一种含双酶重组大肠杆菌固定化细胞及其固定化方法与应用技术

本发明专利技术属于生物催化技术领域，具体涉及一种含双酶重组大肠杆菌固定化细胞及其固定化方法与应用。本发明专利技术通过使用非离子表面活性剂对含双酶重组大肠杆菌细胞进行修饰，有效改善其细胞膜的通透性。同时还通过非离子型表面活性剂对载体进行改性，增加了O2在液

【技术实现步骤摘要】
一种含双酶重组大肠杆菌固定化细胞及其固定化方法与应用


[0001]本专利技术属于生物催化
，具体涉及一种含双酶重组大肠杆菌固定化细胞及其固定化方法与应用。

技术介绍

[0002]草铵膦（phosphinothricin，PPT）是一种高效、低毒的氨基酸类广谱除草剂，是一种外消旋混合物，有两种光学异构体，分别为L
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草铵膦（L
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PPT）和D
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草铵膦（D
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PPT），其中只有L构型的草铵膦才有除草活性。传统的制备手性纯L
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草铵膦的方法主要两种：化学法和生物法。其中化学法包括化学拆分法和化学合成法。化学拆分法是通过手性拆分试剂拆分外化学法合成的外消旋D,L
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草铵膦（D,L
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PPT）或其衍生物，从而制得光学纯的L
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草铵膦。然而该工艺需要使用手性拆分试剂、D
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草铵膦需要消旋再利用，且需要多次拆分，难以实现大规模工业化生产。化学合成法以天然手性氨基酸或者不对称法合成L
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种含双酶重组大肠杆菌固定化细胞，其特征在于，包括含双酶重组大肠杆菌细胞以及用于固定含双酶重组大肠杆菌细胞的载体；所述含双酶重组大肠杆菌细胞内部包含有氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的D
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氨基酸氧化酶基因以及氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示所示的过氧化氢酶基因；所述含双酶重组大肠杆菌细胞以及载体均通过表面活性剂修饰改性。2.根据权利要求1所述的一种含双酶重组大肠杆菌固定化细胞，其特征在于，所述表面活性剂为非离子表面活性剂，所述非离子表面活性剂为普朗尼克F127、吐温80、月桂醇聚氧乙烯醚中的任意一种。3.根据权利要求1所述的一种含双酶重组大肠杆菌固定化细胞，其特征在于，所述载体为活性炭、硅藻土、皂土、蒙脱土K
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10中的一种或多种的组合。4.一种如权利要求1~3中任意一项所述的含双酶重组大肠杆菌固定化细胞的固定化方法，其特征在于，包括以下步骤：将D
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氨基酸氧化酶基因和过氧化氢酶基因共同导入宿主大肠杆菌，获得含有双酶基因的重组大肠杆菌，然后将重组大肠杆菌进行发酵培养获得含双酶重组大肠杆菌细胞；取含双酶重组大肠杆菌细胞加水溶解制成菌悬液，然后向菌悬液中加入非离子表面活性剂从而对含双酶重组大肠杆菌细胞进行修饰；再向修饰后的菌悬液中加入载体并搅拌均匀，使得非离子表面活性剂对载体进行改性，并通过载体对含双酶重组大肠杆菌细胞进行吸附；向修饰、改性和吸附后的体系中加入交联剂进行搅拌，反应完全...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐建妙，夏佳伟，薛亚平，郑裕国，程峰，邹树平，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：