新型冠状病毒检测试剂、检测试剂盒和检测方法技术

本发明专利技术涉及一种新型冠状病毒检测试剂、检测试剂盒和检测方法。本发明专利技术通过对检测试剂中的恒温扩增引物、crRNA和探针的整体设计，有效提升检测的灵敏度。并且，用本发明专利技术的检测试剂检测新型冠状病毒，还具有特异性好、灵敏度高和稳定好的特点。本发明专利技术将恒温扩增技术与CRISPR基因编辑技术相结合，无需提取RNA，能够在常温恒温条件下实现多重扩增的核酸检测，且检测结果能够可视化检测，无需专门的核酸扩增仪和专业的操作人员，结果判读相对简单与直观，检测效率高，特别适合现场检测。本发明专利技术的检测试剂，能够将恒温扩增与CRISPR检测放入同一反应管中进行，实现病毒核酸的一体化检测，减少扩增后开盖所带来的气溶胶污染。少扩增后开盖所带来的气溶胶污染。少扩增后开盖所带来的气溶胶污染。

【技术实现步骤摘要】
新型冠状病毒检测试剂、检测试剂盒和检测方法


[0001]本专利技术涉及本专利技术属于分子生物学与体外分子诊断
，特别涉及一种新型冠状病毒检测试剂、检测试剂盒和检测方法。

技术介绍

[0002]分子诊断主要是应用分子生物学方法检测生物体内遗传物质的结构或表达水平的变化而做出的诊断技术，可以从基因层次进行检测，因此在检测的灵敏度和准确性上的优势较为明显，能够在感染初期识别病毒或者提早确认基因缺陷，从而提供个性化的医疗诊断服务(如肿瘤缺陷基因检测)。目前，全球主要的分子诊断技术可以分为核酸检测和生物芯片两大类。核酸检测包括聚合酶链式反应(PCR)、荧光原位杂交技术(FISH)和基因测序技术；生物芯片技术，又分为基因芯片和蛋白芯片技术，其中，和基因相关的检测是分子诊断的最重要组成部分，往往是医院对传染病诊断的“金标准”。
[0003]PCR是使用最为广泛的核酸扩增技术，因其灵敏性高和特异性强得到广泛应用，然而PCR需要反复的热变性，无法摆脱依赖仪器设备的局限，从而限制了其在临床现场检测中的应用。近年来，随着分子生物学技术的迅速发展，基于核本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括RAA扩增引物对、RAA扩增酶、Cas12a核酸内切酶、crRNA和探针，所述检测试剂检测的靶基因包括ORF1ab基因和N基因中的一种或者多种；所述ORF1ab基因对应的所述RAA扩增引物对包括如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物；所述N基因对应的所述RAA扩增引物对包括如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的引物；所述探针的序列如SEQ ID No.9所示，一端连接荧光标记物，一端连接淬灭基团。2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒检测试剂，其特征在于，所述检测试剂还包括病毒裂解液，所述病毒裂解液包含5mM
‑
50mM Tris缓冲液、0.5％
‑
2％(v/v)甘油、0.05
‑
1.0％(v/v)Tween
‑
20、30mM
‑
100mM NaOH、50mM
‑
150mM KCl。3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒检测试剂，其特征在于，所述检测试剂还包括RAA扩增缓冲液，所述RAA扩增试剂包含3wt％
‑
6wt％PEG20000、40mM
‑
100mM氯化钾、8mM
‑
20mM醋酸镁、1.0mM
‑
2.5mM二硫苏糖醇、2.0mM
‑
4.0mM ATP、0.2mM
‑
0.55mM dNTPs、10mM
‑
120mM磷酸肌酸以及30mM
‑
60mM、pH7.5
‑
8.5的Tris
‑
Ac缓冲液。4.根据权利要求1至3任一项所述的新型冠状病毒检测试剂，其特征在于，所述RAA扩增酶包括逆转录酶、核糖核酸酶、磷酸肌酸激酶、重组酶、重组酶辅助蛋白、单链结合蛋白和DNA聚合酶，可选地，所述检测试剂还包括核糖核酸酶抑制剂。5.根据权利要求4所述的新型冠状病毒检...

【专利技术属性】
技术研发人员：张赛，李永聪，何凡，钱纯亘，
申请(专利权)人：深圳市卓润生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：