果（c为不加菌液的对照组，b为基质拌菌处理组）。
具体实施方式
[0013]本专利技术提供了一种促进烟苗生长发育的玫瑰黄链霉菌LN33菌株及其应用方法，主
‑3，
； PCR反应体系（50
ꢀµ
l ）为：模板DNA 1.0
ꢀµ
l ，10
×
Taq Buffer（NH
4+
）5.0
ꢀµ
l ，dNTP Mix （10.0 mmol/L）1.0
ꢀµ
l，Taq DNA Polymerase（5 U/
µ
l）0.25
ꢀµ
l，MgCl2（25.0 mmol/L）3.0
ꢀµ
l，上下游引物（10.0
ꢀµ
lmol/L）各1.0
ꢀµ
l，加dd H2O补至50
ꢀµ
l；PCR反应条件：94℃预变性2 min；94℃变性1 min，55℃退火30 s，72℃延伸2 min，30个循环，最后72℃延伸10 min，4℃保存。凝胶电泳检测到条带后，将其所对应的原始扩增产物（未纯化，45
ꢀµ
l）由生工生物工程（上海）股份有限公司测序（序列如SEQ ID NO：01所示）。所得序列在GenBank数据本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.玫瑰黄链霉菌LN33在促进烟草生长发育方面的应用。2.一种烟草育苗促生剂，其特征在于：所述烟草育苗促生剂包含玫瑰黄链霉菌LN33。3.一种烟草育苗基质的拌菌方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、拌菌：制备玫瑰黄链霉菌LN33的发酵液；在装盘播种前3至7天前，将所述发酵液拌入烟草育苗基质中，拌菌量为所述烟草育苗基质重量的5
‰
～6
‰
，拌菌后基质整体含水量保持在30%；步骤二、堆置发酵：在堆置场地事先铺设防渗膜，将经步骤一混拌均匀的基质堆制在防渗膜上，基质堆制高度在1.2～1.5 m、宽度在2～3 m、长度在3～4 m；其中，长型堆在上方每隔20～30 cm用木棒扎孔，锥形堆在堆高三分之二处斜向内扎孔。4.根据权利要求3所述的拌菌方法，其特征在于：步骤一所述发酵液的制备方法为：首先将玫瑰黄链霉菌LN33菌株进行活化...

【专利技术属性】
技术研发人员：张梦宇，韩瑞华，李涵，牛文研，李昊睿，谷玉锌，康业斌，
申请(专利权)人：河南科技大学，
类型：发明
国别省市：