提高淀粉酶热稳定性的方法技术

本发明专利技术涉及酶工程技术领域，尤其涉及一种提高淀粉酶热稳定性的方法。本发明专利技术通过对KY368733.1基因进行定点突变后，得到重组质粒，所述定点突变为将蛋白质序列ATY36098.1第380位的A定点突变为G，将KY368733.1基因组序列中第1405位的C变为G，第1406位的T变为C，并转化大肠杆菌表达得到的α

【技术实现步骤摘要】
提高淀粉酶热稳定性的方法


[0001]本专利技术涉及酶工程
，尤其涉及一种提高淀粉酶热稳定性的方法。

技术介绍

[0002]淀粉是α
‑
D
‑
葡萄糖苷通过α
‑
1,4糖苷键和α
‑
1,6糖苷键连接而成的高分子量聚合物，是除纤维素之外的数量分布最广的多糖之一。淀粉作为一种基本原材料，广泛应用于食品工业、医药、造纸、纺织、饲料等领域，并且淀粉是发酵、制糖等工业中最重要的原料之一。α
‑
淀粉酶是一类作用于淀粉分子，从其分子内部随机切断α
‑
1,4糖苷键，生成葡萄糖、还原糖、极限糊精和含四个以上葡萄糖残基的低聚糖的水解酶。α
‑
淀粉酶常被应用于淀粉液化工艺，将淀粉水解成低分子量的糊精，以制造各种糖浆，是最重要的工业酶制剂之一，占全球工业用酶份额的30％。
[0003]现有的生产中使用的α
‑
淀粉酶的最适温度为50
‑
75℃，虽然某些热稳定性好的α
‑
淀粉酶在较高温度下保持活性，但在100℃时酶活力较弱，甚至失活。
[0004]因此，如何提高α
‑
淀粉酶热稳定性成为亟需解决的技术问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是：如何提高α
‑
淀粉酶热稳定性。
[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：
[0007]一种提高淀粉酶热稳定性的方法，包括以下步骤：对KY368733.1基因进行定点突变后，得到重组质粒，并转化大肠杆菌表达得到的α
‑
淀粉酶；得到的α
‑
淀粉酶C端连接短肽得到的改造的α
‑
淀粉酶。
[0008]进一步，上述提高淀粉酶热稳定性的方法中，所述定点突变为将蛋白质序列ATY36098.1第380位的A定点突变为G。
[0009]进一步，上述提高淀粉酶热稳定性的方法中，所述定点突变为将KY368733.1基因组序列中第1405位的C变为G，第1406位的T变为C。
[0010]进一步，上述提高淀粉酶热稳定性的方法中，所述连接的短肽为IGCIILTTT。
[0011]进一步，上述提高淀粉酶热稳定性的方法中，所述重组质粒的载体选自pET
‑
28a(+)。
[0012]本专利技术的有益效果在于：本专利技术通过对KY368733.1基因进行定点突变后，得到重组质粒，并转化大肠杆菌表达得到的α
‑
淀粉酶C端连接短肽得到的改造α
‑
淀粉酶，能够大幅提高其在100℃下的半衰期，即提高α
‑
淀粉酶热稳定性。
具体实施方式
[0013]为详细说明本专利技术的
技术实现思路
、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。
[0014]本专利技术选取小麦品种Chara6D染色体α
‑
淀粉酶基因，进行定点突变改造。
[0015]从NCBI中获取基因组序列KY368733.1，如下：
[0016]ATGGCGAACAAACACCCGTCCCTCTCCCTCTTCCTCCTCCTCCTCGGCCTCTCGTCCAGCTTGGCCTCCGGTCAAGTCCTGTTTCAGGTAAGCATAAGATATTGTCCGCCGGCAAGCGCCGTCTCCGGCTCGTCGGTTTTGGACTGAGTTTTGAGTTGTGCGTGCGGCAGGGTTTCAACTGGGAGTCGTGGAAGCACAATGGCGGATGGTACAACTTCCTGATGGGCAAGGTGGACGACATCGCCGCGGCCGGCGTCACGCACGTCTGGCTGCCCCCGGCGTCGCAGTCCGTCTCCAAGCAAGGGTACATGCCTGGCCGGCTCTACGACCTGGACGCCTCCAAGTACGGCAACAAGGCGCAGCTCAAGTCCCTCATCGGGGCGCTCCACGGCAAGGGCGTCAAGGCCATCGCCGACATCGTCATCAACCACCGCACGGCGGAGCGCAAGGACGGCCGGGGCATCTACTGCATCTTCGAGGGCGGCACCCCCGACGCGCGCCTCGACTGGGGCCCCCACATGATCTGCCGCGACGACCGGCCCTACGCCGACGGCACCGGCAACCCGGACACCGGCGCCGACTTCGGGGCCGCGCCGGACATCGACCATCTCAACCCGCGCGTGCAGAAGGAGCTCGTCGAGTGGCTCAACTGGCTCAGGACCGACGTCGGCTTCGACGGCTGGCGCTTCGACTTCGCCAAGGGCTACTCCGCCGACGTGGCCAAGATCTACATCGACCGCTCCGAGGCCAGCTTCGCCGTGGCCGAGATATGGACGTCGCTCGCGTACGGCGGGGATGGGAAGCCCAACCTCAACCAGGACCCGCACCGGCAGGAGCTGGTGAACTGGGTGAACAAGGTGGGCGGCTCCGGCACGGGCACCACGTTCGACTTCACCACCAAGGGCATCCTCAACGTCGCCGTGGAGGGCGAGCTGTGGCGGCTGCGCGGCACCGACGGCAAGGCGCCGGGCATGATCGGGTGGTGGCCAGCCAAGGCGGTGACCTTCGTCGACAACCATGACACCGGCTCCATGCAGCATATGTGGCCCTTCCCTTCCGACAGTGTCATGCAGGGATACGCGTACATCCTCACGCACCCAGGGACCCCGTGCATCGTGAGTCATCCTACCAGTTCATCGTATCTAAATTGGTCTTCTTCTTTTTTCGTTCATAACAAGAAACCATGCATGACCGAACTGATGAAAAATAATTGTGACTCTTCAGGGTTCTACGATCATTTCTTCGACTGGGGCATGAAGGACGAGATCTATCGCCTAGTGTCAATCAGGACCCGGCAGGGGATACACAGTGAGAGCAAGCTACAAATCATGGAGGCTGACGCCGACCTTTACCTTGCCGAGATCGACGGCAAGATCATCGTCAAGCTCGGGCCACGATTCGATGTGGGGCACCTCATTCCCGGAGGCTTCAAGGTGGCCGCACACGGCAAAGACTATGCCGTATGGGAGAAAATATAA
[0017]合成以上基因组序列，针对以上基因组序列设计相应的PCR引物，如下：
[0018]上游引物P1：5
’
CATGCCATGG
‑
TTCGACTTCACCACCAAGGG
‑3’
[0019]下游引物P2：5
’本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.提高淀粉酶热稳定性的方法，其特征在于，包括以下步骤：对KY368733.1基因进行定点突变后，得到重组质粒，并转化大肠杆菌表达得到的α
‑
淀粉酶；得到的α
‑
淀粉酶C端连接短肽得到的改造的α
‑
淀粉酶。2.根据权利要求1所述的提高淀粉酶热稳定性的方法，其特征在于，所述定点突变为将蛋白质序列ATY36098.1第380位的A定点突...

【专利技术属性】
技术研发人员：林金新，黄平，
申请(专利权)人：福州三合元生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：