一种BTK受体占有率的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种BTK受体占有率的检测方法，涉及BTK技术领域。所述方法为采用s imoa检测法。包括以下步骤：S1、捕获抗体与磁珠连接；S2、生物素化检测抗体的制备；S3、Simoa总BTK的检测方法。该BTK受体占有率的检测方法，首次将伊布替尼生物素探针运用于s imoa平台，替代生物素化检测抗体，在s imoa平台传统的双抗体夹心法原理上，运用小分子生物素作为检测探针，扩宽其适用范围，传统E l i sa反应需要6

【技术实现步骤摘要】
一种BTK受体占有率的检测方法


[0001]本专利技术涉及BTK
，具体为一种BTK受体占有率的检测方法。

技术介绍

[0002]布鲁顿酪氨酸蛋白激酶(BTK)是胞浆内非受体酪氨酸激酶TEC家族中的一员，对B细胞受体的信号的传导、B细胞的生长发育及功能调控起着重要作用，该激酶的异常表达通常导致B淋巴细胞恶性肿瘤的发生，是B细胞恶性肿瘤重要的治疗靶点之一,目前已有5种BTK抑制剂通过上市申请，其他抑制剂的研究正在进行，具有良好的开发前景，BTK激酶表达于B细胞、巨噬细胞和单核细胞等造血细胞，对B细胞生长发育、增殖分化起着重要作用，是B细胞表面抗原信号通路的关键激酶，其异常表达是慢性淋巴细胞白血病(CLL)等B细胞恶性肿瘤发生的重要原因之一,也是B细胞恶性肿瘤重要的治疗靶点。该激酶的发现为B细胞恶性肿瘤的研究和治疗打开了一个全新的大门，也为BTK抑制剂的研发提供了重要的理论基础。
[0003]在BTK抑制剂相关临床研究中，BTK受体占有率通常作为药效指标，用于评价药物对该蛋白的抑制作用，目前已开发出多种方法，其中ELISA方法的应用较本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种BTK受体占有率的检测方法，其特征在于，所述方法为采用simoa检测法。2.一种BTK受体占有率的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、捕获抗体与磁珠连接；S11、从2
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8℃冰箱中取出Bead Conjugation Buffer，并分装7ml至15ml的离心管，置于冰上；S12、从2
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8℃的存储中取出小瓶beads，并涡旋至少30秒后，置于旋转混旋仪上混匀10min；S13、取100μg BTK捕获抗体于30kDa超滤管中，加入步骤S1中的Bead Conjugation Buffer至500μL；S14、将超滤管倒置至干净的离心管中，1000xg下离心2min收集抗体；S15、用50μL Bead Conjugation Buffer清洗两边滤膜各6次；S16、将滤管倒置到同一离心管中，1000xg离心2min收集抗体，并检测抗体浓度；S17、对步骤S16的抗体进行旋涡处理，置于冰上，旋涡beads30秒；S18、轻轻打开盖子，然后将EP管放入磁力架中，用枪头吸去多余液体；S19、向步骤S18中的EP管中加入300μL Bead Wash Buffer，旋旋5秒，快速旋转，打开盖子，放入磁力架中，用枪头吸去多余液体；S191、重复步骤S19洗涤磁珠2次；S192、加入300μL预冷的Bead Conjugation Buffer，旋涡5秒，快速旋转，放入磁力架中；S193、重复步骤S192两次；S194、加入291μL Bead Conjugation Buffer，旋涡5秒，快速旋转，放置在冰上；S195、将1mL预冷Bead Conjugation Buffer加入到10mg的EDC中，涡旋5
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10秒，直到溶解；S196、加入9μL预冷EDC至步骤S203中的beads中，涡旋10s，置于旋转混旋仪上，进行混匀处理；S197、混匀结束后置离心机中快速旋转，放入磁力架中，用枪头吸去多余液体；S198、加入300μL预冷Bead Conjugation Buffer，涡旋5秒，快速旋转，放入磁力架中，用枪头吸去多余液体；S199、加入300μL步骤S15中的捕获抗体，旋涡10秒，置于旋转混旋仪上，2
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8℃混匀120min，快速旋转，放入磁力架中，用枪头吸去多余液体；S20、加入300μL Bead Wash Buffer，旋涡5秒，快速旋转，放入磁力架中，用枪头吸去多余液体，重复洗涤两次；S201、加入300μL Bead Blocking Buffer，旋涡5秒，置于旋转混旋仪上，室温混匀45min；S202、混匀结束后，快速旋转，放入磁力架中，用枪头吸去多余液体，加入300μL Bead Wash Buffer,涡旋5s；S203、快速旋转，放入磁力架中，用枪头吸去多余液体，加入300μLBead Diluent,涡旋5s,重复两次；S204、快速旋转，测定浓度后，将磁珠化捕获抗体储存在4℃冰箱，待使用；
S2、生物素化检测抗体的制备；S21、取130μg BTK检测抗体于30kDa超滤管中，加入Biotinylation Reaction Buffer至500μL；S22、将步骤S21中的超滤管倒置至干净的离心管中，1000x g下离心2min收集抗体；S23、用50μL Biotinylation Reaction Buffer清洗两边滤膜各6次；S24、将滤管倒置到同一离心管中，1000x g下离心2min收集抗体，并检测抗体浓度；S25、测量体积和抗体浓度：用Biotinylation Reaction Buffer调整浓度至1mg/mL；S26、从
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20℃冰箱中取出一瓶...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑如玲，申屠建中，
申请(专利权)人：杭州小牛医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：