一种THRB-CVD20多肽片段、利用该多肽片段制备的多克隆抗体及其应用制造技术

本申请涉及抗体工程的技术领域，具体公开了一种THRB

【技术实现步骤摘要】
一种THRB
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CVD20多肽片段、利用该多肽片段制备的多克隆抗体及其应用


[0001]本申请涉及抗体工程的
，具体涉及一种THRB
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CVD20多肽片段、利用该多肽片段制备的多克隆抗体及其应用。

技术介绍

[0002]甲状腺激素(thyroidhormone)对哺乳动物的生长、发育平衡具有重要作用，它们能够调控哺乳动物的肠道、骨骼、心肌、肝脏及中枢神经系统等相关基因的代谢率、胆固醇和甘油三酸酯水平及心率，甚至影响心情和整体幸福感等。
[0003]甲状腺激素受体(TRs)是一种核受体，属于真核转录因子的超家族，甲状腺激素通过与甲状腺激素受体结合，作用于转录过程实现其对靶基因的正性/负性调节，对于机体的正常分化发育和代谢平衡具有十分重要的作用。甲状腺激素受体有α受体和β受体两种亚型，其中，β1亚型甲状腺激素受体(THRB)能够通过转录调控，起到抑癌的功能，在肝脏及其它组织中具有较强的重要作用。因此，THRB成为重要的药物研究和基因治疗靶点，对于THRB的识别、鉴定和筛选，有利于进一步阐明其在肿瘤发生以及治疗领域的重要功能。
[0004]目前，商业化THRB抗体多数不具备流式分选应用，无法满足科学家对特定THRB阳性表达活细胞的识别、鉴定和筛选，使得THRB功能的深入研究受到限制。

技术实现思路

[0005]为了进一步提高THRB抗体的灵敏度和特异性，同时能够准确地定位识别靶点细胞，将其应用于流式分选，从而能够识别、鉴定和筛选THRB阳性表达活细胞，本申请提供一种THRB
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CVD20多肽片段、利用该多肽片段制备的多克隆抗体及其应用。
[0006]第一方面，本申请提供一种THRB
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CVD20多肽片段，采用如下的技术方案：
[0007]一种THRB
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CVD20多肽片段，所述THRB
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CVD20多肽片段的氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示。
[0008]第二方面，本申请提供了上述THRB
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CVD20多肽片段的制备方法，具体包括以下步骤：树脂溶胀；氨基酸活化；制备氨基酸
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树脂；脱除保护基；制备肽树脂；分离纯化。
[0009]本申请按照如SEQ ID N0.1所示的氨基酸序列，通过树脂溶胀、氨基酸活化、制备氨基酸
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树脂、脱除保护基、制备肽树脂、分离纯化步骤，制备得到纯度和收率较高的THRB
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CVD20多肽片段。
[0010]优选地，所述树脂溶胀步骤中采用的溶剂选自NMP、DMF、DCM。
[0011]经过试验分析可知，相比于选择使用DMF或者DCM，本申请选择使用NMP作为树脂的溶胀溶剂，制备得到的多肽片段的收率明显较高。因此，本申请选择使用NMP作为树脂的溶胀溶剂。
[0012]优选地，所述氨基酸活化步骤中采用的活化体系选自HOBT/DCC、HOAT/DCC、HOBT/DIC、Oxymapure/DIC、HBTU/DIPEA、TBTU/DIPEA。
[0013]经过试验分析可知，相比于选择使用HOAT/DCC、HOBT/DIC、Oxymapure/DIC、HBTU/DIPEA或者TBTU/DIPEA，本申请选择使用HOBT/DCC作为氨基酸活化步骤中的活化体系，制备得到的多肽片段的收率进一步提高。因此，本申请选择使用HOBT/DCC作为氨基酸活化步骤中的活化体系。
[0014]本申请使用HOBT/DCC的活化体系，具有廉价、使用方便的特点，且有利于在室温下使得氨基酸与树脂快速地进行缩合反应，能够有效抑制多肽合成中的外消旋作用，使得制备得到的多肽片段的收率较高。
[0015]优选地，所述分离步骤为：用裂解液分离所述肽树脂中的树脂，反应后过滤，并通过减压蒸馏、水溶、萃取液萃取。
[0016]进一步地，所述裂解液包括TFA、EDT、硫代苯甲醚和水。
[0017]经过试验分析可知，相比于选择使用TFA和水，本申请选择使用TFA、EDT、硫代苯甲醚和水作为裂解液，制备得到的多肽片段的纯度明显较高。因此，本申请选择使用本申请选择使用TFA、EDT、硫代苯甲醚和水作为裂解液分离肽树脂中的树脂。
[0018]第三方面，本申请提供一种多肽抗原，所述多肽抗原是由上述THRB
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CVD20多肽片段制备得到的。
[0019]第四方面，本申请提供一种anti
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THRB多克隆抗体，所述anti
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THRB多克隆抗体是由上述THRB
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CVD20多肽片段制备得到的。
[0020]本申请利用THRB
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CVD20多肽片段制备的anti
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THRB多克隆抗体的效价较高，表明通过本申请制备的anti
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THRB多克隆抗体的灵敏度较高。
[0021]第五方面，本申请提供了上述anti
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THRB多克隆抗体在识别、鉴定和筛选THRB领域的应用。
[0022]本申请利用THRB
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CVD20多肽片段制备的anti
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THRB多克隆抗体的特异性较高，且能够用于识别人、大鼠、小鼠的THRB蛋白；在大、小鼠肝组织细胞中表达定位准确；同时该anti
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THRB多克隆抗体能够应用于流式分选，可进一步用于THRB表达阳性细胞的识别、鉴定和筛选。
[0023]综上所述，本申请的技术方案具体以下效果：
[0024]本申请利用如SEQ ID N0.1所示的氨基酸序列，通过树脂溶胀、氨基酸活化、制备氨基酸
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树脂、脱除保护基、制备肽树脂、分离纯化的步骤制备得到THRB
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CVD20多肽片段，该多肽片段的纯度和收率较高。
[0025]本申请通过筛选树脂溶胀步骤中采用的溶剂，并筛选氨基酸活化步骤中采用的活化体系，进一步提高了THRB
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CVD20多肽片段的纯度和收率。
[0026]本申请利用THRB
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CVD20多肽片段制备的anti
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THRB多克隆抗体的灵敏度和特异性较高，能够准确识别人、鼠的THRB蛋白；且在鼠肝组织细胞中表达定位准确；同时该anti
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THRB多克隆抗体能够应用于流式分选，从而进一步用于THRB表达阳性细胞的识别、鉴定和筛选。
附图说明
[0027]图1为实施例1制备的THRB
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CVD20多肽片段和对比例1制备的多肽片段的HPLC图及MS图(a为实施例1制备的THRB
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CVD20多肽片段的HPLC图；b为实施例1制备的THRB
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CVD20多
肽片段的MS图；c为对比例1制备的多肽片段的HPLC图；d为对比例1制备的多肽本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种THRB
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CVD20多肽片段，其特征在于，所述THRB
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CVD20多肽片段的氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示。2.如权利要求1所述的THRB
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CVD20多肽片段的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：树脂溶胀；氨基酸活化；制备氨基酸
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树脂；脱除保护基；制备肽树脂；分离纯化。3.根据权利要求2所述的THRB
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CVD20多肽片段的制备方法，其特征在于，所述树脂溶胀步骤中采用的溶剂选自NMP、DMF、DCM。4.根据权利要求2所述的THRB
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CVD20多肽片段的制备方法，其特征在于，所述氨基酸活化步骤中采用的活化体系选自HOBT/DCC、HOAT/DCC、HOBT/DIC、Oxymapure/DIC、HBTU/DIPEA、TBTU/DIPEA。5...

【专利技术属性】
技术研发人员：姬志娟，吴炬，赵风强，
申请(专利权)人：北京博奥森生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：