猪瘟病毒重组蛋白及其应用制造技术

本公开提供了经典猪瘟病毒(CSFV)的重组E2蛋白，所述重组E2蛋白包括如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少85％序列一致性的氨基酸序列。本公开的重组E2蛋白可以包括第48、63、77、81、86、95、103和129位氨基酸中的一个或多个位点处的点突变。本公开还提供了编码所述重组E2蛋白的核酸分子，含所述核酸分子的宿主细胞，含所述重组E2蛋白的免疫原性组合物，及其应用。及其应用。

【技术实现步骤摘要】
猪瘟病毒重组蛋白及其应用


[0001]本专利技术属于兽医疫苗领域，具体涉及针对猪瘟病毒的具有免疫原性的E2重组蛋白及其用途。

技术介绍

[0002]猪瘟(Classical swine fever，CSF)是由经典猪瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)引起的一种烈性传染病，被世界动物卫生组织(OIE)列为必须申报的动物疫病名录。中国是养猪大国，CSF一直是严重威胁养猪产业的重要传染病。
[0003]CSFV是有囊膜的单股正链RNA病毒，基因组全长约12.3kb，编码一个由3,898个氨基酸残基组成的多聚蛋白。该多聚蛋白在翻译过程中和翻译后，在病毒编码的蛋白酶和宿主细胞蛋白酶的作用下，加工水解成4种结构蛋白(C、E
rns
、E1和E2)和8种非结构蛋白(N
pro
、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)。E1、E2和E
rns
是重要的毒力因子和主要的保护性抗原。E2是CSFV的囊膜蛋白，是病毒最重要的结构糖蛋白，可诱导较强的中和抗体来抵抗致死CSFV强毒株的攻击，是猪瘟基因工程疫苗研发的重要靶蛋白。
[0004]实施预防性疫苗接种与扑杀策略的组合是控制猪瘟暴发的主要手段，提供一种对目前广泛流行的猪瘟病毒能产生良好的免疫保护效果的疫苗具有重要意义。尽管目前已有大肠杆菌和杆状病毒等表达的猪瘟E2抗原亚单位疫苗，但具有完善的翻译后修饰功能的哺乳动物细胞仍然是大多数生物药蛋白表达宿主的首选。/>
技术实现思路

[0005]为了解决现有技术中存在的上述技术问题之一，本专利技术提供了一种经典猪瘟病毒的重组E2蛋白，其通过缺失跨膜结构域以及特定位点处的突变，能够有效提高蛋白表达量，且不会影响E2蛋白的免疫原性。
[0006]根据一个方面，提供了一种经典猪瘟病毒的重组E2蛋白，其相对于野生型E2蛋白缺失了N端和/或C端的跨膜结构域。在一些实施方式中，野生型E2蛋白包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
[0007]在一些实施方式中，所述重组E2蛋白包括如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％或100％序列一致性的氨基酸序列。
[0008]在一些实施方式中，基于如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，所述重组E2蛋白在第48、63、77、81、86、95、103和129位氨基酸中的一个或多个位点处具有突变。
[0009]在一些具体的实施方式中，所述重组E2蛋白的第48位半胱氨酸(C48)可以突变为丝氨酸(S)、丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、苏氨酸(T)和脯氨酸(P)中的任意一种。
[0010]在一些具体的实施方式中，所述重组E2蛋白的第63位精氨酸(R63)可以突变为丙氨酸(A)、谷氨酰胺(Q)和谷氨酸(E)中的任意一种。
[0011]在一些具体的实施方式中，所述重组E2蛋白的第77位丝氨酸(S77)可以突变为丙
氨酸(A)、苏氨酸(T)和甘氨酸(G)中的任意一种。
[0012]在一些具体的实施方式中，所述重组E2蛋白的第81位谷氨酸(E81)可以突变为精氨酸(R)或赖氨酸(K)。
[0013]在一些具体的实施方式中，所述重组E2蛋白的第86位甘氨酸(G86)可以突变为丙氨酸(A)、精氨酸(R)和谷氨酰胺(Q)中的任意一种。
[0014]在一些具体的实施方式中，所述重组E2蛋白的第95位甘氨酸(G95)可以突变为丙氨酸(A)、精氨酸(R)和谷氨酰胺(Q)中的任意一种。
[0015]在一些具体的实施方式中，所述重组E2蛋白的第103位半胱氨酸(C103)可以突变为丝氨酸(S)、丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、苏氨酸(T)和脯氨酸(P)中的任意一种。
[0016]在一些具体的实施方式中，所述重组E2蛋白的第129位半胱氨酸(C129)可以突变为丝氨酸(S)、丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、苏氨酸(T)和脯氨酸(P)中的任意一种。
[0017]在一些实施方式中，所述重组E蛋白可以包括：C48S、C48A、C48G、C48T和C48P中的任意一种；R63A、R63Q和R63E中的任意一种；S77A、S77T和S77G中的任意一种；E81R或E81K；G86A、G86R和G86Q中的任意一种；G95A、G95R和G95Q中的任意一种；C103S、C103A、C103G、C103T和C103P中的任意一种；和/或，C129S、C129A、C129G、C129T和C129P中的任意一种。在一些实施方式中，所述重组E蛋白可以包括上述突变的任意组合。
[0018]在一些实施方式中，所述重组E2蛋白可以包括以下突变中的一种或多种：C48P、R63E、S77A、G86A、G95R、G95Q、C103S、C103A、R63A/S77A、R63E/S77A、R63Q/S77T、R63E/S77T、E81K/G86R和E81K/G86Q。
[0019]在一些实施方式中，所述重组E2蛋白可以具有如SEQ ID NO:5～48中任一项所示的氨基酸序列，或与其具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％或100％序列一致性的氨基酸序列。
[0020]本公开所提及的突变位点的编号均是以SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列为基础。
[0021]在一些实施方式中，所述重组E2蛋白的N
‑
末端或C
‑
末端可以具有选自His、c
‑
myc、FLAG、Strep
‑
tag中的一种或多种标签。
[0022]在一些实施方式中，所述重组E2蛋白的N
‑
末端可以具有信号肽。在优选的实施方式，所述信号肽可以具有如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列。
[0023]根据另一方面，提供了一种核酸分子，其编码本公开的重组E2蛋白。
[0024]根据又一方面，提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包括编码本公开的重组E2蛋白的核酸分子。在一些实施方式中，所述宿主细胞可以选自大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞和昆虫细胞。在具体的实施方式中，所述宿主细胞可以选自哺乳动物细胞。在优选的实施方式中，所述宿主细胞可以包括，但不限于，人胚胎肾(HEK)细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞和非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)。在优选的实施方式中，所述宿主细胞可以为括CHO
‑
K1、CHO
‑
S、CHO
‑
DXB11、CHO
‑
DG44、CHOZN GS、CHOK1SV GS
‑
KO细胞。
[0025]根据又一方面，提供了一种免疫原性组合物，其包括上述重组E2蛋白以及药学上可接受的载剂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种经典猪瘟病毒(CSFV)的重组E2蛋白，其特征在于，所述重组E2蛋白包括如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少85％序列一致性的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的重组E2蛋白，其特征在于，所述重组E2蛋白包括第48、63、77、81、86、95、103和129位氨基酸中的一个或多个位点处的点突变，优选地，在所述重组E2蛋白中：第48位半胱氨酸突变为丝氨酸、丙氨酸、甘氨酸、苏氨酸和脯氨酸中的任意一种；第63位精氨酸突变为丙氨酸、谷氨酰胺和谷氨酸中的任意一种；第77位丝氨酸突变为丙氨酸、苏氨酸和甘氨酸中的任意一种；第81位谷氨酸突变为精氨酸或赖氨酸；第86位甘氨酸突变为丙氨酸、精氨酸和谷氨酰胺中的任意一种；第95位甘氨酸突变为丙氨酸、精氨酸和谷氨酰胺中的任意一种；第103位半胱氨酸突变为丝氨酸、丙氨酸、甘氨酸、苏氨酸和脯氨酸中的任意一种；和/或第129位半胱氨酸突变为丝氨酸、丙氨酸、甘氨酸、苏氨酸和脯氨酸中的任意一种。3.根据权利要求1或2所述的重组E2蛋白，其特征在于，所述重组E蛋白包括C48P、R63E、S77A、G86A、G95R、G95Q、C103S、C103A、R63A/S77A、R63E/S77A、R63Q/S77T、R63E/S77T、E81K/G86R和E81K/G86Q中的一种或多种突变...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丁力，任广彩，
申请(专利权)人：广州汉腾生物科技有限公司佛山汉腾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：