一种结合深共晶多重提取鹿茸有效成分的方法技术

本发明专利技术公开了一种结合深共晶多重提取鹿茸有效成分的方法，属于药物提取技术领域。本方法依次进行鹿茸预处理、深共晶溶剂制备、深共晶提取、醇提、水提和酶解来提取鹿茸有效成分。本发明专利技术利用氯化胆碱和甘油以1：3的摩尔比制成深共晶溶剂，将该综合提取工艺进行优化，得到鹿茸中蛋白质含量为0.230~0.310 mg/kg，氨基酸含量为325~350.23 mg/kg，多糖得率为9.0~11.61%，总提物得率在20.99%。本发明专利技术无毒无污染、提取效率高、提取操作简便、对于成分提取更加绿色环保；同时优化提取工艺与检测技术使检测时间更短、检测结果更准确。检测结果更准确。检测结果更准确。

【技术实现步骤摘要】
一种结合深共晶多重提取鹿茸有效成分的方法


[0001]本专利技术属于药物提取
，具体涉及一种结合深共晶多重提取鹿茸有效成分的方法。

技术介绍

[0002]鹿茸为鹿科动物梅花鹿或马鹿的雄鹿头上未骨化的幼角，是一种传统得名贵中药材。作为最重要的动物药之一，有壮阳、益精血、强筋骨、托疮毒之功。鹿茸中含有丰富的氨基酸、有效蛋白质、磷脂等营养成分，目前，鹿茸中有效成分的联合提取研究相对较少，提取部位较单一，提取率及提取物纯度不甚理想，导致原材料浪费。
[0003]深共晶是一种新型的绿色萃取溶剂，包括氢键供体和氢键受体。具有提取效率高、低毒、降解快、对环境影响小等优点，广泛应用于生物活性化合物的提取。然而，由于它们的低蒸气压，溶解在深共晶中的目标化合物的分离通常是困难的，这阻碍了它们在工业生产中的应用。为了从深共晶中获得目标化合物，有必要研究使深共晶变性并破坏氢键以降低目标化合物在深共晶中的溶解度的适当条件。
[0004]此外，现有鹿茸中有效成分的提取，还存在提取过程繁琐、提取时间长、提取物中有效含量低、环境友好性差、检测时间长等问题，因此开发一种绿色环保、价格低廉的提取工艺迫在眉睫。

技术实现思路

[0005]解决的技术问题：针对上述技术问题，本专利技术提供了一种结合深共晶多重提取鹿茸有效成分的方法，具有绿色环保高效、成本低、鹿茸资源利用率高、检测时间短和提取率高的特点。
[0006]技术方案：一种结合深共晶多重提取鹿茸有效成分的方法，包括步骤如下：S1.带血鹿茸预处理：将带血鹿茸晾干后粉碎得到鹿茸粉末；S2.制备深共晶溶剂：以氯化胆碱为氢键受体，甘油为氢键供体，按摩尔比1：3混合后升温至75~95℃，恒温搅拌至白色固体溶解为无色粘稠液体，得到深共晶溶剂；S3.深共晶提取：称取鹿茸粉末并按固液比1g：（5~20）mL添加至深共晶溶剂中，经机械搅拌后将悬浮液离心收集上清液，取上清液备用，下层残渣水洗后烘干称重；S4.醇提：将深共晶提取后的残渣以固液比1g：25mL加入无水乙醇，密封称重后，在沸腾条件下回流反应，冷却后密封称重，离心，取上清液备用，下层残渣水洗后烘干称重；S5.水提：将醇提后的残渣按料液比1g：（20~40）mL加入去离子水，在60~100℃下浸提，称重，离心，取上清液备用，下层残渣烘干称重；S6.酶解：将水提后的残渣按固液比1g：10mL加入去离子水配置为底物，调节pH为8.0，加入胰蛋白酶，酶解后依次进行灭酶、冷却、离心操作，取上清液备用。
[0007]优选的，所述步骤S1中，粉碎过65~85目筛得鹿茸粉末。
[0008]优选的，所述步骤S2中，恒温搅拌的时间为0.5~2h。
[0009]优选的，所述步骤S3中，机械搅拌的转速为300~1500rpm，搅拌时间为2~6h。
[0010]优选的，所述步骤S3中，悬浮液离心的转速为10000rpm，离心时间为10min。
[0011]优选的，所述步骤S5中，浸提的时间为2~6h。
[0012]优选的，所述步骤S6中，酶占底物的5~7wt.%。
[0013]优选的，所述步骤S6中，通过1M的NaOH调节pH。
[0014]优选的，所述步骤S6中，酶解温度为50℃，酶解时间为11h；灭酶温度为100℃，灭酶时间为15min。
[0015]优选的，所述水洗的温度为50~60℃。
[0016]有益效果：本专利技术依次通过深共晶提取、醇提、水提、酶解提取鹿茸中的氨基酸、有效蛋白和多糖等有效成分，具有绿色环保高效、无毒无害、成本低、鹿茸资源利用率高、检测时间短和提取率高的特点。
[0017]本专利技术利用深共晶提取结合醇提、水提及酶解等方法，确定提取顺序和提取参数，能够获得较高的总提物得率20.99%，而醇提、水解及酶解三种提取方法结合的总提物得率在17.37%。
[0018]本专利技术利用氯化胆碱和甘油以1：3的摩尔比制成深共晶溶剂，将该综合提取工艺进行优化，得到鹿茸中蛋白质含量为0.230~0.310 mg/kg，氨基酸含量为325~350.23 mg/kg，多糖得率为9.0~11.61%。在无深共晶溶剂时，可以提取到鹿茸中蛋白质含量为0.08~0.2mg/kg，氨基酸含量为202.28~304.21mg/kg，多糖得率为6.24%~10.56%。
附图说明
[0019]图1是制备深共晶溶剂的不同参数对提取率的影响图，其中A是氢键供体与氢键受体摩尔比对鹿茸蛋白提取率的影响图；B是搅拌温度对鹿茸蛋白提取率的影响图；C是搅拌时间对鹿茸蛋白提取率的影响图；图2是深共晶提取的不同参数对提取率的影响图，其中A是鹿茸粉末与深共晶溶剂的固液比对鹿茸蛋白提取率的影响图；B是搅拌速率对鹿茸蛋白提取率的影响图；C是搅拌时间对鹿茸蛋白提取率的影响图；图3是水提的不同参数对提取率的影响图，其中A是鹿茸粉末与水的固液比对多糖得率的影响图；B是提取时间对鹿茸多糖得率的影响图；C是提取温度对鹿茸多糖得率的影响图；图4是醇提中鹿茸粉末与无水乙醇固液比对氨基酸总量的影响图；图5是无水乙醇与胰蛋白酶提取氨基酸总量比较示意图；图6是不同提取方法总提物得率比较示意图。
具体实施方式
[0020]下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步描述。
[0021]实施例1一种结合深共晶多重提取鹿茸有效成分的方法，包括步骤如下：S1.带血鹿茸预处理：鹿茸购于吉林省长春市长白山；将带血鹿茸切分均匀后放于室温下晾干数天，然后粉碎过80目筛得到鹿茸粉末，密封，室温下储存备用。
[0022]S2.制备深共晶溶剂：将氢键受体和氢键供体按照1：3的摩尔比置于100 mL圆底烧瓶中，氢键受体为氯化胆碱，氢键供体为甘油，缓慢升温至85℃，恒温搅拌1 h，直至瓶中白色固体逐渐溶解，变成无色粘稠液体，即得到深共晶溶剂。
[0023]S3.深共晶提取：将1.00 g鹿茸粉末添加到含有10.3 g 深共晶溶液的100 mL圆底烧瓶中，并在900 rpm下机械搅拌4 h，提取后，将悬浮液以10000 rpm离心20 min，收集上清液备用，下层残渣在50℃下烘干后称重。
[0024]提取备用的上清液10 mL，加入50 mL的去离子水，倒入100 mL烧杯中。在4℃下储存18 h，将悬浮物与沉淀物倒入离心管中，10000 rpm离心10 min，取下层蛋白质，在60℃下用50 mL水洗涤2 h，除去深共晶溶剂。
[0025]S4.醇提：将称重后的粉末残渣与无水乙醇以料液比1g：25mL的比例置于250 mL圆底烧瓶这种，密封称重后，连接冷凝回流管，加热至微沸1 h，冷却后取下，密塞称重，用水补足丢失的水分后，离心，取上清液静置备用，下层残渣在50℃下烘干后称重。
[0026]S5.水提：将醇提后的鹿茸残渣按照1g：35mL的料液比加入去离子水，在90℃下浸提4h，称重，用水补足损失的重量后，离心称取上清液备用，下层残渣在50℃下烘干后称重。
[0027]S6.酶解：将水提后的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种结合深共晶多重提取鹿茸有效成分的方法，其特征在于，包括步骤如下：S1.带血鹿茸预处理：将带血鹿茸晾干后粉碎得到鹿茸粉末；S2.制备深共晶溶剂：以氯化胆碱为氢键受体，甘油为氢键供体，按摩尔比1：3混合后升温至75~95℃，恒温搅拌至白色固体溶解为无色粘稠液体，得到深共晶溶剂；S3.深共晶提取：称取鹿茸粉末并按固液比1g：（5~20）mL添加至深共晶溶剂中，经机械搅拌后将悬浮液离心收集上清液，取上清液备用，下层残渣水洗后烘干称重；S4.醇提：将深共晶提取后的残渣以固液比1g：25 mL加入无水乙醇，密封称重后，在沸腾条件下回流反应，冷却后密封称重，离心，取上清液备用，下层残渣水洗后烘干称重；S5.水提：将醇提后的残渣按料液比1g：（20~40）mL加入去离子水，在60~100℃下浸提，称重，离心，取上清液备用，下层残渣烘干称重；S6.酶解：将水提后的残渣按固液比1g：10 mL加入去离子水配置为底物，调节pH为8.0，加入胰蛋白酶，酶解后依次进行灭酶、冷却、离心操作，取上清液备用。2.根据权利要求1所述的一种结合深共晶多重提取鹿茸有效成分的方法，其特征在于，所述步骤S1中，粉碎过65~85目筛得鹿茸粉末。3.根据权利要求1所述的一种结...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄和，岳媛媛，王松涛，安楠，刘淼，童钰琴，吴丽娜，
申请(专利权)人：南京师范大学，
类型：发明
国别省市：