一种植物茉莉酸甲基化酶活性检测试盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种植物茉莉酸甲基化酶活性检测试盒及检测方法，包括以下试剂：试剂一：20mmol/L pH 6.0磷酸缓冲溶液，4℃保存；试剂二：液体100mL

【技术实现步骤摘要】
一种植物茉莉酸甲基化酶活性检测试盒及检测方法


[0001]本专利技术涉及活性检测试盒领域，特别涉及一种植物茉莉酸甲基化酶活性检测试盒及检测方法。

技术介绍

[0002]随着乡村振兴的国家战略以及农业的快速发展，对农业学科领域的研究也随之快速发展。在植物学科领域内，植物激素一直都是研究的重点，茉莉酸激素系新发现的植物激素之一，是植物自身合成的微量有机物质，在植物体内含量极微，但对植物生长发育具有显著影响，其主要作用是促进细胞分裂和扩大，促进芽分化和侧芽发育，延缓衰老和打破休眠等。
[0003]茉莉酸甲基化酶是合成茉莉酸甲酯的关键酶，对于植物体自身合成茉莉酸甲酯起着关键作用，间接控制着植物的生长发育。目前植物农学领域的科研工作者，由于没有合适的检测方法能够检测茉莉酸甲基化酶的活性，不能更加深入的研究植物激素的生成过程，研究进展停滞不前。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种植物茉莉酸甲基化酶活性检测试盒及检测方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种植物茉莉酸甲基化酶活性检测试盒及检测方法，包括以下试剂：
[0006]试剂一：20mmol/L pH 6.0磷酸缓冲溶液，4℃保存；
[0007]试剂二：液体100mL
×
1瓶，
‑
20℃保存；
[0008]试剂三：粉剂
×
1瓶，4℃保存；
[0009]试剂四：1mmol/L茉莉酸溶液，4℃保存。
[0010]本专利技术同时要求保护一种植物茉莉酸甲基化酶活性检的检测方法，使用如上述的植物茉莉酸甲基化酶活性检测试盒进行，包括如下步骤：
[0011]S1，对植物茉莉酸甲基化酶的提取反应；
[0012]S2，仪器检测；
[0013]S3，进行植物茉莉酸甲基化酶活性的计算。
[0014]优选的，在步骤S1中，采用试剂一对植物样本进行茉莉酸甲基化酶的提取。
[0015]优选的，在步骤S1中，采用提取出的茉莉酸甲基化酶对茉莉酸进行降解反应，得到茉莉酸甲基化酶样本溶液。
[0016]优选的，在步骤S2中，准备一定浓度的茉莉酸标准品溶液，采用高效液相色谱仪分别对步骤S2中得到的茉莉酸甲基化酶样本溶液，以及茉莉酸标准品溶液进行测试。
[0017]优选的，采用高效液相色谱仪检测时，流动相为甲醇和水的混合液，取200mL甲醇和300mL超纯水混合，加入3mL试剂四，混匀；其中甲醇和水的体积比为40:60。
[0018]优选的，在步骤S3中，植物茉莉酸甲基化酶活性按样本鲜重计算：
[0019]茉莉酸甲基化酶活性＝[(S测定+1197.1)
÷
4407
‑
(S对照+1197.1)
÷
4407]*V提取
÷
T
÷
W*224.3*103；
[0020]其中，每g组织每分钟生成1mmol的茉莉酸甲酯定义为一个酶活力单位。
[0021]其中，S测定：测试组中茉莉酸甲酯的峰面积(仪器上显示的值)，S对照：对照管中茉莉酸甲酯的峰面积(仪器上显示的值)；ΔS＝S对照与S测定之间的差值；V提取：提取的体积，T：反应时间，即60min，224.3为茉莉酸甲酯的相对分子质量，103为1g换算成1mg的数量级，W：步骤S1中称取的质量。
[0022]本专利技术的技术效果和优点：
[0023](1)本专利技术通过组织了生物，化学两大学科的专业科研人员，对该酶活的理化性质以及实验原理进行成分调研，利用HPLC检测产物的方法，成功的解决了该酶活性检测的难题，基于高效液相色谱法，该仪器检测灵敏度极高，可以检测的茉莉酸甲酯含量达到ng/mL，检测时间短，完成一个样本的测定时间在15min，同时配备了自动检测器，可以24小时自动进样检测；
[0024](2)本专利技术适用性很广，对于植物叶片，果实，根系等植物体的各个部位的茉莉酸甲基化酶活性检测都可以进行，无杂质干扰，无假阳性。
附图说明
[0025]图1为本专利技术拟合后的tZ浓度标准曲线图。
[0026]图2为本专利技术对照组茉莉酸甲酯HPLC图谱。
[0027]图3为本专利技术测定组茉莉酸甲酯HPLC图谱。
[0028]图4为本专利技术酶活性检测测试谱图。
[0029]图5为本专利技术茉莉酸甲酯的生成反应。
具体实施方式
[0030]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0031]本专利技术提供了如图1
‑
5所示的一种植物茉莉酸甲基化酶活性检测试盒及检测方法。
[0032]实施例一：
[0033]一种植物茉莉酸甲基化酶活性检测试盒，包括以下试剂：
[0034]试剂一：20mmol/L pH 6.0磷酸缓冲溶液，4℃保存；
[0035]试剂二：液体100mL
×
1瓶，
‑
20℃保存；(50mM Tris
‑
HCl 6，8.56g蔗糖，88mg EDTA)；
[0036]试剂三：粉剂
×
1瓶，4℃保存；(称取5mg DTNB，5mg丙二酰CoA于30mL试剂瓶)；
[0037]试剂四：1mmol/L茉莉酸溶液，4℃保存。
[0038]一种植物茉莉酸甲基化酶活性检的检测方法，使用如上述的植物茉莉酸甲基化酶
活性检测试盒进行，包括如下步骤：
[0039](一)准备试验用品：高效液相色谱仪、低速离心机、氮吹仪、溶剂抽滤装置、针头式过滤器(有机系，50个，0.22μm)、滤膜(水系和有机系各1个，0.45μm)、C18柱(4.6
×
250mm)、可调式移液器、样品瓶(50个，2mL)、甲醇(色谱级，500mL)、和超纯水。
[0040](二)实验前的准备工作：
[0041]1、将超纯水500mL和甲醇500mL用0.45μm的滤膜抽滤，以除去溶剂中的杂质，防止堵塞色谱柱。(注：蒸馏水用水系滤膜抽滤，甲醇用有机系滤膜抽滤)。
[0042]2、流动相的配制：将甲醇和超纯水按照400mL：600mL的比例配成流动相，可取200mL甲醇和300mL超纯水混合，加入3mL试剂四，混匀。
[0043]3、将配好的流动相超声20分钟，以脱去溶剂中的气泡，防止堵塞色谱柱。
[0044](三)进行提取和试验操作，包括如下步骤：
[0045]1、取鲜样的植物样本0.5g，置研钵中，加入5mL预冷的试剂一，置冰浴中研磨成浆。10000转/分钟，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种植物茉莉酸甲基化酶活性检测试盒，其特征在于：包括以下试剂：试剂一：20mmol/L pH 6.0磷酸缓冲溶液，4℃保存；试剂二：液体100mL
×
1瓶，
‑
20℃保存；试剂三：粉剂
×
1瓶，4℃保存；试剂四：1mmol/L茉莉酸溶液，4℃保存。2.一种植物茉莉酸甲基化酶活性检的检测方法，使用如权利要求1所述的植物茉莉酸甲基化酶活性检测试盒进行，其特征在于：包括如下步骤：S1，对植物茉莉酸甲基化酶的提取反应；S2，仪器检测；S3，进行植物茉莉酸甲基化酶活性的计算。3.根据权利要求2所述的一种植物茉莉酸甲基化酶活性的检测方法，其特征在于，在步骤S1中，采用试剂一对植物样本进行茉莉酸甲基化酶的提取。4.根据权利要求3所述的一种植物茉莉酸甲基化酶活性的检测方法，其特征在于，在步骤S1中，采用提取出的茉莉酸甲基化酶对茉莉酸进行降解反应，得到茉莉酸甲基化酶样本溶液。5.根据权利要求4所述的一种植物茉莉酸甲基化酶活性的检测方法，其特征在于，在步骤S2中，准备一定浓度的茉莉酸标准品溶液，采用高效液相色谱仪分别对步骤S2中得到的茉...

【专利技术属性】
技术研发人员：王黔，吴华静，张乃红，
申请(专利权)人：苏州梦犀生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：