【技术实现步骤摘要】
KCl，10 mM CaCl2，5mM β
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巯基乙醇，0.1% BSA；S3：将含辣椒叶肉细胞原生质体的酶解混合液过滤离心，得到原生质体沉淀，重悬后获得辣椒原生质体混悬液；S4：利用PEG介导法进行外源基因的瞬时转化；其中，所述转化体系为：20μg质粒，100 μL辣椒原生质体混悬液，110 μL PEG溶液；所述转化条件为：将转化体系轻柔混匀后于室温孵育20 min；所述PEG溶液的制备方法为：称取3.5 g PEG4000，加入2.5 ml 0.8M甘露醇和1 mL 1M CaCl2，加超纯水定容至10 mL。
[0007]其中，所述GM培养基配方为：2.2 g/L MS粉末 + 15 g/L蔗糖 + 2.7 g/L植物凝胶，pH=5.72。
[0008]其中，所述辣椒原生质体混悬液获得方法为：将含辣椒叶肉细胞原生质体的酶解混合液用孔径75 mm的尼龙网过滤，滤液以100 g离心2 min，去除上清液，用W5溶液重悬原生质体沉淀，普通光学显微镜下用血球计数板观察计数，将原生质体密度调节至2
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106个/mL，...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种辣椒原生质体的分离及瞬时转化方法，其特征在于：包括以下步骤：S1：选取籽粒饱满的辣椒成熟种子，在超净工作台中进行消毒，将消毒后的种子在超净工作台上吹干，接种于GM培养基上进行培养，待辣椒植株第7片真叶刚完全展开时，剪取第5~7片无菌真叶作为供试材料；S2：将剪取的无菌真叶去除主脉，切成宽0.5 mm的细条，浸没于酶解液中，在23℃、黑暗条件下酶解4h，得到含辣椒叶肉细胞原生质体的酶解混合液；其中，所述酶解液配方为：1.25%纤维素酶R
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10，0.3%离析酶R
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10，20 mM pH=5.7 MES缓冲液，0.4 M甘露醇，20 mM KCl，10 mM CaCl2，5mM β
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巯基乙醇，0.1% BSA；S3：将含辣椒叶肉细胞原生质体的酶解混合液过滤，滤液离心后得到原生质体沉淀，重悬后获得辣椒原生质体混悬液；S4：利用PEG介导法进行外源基因的瞬时转化；其中，所述转化体系为：20μg质粒，100 μL辣椒原生质体混悬液，110 μL PEG溶液；所述转化条件为：将转化体系轻柔混匀后于室温孵育20 min；所述PEG溶液的制备方法为：称取3.5 g PEG4000，加入2.5 ml 0.8M甘露醇和1 mL 1M CaCl2，加超纯水定容至10 mL。2.根据权利要求1所述的一种辣椒原生质体的分离及瞬时转化方法，其特征在于：所述GM培养基配方为：2.2 g/L MS粉末 + 15 g/L蔗糖 + 2.7 g/L植物凝胶，pH=5.72。3.根据权利要求1所述的一种辣椒原生质体的分离及瞬时转化方法，其特征在于：所述辣椒原生质体混悬液获得方法为：将含辣椒叶肉细胞原生质体的酶解混合液用孔...
【专利技术属性】
技术研发人员：程伟，朱莉云，储谟立，李园，王楠，
申请(专利权)人：安徽师范大学，
类型：发明
国别省市：
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