间充质干细胞液氮冻存保护液及其制备方法和使用方法技术

本发明专利技术涉及干细胞生物制品冻存工艺保护剂，具体涉及间充质干细胞液氮冻存保护液及其制备方法和使用方法。一种间充质干细胞液氮冻存保护液，按体积百分比计，所述冻存保护液的制备原料包括人血白蛋白10%~50%、二甲基亚砜2%~5%、右旋糖酐注射液20%~90%；所述冻存保护液冻存后的间充质干细胞经21

【技术实现步骤摘要】
间充质干细胞液氮冻存保护液及其制备方法和使用方法


[0001]本专利技术涉及干细胞生物制品冻存工艺保护剂，具体涉及间充质干细胞液氮冻存保护液及其制备方法和使用方法。

技术介绍

[0002]人间充质干细胞具有很好的免疫调节特性与损伤组织修复能力，是一类最具临床应用潜能的多能干细胞，人间充质干细胞已被作为主要细胞原料，用于重点研发干细胞1类生物制品药物。由于间充质干细胞的生物学特性，如何使间充质干细胞由医疗治疗技术转变为真正的生物药，使间充质干细胞具备长期货架储存和使用便捷的药品属性，是间充质干细胞生物制品工艺开发的重点和难点。
[0003]目前，间充质干细胞药物工艺中虽具备冻存技术与冻存保护液产品，但临床使用时，需对细胞产品复苏后，在洁净条件下进行再次清洗、离心、重悬制剂，后才能临床进行静脉输注使用。由于目前间充质干细胞药物工艺要求在临床使用端前设洁净控制操作，不仅增大了间充质干细胞药物被污染的可能性，还增大了批次制剂质量偏差风险控制成本与难度，且在临床使用前的有效期限短，保存条件苛刻。
[0004]因此，本申请亟需研发一种间充质干细胞液氮冻存保护液，复苏后无需清洗去除冻存液成分。

技术实现思路

[0005]为了无需清洗去除冻存液成分，本申请提供一种间充质干细胞液氮冻存保护液及其制备方法和使用方法。
[0006]第一方面，本申请提供一种间充质干细胞液氮冻存保护液，采用如下技术方案实现：一种间充质干细胞液氮冻存保护液，按体积百分比计，所述冻存保护液的制备原料包括人血白蛋白10％～50％、二甲基亚砜2％～5％、右旋糖酐注射液20％～90％；所述冻存保护液冻存后的间充质干细胞经21
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42℃复苏后的细胞活率不低于85％。
[0007]通过采用上述技术方案，本申请提供的间充质干细胞液氮冻存保护液的成分简单，各组分都为药物成分或药规级产品，能用于冻存骨髓、脂肪、脐带等多种组织来源人脐带间充质干细胞，且在
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135℃超低温液氮条件下长期保存，经复苏后细胞活率不低于85％，关键功能分子mRNA及蛋白水平都符合质量标准。同时，本申请提供的间充质干细胞液氮冻存保护液作为制剂溶媒，间充质干细胞液氮冻存保护液与0.9wt％生理盐水注射液稀释配伍后，满足注射液渗透压控制标准，可满足临床静脉注射使用要求，无需进行离心洗涤，对细胞的损伤小，且无再次清洗操作时引入的污染风险，提高了间充质干细胞生物制品批次间的质量稳定性和间充质干细胞生物制品的活性。
[0008]本申请中，所述人血白蛋白是指人血白蛋白的含量为20g/100mL的人血白蛋白静脉输注溶液，人血白蛋白静脉输注溶液的成份包括：人血白蛋白20g/100mL、N
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乙酰色氨酸钠16mmol/L、锌酸钠16mmol/L、氯化钠140mmol/L以及注射用水。
[0009]本申请中，所述右旋糖酐注射液为右旋糖酐40氯化钠注射液、右旋糖酐40葡萄糖注射液、右旋糖酐70氯化钠注射液、右旋糖酐70葡萄糖注射液中的一种或多种；优选的，所述右旋糖酐注射液为右旋糖酐40氯化钠注射液。
[0010]本申请中，所述右旋糖酐40氯化钠注射液中右旋糖酐40的含量为6g/100mL或10g/100mL；优选的，所述右旋糖酐40氯化钠注射液中右旋糖酐40的含量为10g/100mL。
[0011]本申请中，所述二甲基亚砜的体积百分比控制在2
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5％，浓度较低，远低于临床安全警戒线。
[0012]优选的，按体积百分比计，所述冻存保护液的制备原料由人血白蛋白10％～50％、二甲基亚砜2.5％～5％、右旋糖酐注射液45％～87.5％组成。
[0013]优选的，按体积百分比计，所述冻存保护液的制备原料还包括醋酸钠林格注射液5％～48％。
[0014]本申请中，所述醋酸钠林格注射液的成份包括：氯化钠3g/500mL、醋酸钠(三水合物)1.9g/500mL、氯化钾0.15g/500mL、氯化钙(二水合物)0.1g/500mL，辅料为稀盐酸、注射用水。
[0015]醋酸钠林格注射液的加入可以调节冻存保护液的pH，使冻存保护液的pH值在中性值阈值，有利于提高间充质干细胞生物制品批次间的质量稳定性和间充质干细胞生物制品的活性。
[0016]醋酸钠林格注射液的加入可以减少二甲基亚砜的加入量，使二甲基亚砜的体积百分比不高于2.5％，减少了细胞损伤程度，降低了对细胞潜在的毒性作用。且间充质干细胞液氮冻存保护液与0.9wt％生理盐水注射液稀释配伍后，渗透压接近或在280
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330mOsmol/kg标准范围内，可直接进行静脉输注使用，操作方便，无需清洗去除成分。
[0017]优选的，按体积百分比计，所述冻存保护液的制备原料还包括氨基酸注射液1％～2％。
[0018]氨基酸注射液的加入不仅给间充质干细胞提供营养，且氨基酸注射液与醋酸钠林格注射液共同作用，更好的调节间充质干细胞代谢的酸碱失衡，保持细胞活力，提高了细胞的保存时间；同时，氨基酸注射液和人血白蛋白共同作用，提高了冻存保护液中右旋糖酐的稳定性，有利于降低间充质干细胞在液氮冻存时的损伤，从而提高了间充质干细胞复苏后的存活率。
[0019]优选的，按体积百分比计，所述冻存保护液的制备原料还包括0.1wt％羧甲基壳聚糖水溶液0.2％～0.5％。
[0020]羧甲基壳聚糖水溶液的加入，不仅可以提高冻存保护液的抑菌作用，羧甲基壳聚糖水溶液和氨基酸注射液共同作用，还能提高冻存保护液中右旋糖酐的稳定性，有利于降低间充质干细胞在液氮冻存时的损伤，从而提高了间充质干细胞复苏后的存活率。但本申请人在研究过程中发现，羧甲基壳聚糖水溶液的体积百分比不能太高，否则会影响冻存保护液的渗透压，且羧甲基壳聚糖水溶液的质量分数也不宜过高。
[0021]优选的，按体积百分比计，所述冻存保护液的制备原料还包括0.5wt％谷氨酰胺水溶液0.5％～1％。
[0022]谷氨酰胺水溶液的加入，不仅给间充质干细胞提供营养，谷氨酰胺水溶液、氨基酸注射液和羧甲基壳聚糖水溶液共同作用，还能提高冻存保护液中右旋糖酐的稳定性，有利
于降低间充质干细胞在液氮冻存时的损伤，从而提高了间充质干细胞复苏后的存活率。
[0023]优选的，所述间充质干细胞的细胞浓度为1
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104cells/mL～3
×
107cells/mL；所述间充质干细胞为人脐带间充质干细胞、人脐带血间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人骨髓间充质干细胞、人牙髓间充质干细胞、人胎盘间充质干细胞、人宫血间充质干细胞中的一种或多种。
[0024]本申请间充质干细胞液氮冻存保护液适用性广，人脐带间充质干细胞、人脐带血间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人骨髓间充质干细胞、人牙髓间充质干细胞、人胎盘间充质干细胞、人宫血间充质干细胞在
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135℃下冻存后再经21
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42℃温度自然解冻或水浴复苏时长本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞液氮冻存保护液，其特征在于，按体积百分比计，所述冻存保护液的制备原料包括人血白蛋白10%~50%、二甲基亚砜2%~5%、右旋糖酐注射液20%~90%；所述冻存保护液冻存后的间充质干细胞经21
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42℃复苏后的细胞活率不低于85%。2.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞液氮冻存保护液，其特征在于，按体积百分比计，所述冻存保护液的制备原料由人血白蛋白10%~50%、二甲基亚砜2.5%~5%、右旋糖酐注射液45%~87.5%组成。3.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞液氮冻存保护液，其特征在于，按体积百分比计，所述冻存保护液的制备原料还包括醋酸钠林格注射液5%~48%。4.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞液氮冻存保护液，其特征在于，按体积百分比计，所述冻存保护液的制备原料还包括氨基酸注射液1%~2%。5.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞液氮冻存保护液，其特征在于，按体积百分比计，所述冻存保护液的制备原料还包括0.1wt%羧甲基壳聚糖水溶液0.2%~0.5%。6.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞液氮冻存保护液，其特征在于，按体积百分比计，所述冻存保护液的制备原料还包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈晓栋，尚倩雯，贾善粉，张岩，蔡冰婧，
申请(专利权)人：无锡华泰创新药技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：