一种模块化组装双组分纳米颗粒制备方法及其应用技术

本发明专利技术属于分子生物学及生物医学技术领域，涉及嵌合猪圆环病毒样颗粒的制备，以及双组分纳米颗粒在疫苗领域的应用。本发明专利技术公开了基于PCV2VLP的二联疫苗的制备方法：将SpyCatcher基因融合到PCV2Cap蛋白的C端构建Cap

【技术实现步骤摘要】
一种模块化组装双组分纳米颗粒制备方法及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学及生物医学
，涉及嵌合猪圆环病毒样颗粒的制备，以及双组分纳米颗粒在疫苗领域的应用。

技术介绍

[0002]疫苗免疫失败是猪瘟病毒(CSFV)不断复发和流行的一个重要原因。临床上造成CSFV免疫失败的主要原因除了不合理的免疫程序、母源抗体干扰、持续性感染造成的免疫耐受，还有猪群中其它病原感染造成的免疫抑制。猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)作为免疫抑制性病原，在兽医临床具有很高的检出率。有流行病学调查显示，有15.87％的猪场中存在CSFV
‑
PRRSV共感染，有13.06％的猪场中存在CSFV
‑
PCV2共感染，甚至CSFV
‑
PRRSV
‑
PCV2三重感染的猪场也达到了9.53％，这很可能是PCV2和PRRSV相关的免疫抑制引起的。以PCV2为例，其对淋巴组织具有首选的细胞噬性，从而负调节胸腺中T细胞选择过程，导致病猪明显的淋巴耗竭和免疫抑制。这些免疫抑制本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于PCV2 VLP的二联疫苗的制备方法，其特征在于：将SpyCatcher基因融合到PCV2 Cap蛋白的C端构建Cap
‑
SC VLP，同时表达携带SpyTag的CSFV E2蛋白；基于SpyTag和SpyCatcher之间的异肽键形成，ST
‑
GFP和E2
‑
ST在体外与Cap
‑
SC VLP表面暴露的SpyCatcher结合，从而实现ST
‑
GFP和E2
‑
ST全长蛋白在PCV2 VLP的表面展示；所述目的基因Cap
‑
SC、E2
‑
ST的编码序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。2.根据权利要求1所述的基于PCV2 VLP的二联疫苗的制备方法，其特征在于：目的基因Cap
‑
SC的抗原，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；目的基因E2
‑
ST的抗原，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。3.猪瘟病毒自组装蛋白纳米颗粒的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)pET28a
‑
Cap
‑
SC原核表达载体构建和蛋白表达；(2)HTA
‑
E2
‑
ST的构建和蛋白表达；(3)纯化的E2
‑
ST在体外与Cap
‑
SC VLPs偶联以构建双组分Cap
‑
GFP纳米颗粒。4.根据权利要求3所述的猪瘟病毒自组装蛋白纳米颗粒的制备方法，其特征在于：(1)pET28a
‑
Cap
‑
SC原核表达载体构建和蛋白表达：Cap
‑
SpyCatcher构建包括N端6
×
His标签、PCV2 Cap、柔性linker和截短的SpyCatcher，针对大肠杆菌密码子偏好性进行优化后，采用基因合成的方式合成；然后通过体外同源重组的方法将编码Cap
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘泽辉，何放，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：