抗病毒病原体的疫苗制造技术

本公开描述了一种用于预防或治疗病毒性疾病的独特的病毒肽(VP)疫苗。该疫苗是合成生产的，并且不要求在生物细胞(例如大肠杆菌、CHO细胞、酵母细胞)中可能需要随后的内毒素测定/去除或病毒清除程序的生产步骤。hC肽与VP分开合成，在hC自组装后，VP共价偶联形成VP

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗病毒病原体的疫苗
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年5月4日提交的美国临时专利申请63/019,654的权益，其全部内容通过引用并入本文。
[0003]序列表信息
[0004]名称为“H197
‑
0006PCT_ST25.txt”的计算机可读文本文件，于2021年5月3日或约2021年5月3日创建，文件大小为约64.4KB，含有本申请的序列表并且其全部内容通过引用并入本文。


[0005]本公开描述了抗病毒病原体的疫苗。

技术介绍

[0006]病原体是引起疾病的传染剂。传染剂可以是微生物，诸如病毒。病毒是含有RNA或DNA的约20
‑
300纳米长的小颗粒。它们感染所有类型的生命形式，包括人、动物、植物和其它微生物，诸如细菌和古细菌。它们仅在生物体的活细胞内复制并引起传染病，从常见的感冒、流感(flu)领域到严重疾病，诸如天花、流感(influenza)、腮腺炎、麻疹、水痘、脊髓灰质炎和风疹。
[0007]已经开发了用于多种传染病的疫苗，并成功地降低了流感的发病率，例如腮腺炎、麻疹、天花、水痘、脊髓灰质炎和风疹。在宿主(诸如细菌(主要是大肠杆菌)、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞)中表达重组蛋白是目前生产亚单位疫苗的最常用方法，此类方法已经非常成功，并将维持为一种重要的疫苗生产方法。通常，通过基因组学分析、功能分析、计算机模拟分析(例如功能预测、结构分析、表位鉴定等)或三者的组合来鉴定感染因子蛋白。启动表达试验以评估免疫原性试验的产量和溶解度。然后将产生针对疾病靶标的高效价抗体的亚单位用于保护研究，其中，检测疫苗保护宿主免受感染和/或疾病表现和进展的能力。然后将满足所有这些标准的亚单位向前推进以进行疫苗生产优化、稳定性和毒性/安全性/剂量研究。表达优化研究对于确定生产规模和可行性也是重要的。整个过程耗时，劳动强度大，并且成本很高。
[0008]因此，还需要开发一种生产用于治疗和/或预防病毒性疾病和感染的疫苗的更有效和成本有效的方法。

技术实现思路

[0009]
技术实现思路
部分是为了以简化形式引入概念的选择，这将在下面的具体实施方式中进一步描述。
技术实现思路
部分不旨在表明所要求保护的主题的所有关键特征或基本特征，也不旨在单独用作确定所要求保护的主题的范围的辅助。
[0010]本公开描述了一种hMP多肽，其包括与单体肽(MP)连接的半抗原(h)。本公开还描述了一种缀合物，其包括与半抗原载体(hC)缀合的半抗原。半抗原可以是靶蛋白或靶抗原。
在实施方案中，半抗原是病毒肽(VP)；hMP多肽包括病毒肽(VP)和MP(VPMP)；并且缀合物为VP
‑
hC。在实施方案中，hMP在自组装后可以用作hC或低聚物hC，诸如HhC(六聚体hC)，因为它可以采用相同的二级、三级或四级结构。在实施方案中，当T细胞表位除病毒肽外还连接至MP时，VMP的功能类似于VP
‑
hC缀合物，但是没有缀合的病毒肽。VP是来自病毒的肽，诸如SARS
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CoV
‑
2病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、西尼罗病毒、黄热病、人乳头瘤病毒和登革病毒。在实施方案中，VP是来自SAR2
‑
CoV
‑
2病毒的S1、S2、S3、S4、S5、S6或M1肽。在实施方案中，VP包括SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：120、SEQ IDNO：132、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：117、SEQ IDNO：130、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：73、SEQ IDNO：57、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：54或SEQ ID NO：67所示的氨基酸序列。
[0011]本文所述的hC包括两亲性α螺旋的单体肽，该两亲性α螺旋包括两个或更多个七肽重复区(heptad repeat)，该七肽重复区自组装成二聚体、三聚体、四聚体、五聚体、六聚体、七聚体、八聚体、九聚体或十聚体。每个七肽重复区包括SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。在实施方案中，单体肽自组装成六聚半抗原载体(HhC)。hC还可以包括靶肽(例如VP)，在这种情况下，hC是自组装成低聚物(VPhC低聚物)的VPMP。在实施方案中，VPMP自组装成六聚体中，例如，包括接合至HhC的VP(VPHhC)的hC。在实施方案中，本文所述的缀合物包括与HhC缀合的VP(VP
‑
HhC)。
[0012]此外，本公开描述了VPhC低聚物或VP
‑
hC的缀合物，其在hC的两亲性α螺旋的N
‑
末端和/或C
‑
末端含有T细胞表位，该T细胞表位是单体肽的一部分或者共价连接至VPhC或VP
‑
hC。
[0013]在实施方案中，本公开描述了组合物，该组合物包括本文所述的VPhC缀合物或VPhC低聚物和赋形剂。在实施方案中，该组合物是药物组合物，可用于治疗有需要的受试者，诸如预防或降低受试者罹患病毒性疾病的风险。受试者可能容易被病毒感染。还可在病毒性感染之前向受试者施用该药物组合物，以预防受试者罹患严重或致命的病毒性疾病和/或减轻病毒性疾病的症状。药物组合物中的VPhC低聚物或VP
‑
hC缀合物可在受试者中产生抗体以抑制或降低病毒的功能，并保护受试者免于罹患严重或致命的病毒性疾病或感染。也可向有需要的受试者施用该药物组合物，以产生抗体来中和病毒并缓解病毒性感染或疾病的症状。在实施方案中，包括VPhC低聚物和VP
‑
hC缀合物的药物组合物可用作预防和/或治疗病毒性疾病或感染的疫苗。
[0014]在实施方案中，本公开描述了使用本文所述的VPhC低聚物或VP
‑
hC缀合物作为治疗剂或疫苗(诸如免疫原)用于在受试者中诱导稳定且持久的免疫应答的方法。
[0015]在实施方案中，VP是SARS
‑
CoV
‑
2(CoV)肽，在这种情况下，hC是自组装成低聚物(CoVhC低聚物)的CoVMP。在实施方案中，CoVMP自组装到六聚体中，例如包括接合至HhC(CoVHhC)的CoV肽的hC。在实施方案中，本文所述的缀合物包括缀合至HhC的CoV(CoV
‑
HhC)。
[0016]在实施方案中，要治疗和/或预防的病毒性感染或疾病是SARS
‑
CoV
‑
2。
附图说明
[0017]图1示出了SARS
‑
CoV
‑
2的刺突糖蛋白(S
‑
蛋白)的亚基。示出了候选抗原肽在S
‑
蛋白中的位置。
[0018]图2A和图2B示出了未缀合的支架(2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种病毒肽(VP)缀合物(VP
‑
hC)或VP低聚物(VPhC)，所述VP低聚物包括共价连接至半抗原载体(hC)的一种或多种病毒肽(VP)，所述hC包括单体肽，所述单体肽包括以下氨基酸序列：(hwxhxyz)n(SEQ ID NO：2)，其中：h是疏水性残基或非极性残基；w是带正电荷残基、带负电荷残基、极性不带电残基或非极性脂肪残基；x是带负电荷残基、带正电荷残基、非极性脂肪残基或族极性不带电残基；y是用于表位偶联的残基；z是带负电荷残基、带正电荷残基、极性不带电残基或非极性脂肪残基；以及n是大于1的整数；并且其中，所述VP缀合物包括缀合至所述hC的一种或多种VP；并且其中，所述VP低聚物包括并入所述hC中的一种或多种VP。2.根据权利要求1所述的VP缀合物或VP低聚物，其中，所述单体肽包括氨基酸序列SEQ ID NO：2，其中：h是I、L、V、F、W、Y、M、G或A；w是G、R、A、N、Q、H、S、D、E、K或T；x是R、S、N、Q、A、G、T、D、E、K、H或C；y是K、H、C、D、E、R、W、Y、Q、N或含有能够共价偶联的反应基团的非天然氨基酸或分子；z是A、D、H、S、E、R、N、Q、K或G；以及n是2至10。3.根据权利要求1所述的VP缀合物或VP低聚物，其中，所述单体肽包括氨基酸序列SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30或SEQ ID NO：31。4.根据权利要求1所述的VP缀合物或VP低聚物，其中，所述单体肽形成二聚体、三聚体、四聚体、五聚体、六聚体、七聚体、八聚体、九聚体或十聚体。5.根据权利要求1所述的VP缀合物或VP低聚物，其中，所述一种或多种VP获自冠状病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、人乳头瘤病毒(HPV)、登革热病毒、黄热病毒(YFV)或西尼罗病毒(WNV)，并且可选地，其中，所述一种或多种VP获自SARS
‑
CoV
‑
2病毒。6.根据权利要求5所述的VP缀合物或VP低聚物，其中，所述一种或多种VP包括SARS
‑
COV
‑
2病毒的刺突糖蛋白或膜蛋白(M)的一种或多种S肽，并且可选地，其中，所述一种或多种S肽包括S1、S2、S3、S4、S5和/或S6，并且所述膜肽包括M1。7.根据权利要求6所述的VP缀合物或VP低聚物，其中，所述一种或多种VP包括氨基酸序列SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：117和/或SEQ ID NO：130。8.根据权利要求1所述的VP缀合物或VP低聚物，其中，所述一种或多种VP包括修饰的VP，所述修饰的VP包括修饰的氨基酸序列，并且可选地，其中，一个或多个半胱氨酸(C)被丝氨酸(S)取代，或者
其中，所述修饰的VP包括氨基酸序列SEQ ID NO：139或SEQ IDNO：140。9.根据权利要求7或8所述的VP缀合物或VP低聚物，其中，所述一种或多种VP在其N
‑
末端和/或C
‑
末端包括另外的氨基酸，所述另外的氨基酸是V(缬氨酸)和/或DDEDC(SEQ ID NO：116)，并且可选地，其中，所述一种或多种VP包括氨基酸序列SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：54和/或SEQ ID NO：67。10.根据权利要求9所述的VP缀合物或VP低聚物，其中，所述一种或多种VP还在其N
‑
末端和/或C
‑
末端包括保护基团，并且可选地，其中，所述保护基团包括乙酰基和/或酰胺基。11.根据权利要求1至10中任一项所述的VP缀合物或VP低聚物，其中，所述VP缀合物或VP低聚物包括来自SARS
‑
CoV
‑
2的不同来源或菌株的两种或更多...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯思，
申请(专利权)人：海克斯麦治疗公司，
类型：发明
国别省市：