一种高灵敏非洲猪瘟病毒核酸检测方法的建立技术

本发明专利技术公开了一种高灵敏非洲猪瘟病毒核酸检测方法的建立，属于核酸检测技术领域，一种高灵敏非洲猪瘟病毒核酸检测方法的建立，可以实现通过巢式荧光定量PCR技术，准确诊断、早期筛查和高效检测出非洲猪瘟病毒，根据非洲猪瘟病毒vp72基因设计的引物和探针、建立荧光定量探针法PCR反应体系、将配制好的反应体系放入荧光定量PCR扩增仪中进行荧光定量PCR扩增，设计探针和内外2对引物，经过一次PCR扩增，利用外引物、外引物、内引物和内引物得到四种导向的qPCR扩增产物,从而使巢式PCR内外部引物和特异性探针的设计能够提高检测结果的准确性和特异性，又因其扩增效率显著提高增加了检测的灵敏性，从而有效的减少了检测的时间，提高了检测效率。高了检测效率。高了检测效率。

【技术实现步骤摘要】
一种高灵敏非洲猪瘟病毒核酸检测方法的建立


[0001]本专利技术涉及核酸检测
，更具体地说，涉及一种高灵敏非洲猪瘟病毒核酸检测方法的建立。

技术介绍

[0002]非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus，ASFV)引起的一种猪的急性、出血性传染病，因其严重危害养猪业，且无有效的疫苗防治，世界动物卫生组织将其列为法定上报传染病，我国列为一类传染病，非洲猪瘟也是作为13种重点防范的外来动物疫病之一。
[0003]目前，国外对非洲猪瘟诊断方法有红细胞吸附试验、直接免疫荧光试验、动物接种试验、ELISA、聚合酶链反应等；其中红细胞吸附试验、直接免疫荧光试验的敏感性不高和特异性不强，动物接种试验不安全；实验室诊断ASFV的常规方法是在猪骨髓(PBM)细胞培养中进行病毒分离(VI)，尽管该方法可靠且敏感，但该检测所需时间过长(6天)；聚合酶链反应(PCR)是一种替代VI的快速检测ASFV的方法，特别适用于筛选质量较差或降解的带有不可恢复病毒的样本；PCR技术使ASFV的诊断能够在收样后数小时内完成，缩短了诊断时间本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高灵敏非洲猪瘟病毒核酸检测方法的建立，其特征在于：所述如下步骤：S1.根据非洲猪瘟病毒vp72基因设计引物和探针；S2.建立荧光定量探针法PCR反应体系；S3.将配制好的反应体系放入荧光定量PCR扩增仪中进行荧光定量PCR扩增；S4.观察CT值并分析结果；S5.根据CT值绘制标准曲线。2.根据权利要求1所述的一种高灵敏非洲猪瘟病毒核酸检测方法的建立，其特征在于：所述荧光定量探针法PCR反应体系及条件具体如下:设置内外引物分别为IF 0.3μl、IR 0.3μl、OF 0.3μl、OR 0.3μl和探针P 0.3μl。3.根据权利要求1所述的一种高灵敏非洲猪瘟病毒核酸检测方法的建立，其特征在于：所述步骤1中探针5'端标记荧光...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡文博，智庆文，
申请(专利权)人：江苏晨逸京泽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：