掩蔽的IL-2细胞因子和其切割产物制造技术

本发明专利技术涉及掩蔽的IL

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】掩蔽的IL
‑
2细胞因子和其切割产物
[0001]相关申请交叉引用
[0002]本申请要求于2020年4月1日提交的美国临时申请序列号63/003,824和于2020年11月25日提交的美国临时申请序列号63/118,571的优先权权益；所述美国临时申请中的每一个均通过引用整体并入本文。
[0003]以ASCII文本文件形式提交的序列表
[0004]以下以ASCII文本文件形式提交的内容通过引用整体并入本文：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名：737762002740SEQLIST.TXT，记录日期：2021年3月26日，大小：650KB)。


[0005]本专利技术涉及掩蔽的IL
‑
2细胞因子和与使用并制造所述细胞因子相关的方法。本专利技术还涉及所述经掩蔽的IL
‑
2细胞因子的切割产物，以及关于其使用的方法。

技术介绍

[0006]在美国，癌症是排名第二的主要死亡原因，引起比随后的五种主要原因(慢性呼吸道疾病、中风、事故、阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease)和糖尿病)更多的死亡。尽管已经取得长足进步，尤其在靶向疗法方面，但这一领域中仍有大量工作要做。免疫疗法和这一领域的分支，免疫肿瘤学，正在产生用于治疗恶性病的可行且令人振奋的治疗选项。具体地说，现认识到癌症的一个特点是免疫逃避，且已进行大量工作以发现目标且研发出针对这些目标的疗法，以便重新激活免疫系统从而识别和治疗癌症。
[0007]细胞因子疗法是用于刺激免疫系统以诱导抗肿瘤细胞毒性的有效策略。具体地，阿地白介素(aldesleukin)，即，白介素
‑
2(IL
‑
2)的重组形式已经被FDA批准用于治疗转移性肾细胞癌和黑色素瘤。不幸的是，向患者施用的细胞因子通常具有非常短的半衰期，由此需要频繁给药。例如，以商品名Proleukin销售的阿地白介素的产品标签表明，在接受5分钟静脉内(IV)输注的患者中，示出的药物的半衰期为85分钟。另外，高剂量细胞因子的施用可以通过全身性免疫激活引起不良健康结果，如血管渗漏。这些调查结果说明需要研发有效靶向肿瘤而不引起与全身性免疫激活相关联的副作用的IL
‑
2细胞因子治疗剂。本文提供了掩蔽的IL
‑
2细胞因子、所述掩蔽的IL
‑
2细胞因子的切割产物和其组合物以及其用于解决此需求的方法。

技术实现思路

[0008]所公开的专利技术涉及被工程化为在IL
‑
2细胞因子的一个或多个受体结合位点或其功能片段处被掩蔽部分掩蔽的IL
‑
2细胞因子或其功能片段。IL
‑
2细胞因子被工程化为可通过包含蛋白水解可切割接头在靶位点处如在肿瘤微环境中被蛋白酶激活。在掩蔽的细胞因子构建体中，掩蔽部分减少或防止IL
‑
2细胞因子或其功能片段与其同源受体的结合。在可切割接头在靶位点处进行蛋白水解切割后，IL
‑
2细胞因子或其功能片段被激活，这使其能
够或更能够与其同源受体结合。
[0009]本文提供了一种掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其包括蛋白质异二聚体，所述蛋白质异二聚体包括：
[0010]a)第一多肽链，所述第一多肽链包括通过第一接头与第一半衰期延长结构域连接的掩蔽部分；以及
[0011]b)第二多肽链，所述第二多肽链包括通过第二接头与第二半衰期延长结构域连接的IL
‑
2细胞因子或其功能片段，
[0012]其中所述第一半衰期延长结构域与所述第二半衰期延长结构域缔合，并且
[0013]其中所述第一接头或所述第二接头中的一个是包括蛋白水解可切割肽的蛋白水解可切割接头。
[0014]在一些实施例中，第一半衰期延长结构域包括第一Fc结构域或其片段，并且第二Fc结构域包括Fc结构域或其片段。
[0015]在一些实施例中，第一Fc结构域包括CH3结构域或其片段，并且第二Fc结构域包括CH3结构域或其片段。
[0016]在一些实施例中，第一半衰期延长结构域和第二半衰期延长结构域各自是IgG1 Fc结构域或其片段。
[0017]在一些实施例中，第一Fc结构域和/或第二Fc结构域各自含有促进第一半衰期延长结构域和第二半衰期延长结构域的非共价缔合的一个或多个修饰。
[0018]在一些实施例中，第一半衰期延长结构域包括包含突变Y349C；T366S；L38A和Y407V的IgG1 Fc结构域或其片段以在第一半衰期延长结构域中形成
‘
臼
’
，并且第二半衰期延长结构域包括包含突变S354C和T366W的IgG1Fc结构域或其片段以在第二半衰期延长结构域中形成
‘
杵
’
，根据Kabat EU编号系统进行编号。
[0019]在一些实施例中，第一半衰期延长结构域和第二半衰期延长结构域各自是IgG1 Fc结构域或其片段，并且各自包括根据Kabat EU编号系统进行编号的氨基取代N297A。
[0020]在一些实施例中，第一半衰期延长结构域和第二半衰期延长结构域各自是IgG1 Fc结构域或其片段，并且各自包括根据Kabat EU编号系统进行编号的氨基取代I253A。
[0021]在一些实施例中，所述第一半衰期延长结构域包括SEQ ID NO:9的氨基酸序列，并且其所述第二半衰期延长结构域包括SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
[0022]在一些实施例中，所述第一半衰期延长结构域包括SEQ ID NO:10的氨基酸序列，并且其所述第二半衰期延长结构域包括SEQ ID NO:13的氨基酸序列。
[0023]在一些实施例中，与具有SEQ ID NO:2的成熟IL
‑
2的序列相比，IL
‑
2细胞因子或其功能片段被修饰。
[0024]在一些实施例中，所述经修饰的IL
‑
2细胞因子或其功能片段包括相对于具有SEQ ID NO:2的成熟IL
‑
2的序列的修饰R38A、F42A、Y45A和E62A。
[0025]在一些实施例中，所述经修饰的IL
‑
2细胞因子或其功能片段包括相对于具有SEQ ID NO:2的成熟IL
‑
2的序列的修饰C125A。
[0026]在一些实施例中，所述经修饰的IL
‑
2细胞因子或其功能片段包括相对于具有SEQ ID NO:2的成熟IL
‑
2的序列的R38A、F42A、Y45A、E62A和C125A。
[0027]在一些实施例中，IL
‑
2细胞因子或其功能片段包括SEQ ID NO:3的氨基酸序列。
[0028]在一些实施例中，掩蔽部分包括IL
‑
2Rβ或其片段、部分或变体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其包括蛋白质异二聚体，所述蛋白质异二聚体包括：a)第一多肽链，所述第一多肽链包括通过第一接头与第一半衰期延长结构域连接的掩蔽部分；以及b)第二多肽链，所述第二多肽链包括通过第二接头与第二半衰期延长结构域连接的IL
‑
2细胞因子或其功能片段，其中所述第一半衰期延长结构域与所述第二半衰期延长结构域缔合，并且其中所述第一接头或所述第二接头中的一个是包括蛋白水解可切割肽的蛋白水解可切割接头。2.根据权利要求1所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述第一多肽链包括式6：N'HL1
‑
L1
‑
MM C'(6)并且所述第二多肽链包括式5：N'HL2
‑
L2
‑
C C'(5)其中HL1是第一半衰期延长结构域，L1是所述第一接头，MM是所述掩蔽部分，HL2是第二半衰期延长结构域，L2是所述第二接头，并且C是所述IL
‑
2细胞因子或其功能片段。3.根据权利要求1或权利要求2所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述第一半衰期延长结构域包括第一Fc结构域或其片段，并且所述第二半衰期延长结构域包括Fc结构域或其片段。4.根据权利要求3所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述第一Fc结构域和/或所述第二Fc结构域各自含有促进所述第一半衰期延长结构域和所述第二半衰期延长结构域非共价缔合的一个或多个修饰。5.根据权利要求3或权利要求4所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述第一半衰期延长结构域和所述第二半衰期延长结构域各自是IgG1 Fc结构域或其片段。6.根据权利要求5所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述第一半衰期延长结构域包括包含突变Y349C、T366S、L38A和Y407V的IgG1 Fc结构域或其片段以在所述第一半衰期延长结构域中形成
‘
臼
’
，并且所述第二半衰期延长结构域包括包含突变S354C和T366W的IgG1 Fc结构域或其片段以在所述第二半衰期延长结构域中形成
‘
杵
’
，根据Kabat EU编号系统进行编号。7.根据权利要求5或6所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述第一半衰期延长结构域和所述第二半衰期延长结构域各自是IgG1 Fc结构域或其片段，并且各自包括根据Kabat EU编号系统进行编号的氨基取代N297A。8.根据权利要求5至7中任一项所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述第一半衰期延长结构域和所述第二半衰期延长结构域各自是IgG1 Fc结构域或其片段，并且各自包括根据Kabat EU编号系统进行编号的氨基取代I253A。9.根据权利要求1或权利要求2所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述第一半衰期延长结构域包括SEQ ID NO:9的氨基酸序列，并且其所述第二半衰期延长结构域包括SEQ ID NO:12的氨基酸序列。10.根据权利要求1或权利要求2所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述第一半衰期延
长结构域包括SEQ ID NO:10的氨基酸序列，并且其所述第二半衰期延长结构域包括SEQ ID NO:13的氨基酸序列。11.根据权利要求1至10中任一项所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中与具有SEQ ID NO:2的成熟IL
‑
2的序列相比，所述IL
‑
2细胞因子或其功能片段被修饰。12.根据权利要求11所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中经修饰的IL
‑
2细胞因子或其功能片段包括相对于具有SEQ ID NO:2的成熟IL
‑
2的序列的修饰R38A、F42A、Y45A和E62A。13.根据权利要求11或权利要求12所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述经修饰的IL
‑
2细胞因子或其功能片段包括相对于具有SEQ ID NO:2的成熟IL
‑
2的序列的修饰C125A。14.根据权利要求11至13中任一项所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述经修饰的IL
‑
2细胞因子或其功能片段包括相对于具有SEQ ID NO:2的成熟IL
‑
2的序列的R38A、F42A、Y45A、E62A和C125A。15.根据权利要求1至14中任一项所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述IL
‑
2细胞因子或其功能片段包括SEQ ID NO:3的氨基酸序列。16.根据权利要求1至15中任一项所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述掩蔽部分包括IL
‑
2Rβ或其片段、部分或变体。17.根据权利要求16所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述IL
‑
2Rβ或其片段、部分或变体包括SEQ ID NO:4的氨基酸序列。18.根据权利要求16所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述IL
‑
2Rβ或其片段、部分或变体包括SEQ ID NO:5的氨基酸序列。19.根据权利要求1至18中任一项所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述第二接头包括蛋白水解可切割肽，使得所述第二接头是蛋白水解可切割接头，并且所述第一接头不包括蛋白水解可切割肽，使得所述第一接头是非蛋白水解可切割接头。20.根据权利要求1至18中任一项所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述第一接头包括蛋白水解可切割肽，使得所述第一接头是蛋白水解可切割接头，并且所述第二接头不包括蛋白水解可切割肽，使得所述第二接头是非蛋白水解可切割接头。21.根据权利要求19或权利要求20所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述非蛋白水解可切割接头的长度介于3个氨基酸与18个氨基酸之间。22.根据权利要求21所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述非蛋白水解可切割接头的长度介于3个氨基酸与8个氨基酸之间。23.根据权利要求19至22中任一项所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述非蛋白水解可切割接头富含氨基酸残基G、S和P。24.根据权利要求19至23中任一项所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述非蛋白水解可切割接头包括SEQ ID NO:14的氨基酸序列。25.根据权利要求19至23中任一项所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述非蛋白水解可切割接头包括SEQ ID NO:23的氨基酸序列。26.根据权利要求1至25中任一项所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述非蛋白水解可切割接头的长度介于10个氨基酸与25个氨基酸之间。27.根据权利要求1至26中任一项所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述蛋白水解可切割接头内的所述可切割肽包括选自由SEQ ID NO:24、25、26、27和28组成的组的氨基酸序
列。28.根据权利要求1至26中任一项所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述蛋白水解可切割接头内的所述可切割肽包括SEQ ID NO:118。29.根据权利要求1至26中任一项所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述蛋白水解可切割接头内的所述可切割肽包括SEQ ID NO:119。30.根据权利要求1至29中任一项所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述蛋白水解可切割接头包括在两侧上侧接有间隔子结构域的蛋白水解可切割肽。31.根据权利要求30所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述间隔子结构域富含氨基酸残基G、S和P。32.根据权利要求30或权利要求31所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述间隔子结构域仅包含选自由G、S和P组成的组的氨基酸残基类型。33.根据权利要求1至25中任一项所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述蛋白水解可切割接头包括选自由SEQ ID NO:16、17、18、19、20、21和22组成的组的氨基酸序列。34.根据权利要求33所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述蛋白水解可切割接头包括选自由SEQ ID NO:19组成的组的氨基酸序列。35.根据权利要求33所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述蛋白水解可切割接头包括选自由SEQ ID NO:17组成的组的氨基酸序列。36.根据权利要求30所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述蛋白水解可切割接头包括SD1
‑
CP
‑
SD2，其中SD1是第一间隔子结构域，CP是可切割肽并且SD2是第二间隔子结构域，并且其中CP具有如SEQ ID NO:118中所示的氨基酸序列，并且SD2具有如SEQ ID NO:29中所示的氨基酸序列。37.根据权利要求30所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述蛋白水解可切割接头包括SD1
‑
CP
‑
SD2，其中SD1是第一间隔子结构域，CP是可切割肽并且SD2是第二间隔子结构域，并且其中CP具有如SEQ ID NO:119中所示的氨基酸序列，并且SD2具有如SEQ ID NO:29中所示的氨基酸序列。38.根据权利要求36或权利要求37所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中SD2的长度为3个至6个氨基酸。39.根据权利要求25所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述蛋白水解可切割接头包括选自由SEQ ID NO:115组成的组的氨基酸序列。40.根据权利要求25所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述蛋白水解可切割接头包括选自由SEQ ID NO:116和117组成的组的氨基酸序列。41.根据权利要求25所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述蛋白水解可切割接头包括选自由SEQ ID NO:112组成的组的氨基酸序列。42.根据权利要求25所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述蛋白水解可切割接头包括选自由SEQ ID NO:113组成的组的氨基酸序列。43.根据权利要求25所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述蛋白水解可切割接头包括选自由SEQ ID NO:114组成的组的氨基酸序列。44.根据权利要求1或权利要求19所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述掩蔽的IL
‑
2细胞因子包括SEQ ID NO:38的第一多肽链。
45.根据权利要求1或权利要求19所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述掩蔽的IL
‑
2细胞因子包括SEQ ID NO:39的第一多肽链。46.根据权利要求1或权利要求20所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述掩蔽的IL
‑
2细胞因子包括SEQ ID NO:125的第一多肽链。47.根据权利要求1或权利要求20所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述掩蔽的IL
‑
2细胞因子包括SEQ ID NO:126的第一多肽链。48.根据权利要求1或权利要求20所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述掩蔽的IL
‑
2细胞因子包括SEQ ID NO:127的第一多肽链。49.根据权利要求1所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述掩蔽的IL
‑
2细胞因子包括SEQ ID NO:39的第一多肽链以及SEQ ID NO:49的第二多肽链。50.根据权利要求1所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述掩蔽的IL
‑
2细胞因子包括SEQ ID NO:40的第一多肽链以及SEQ ID NO:51的第二多肽链。51.根据权利要求1所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述掩蔽的IL
‑
2细胞因子包括SEQ ID NO:38的第一多肽链以及SEQ ID NO:128的第二多肽链。52.根据权利要求1所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述掩蔽的IL
‑
2细胞因子包括SEQ ID NO:38的第一多肽链以及SEQ ID NO:129的第二多肽链。53.根据权利要求1所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述掩蔽的IL
‑
2细胞因子包括SEQ ID NO:38的第一多肽链以及SEQ ID NO:130的第二多肽链。54.根据权利要求1所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述掩蔽的IL
‑
2细胞因子包括SEQ ID NO:125的第一多肽链以及SEQ ID NO:51的第二多肽链。55.根据权利要求1所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述掩蔽的IL
‑
2细胞因子包括SEQ ID NO:126的第一多肽链以及SEQ ID NO:51的第二多肽链。56.根据权利要求1所述的掩蔽的IL
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2细胞因子，其中所述掩蔽的IL
‑
2细胞因子包括SEQ ID NO:127的第一多肽链以及SEQ ID NO:51的第二多肽链。57.一种掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其包括掩蔽部分和IL
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2细胞因子或其功能片段，其中所述掩蔽部分掩蔽所述IL
‑
2细胞因子或其功能片段，由此减少或预防IL
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细胞因子或其功能片段与其同源受体的结合，并且其中在所述IL
‑
2片段或其功能片段与所述掩蔽部分之间存在蛋白水解可切割肽。58.根据权利要求57所述的掩蔽的IL
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2细胞因子，其中所述掩蔽部分和所述IL
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2细胞因子或其功能片段连接在单个多肽链中。59.根据权利要求57或权利要求58所述的掩蔽的IL
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2细胞因子，其中所述掩蔽的IL
‑
2细胞因子包括包含式1的多肽链：N'HL
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L2
‑
C
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L1
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MM C'(1)其中HL是半衰期延长结构域，L1是第一接头，MM是所述掩蔽部分，L2是第二接头，并且C是所述IL
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2细胞因子或其功能片段，其中至少所述第一接头包括蛋白水解可切割肽。60.根据权利要求57或权利要求58所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述掩蔽的IL
‑
2细胞因子包括包含式2的多肽链：N'HL
‑
L2
‑
MM
‑
L1
‑
C C'
(2)其中HL是半衰期延长结构域，L1是第一接头，MM是所述掩蔽部分，L2是第二接头，并且C是所述IL
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2细胞因子或其功能片段，其中至少所述第一接头包括蛋白水解可切割肽。61.根据权利要求57至60中任一项所述的掩蔽的IL
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2细胞因子，其中所述掩蔽部分包括IL
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2Rβ或其片段、部分或变体。62.根据权利要求61所述的掩蔽的细胞因子，其中与SEQ ID NO:4的IL
‑
2β相比，所述IL
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2Rβ或其片段、部分或变体在氨基酸位置C122和C168处具有突变。63.根据权利要求61或权利要求62所述的掩蔽的细胞因子，其中与SEQ ID NO:4的IL
‑
2β相比，所述IL
‑
2Rβ或其片段、部分或变体具有突变C122S和C168S。64.根据权利要求57至63中任一项所述的掩蔽的IL
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2细胞因子，其中所述半衰期延长结构域(HL)包括各自是IgG1 Fc结构域或其片段的第一半衰期延长结构域和第二半衰期延长结构域。65.根据权利要求64所述的掩蔽的IL
‑
2细胞因子，其中所述第一Fc结构域和/或所述第二Fc结构域各自含有促进所述第一半衰期延长结构域和所述第二半衰期延长结构域非共价缔合的一个或多个修饰。66...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：西里欧发展公司，
类型：发明
国别省市：