一种醛缩酶基因ltp及其在构建高产4-HBC基因工程菌中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种高产4

【技术实现步骤摘要】
engineering the production of 23,24
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bisnorcholenicsteroids in sterol metabolism,Scientific Repots,2016,6:21928)。专利CN 112029701报道了出发菌中的3
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甾酮
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Δ1‑
脱氢酶基因和17
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羟基
‑3‑
氧代
‑4‑
孕烯
‑
20
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羧基
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CoA醛缩酶基因的表达量降低、失活或敲除，同时过表达编码乙酰辅酶A乙酰转移酶/硫解酶和DNA结合蛋白的基因，提高了原始菌株的产量，但在添加20g/L植物甾醇的反应中，其摩尔收率仅为53％(144h)。Li等通过敲除分枝杆菌HGMS2菌株的kstd和ksh基因，构建高产AD的菌株。发现敲除其内源性kstd和ksh基因后，其敲除突变体HGMS2
Δkstd211+ΔkshB122
的植物甾醇转化能力增加了20％，10g/L植物甾醇的反应中，其摩尔收率为5本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种醛缩酶基因ltp，由ltp3和ltp4组成，其特征在于：所述ltp3基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述ltp4基因核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。2.权利要求1所述醛缩酶基因ltp在构建高产4
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HBC基因工程菌中的应用。3.一种高产4
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HBC的分枝杆菌基因工程菌，由如下方法构建获得：(1)以分枝杆菌为底盘菌，依次敲除kshA1、kshA2、kstD1、kstD2、kstD3基因，得到产AD的工程菌Mn
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AD；(2)以工程菌Mn
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AD为底盘菌，进一步敲除hsd4A基因，得到产4
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HBC的工程菌Mn
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HBC；(3)以工程菌Mn
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HBC为底盘菌，过表达ltp3、ltp4基因，得到所述高产4
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HBC的分枝杆菌基因工程菌；所述ltp3基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述ltp4基因核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。4.构建权利要求3所述基因工程菌的方法，所述方法包括：(1)以底盘菌分枝杆菌基因组为模板，分别扩增kshA1、kshA2、kstD1、kstD2、kstD3、hsd4A基因的上、下游片段，与pacI和NotI酶切线性化的pNS质粒相连接，构建得到敲除质粒pNS
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kshA1H、pNS
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kshA2H、pNS
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kstD1H、pNS
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kstD2H、pNS
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kstD3H和pNS
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hsd4AH；以底盘菌分枝杆菌基因组为模板，扩增
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ltp3
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ltp4基因，将扩增出的片段与BamHI和HindIII酶切线性化的pMV261质粒相连接，构建得到pMV261
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ltp3
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ltp4过表达质粒；所述ltp3基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳志强，王鑫鑫，柯霞，郑裕国，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：