一种抗体高分子偶联物及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，具体公开了一种抗体高分子偶联物及其制备方法与应用。本发明专利技术的制备偶联物的方法，其包括：(1)制备共聚物，所述共聚物为聚(N

【技术实现步骤摘要】
一种抗体高分子偶联物及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体地说，涉及一种抗体高分子偶联物及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]目前，有些免疫治疗的药代动力学行为或者治疗方法仍存在缺陷。
[0003]例如，近年来，免疫治疗已经作为一种新兴的手段用于肿瘤的预防和治疗。尤其是对于迁移或者扩散的肿瘤而言，其特异性识别和杀伤的特点大大降低了治疗过程中的毒副作用。其中以CAR
‑
T(嵌合抗原受体T细胞)治疗为代表的细胞疗法在血液病例如急性白血病的治疗展示出巨大的潜力。同时CAR
‑
T细胞治疗也在淋巴瘤领域展现出巨大的潜力。以CD19位靶向的CAR
‑
T疗法正在临床大力推进，展现出巨大的潜力。
[0004]然而，CAR
‑
T细胞在杀伤肿瘤的同时，也会与其他免疫细胞相互作用，会刺激单核细胞或者巨噬细胞释放大量的炎症因子，产生细胞因子风暴，并且产生一系列威胁生命的症状，如低血压，高烧，血管渗漏等，严重的可导致器官衰竭和致死性，我们把这一现象称为细胞因子释放综合征。为了缓解相关的症状，一些激素类药物如糖皮质激素被用于缓解或者抑制CAR
‑
T诱导的细胞因子风暴。然而这些激素类药物在抑制细胞因子风暴的同时，也会对免疫系统产生非常严重的损害。
[0005]目前的研究证据表明，炎症因子白介素
‑
6在CAR
‑
T诱导的细胞因子风暴中扮演着重要的角色。因此人们使用白介素
‑
6的阻断性抗体药物，包括白介素
‑
6的抗体如西妥昔单抗(Siltuximab)和白介素
‑
6受体的抗体如托珠单抗(Tocilizumab)已经在临床上用于控制和管理CAR
‑
T诱导的细胞因子风暴及其相关症状。然而这些阻断性抗体面临着以下的问题和挑战：(1)注射这些阻断性抗体进入全身的循环系统容易引起毒副作用，例如高尿酸血症、呼吸道感染和肝毒性。(2)临床研究表明，托珠单抗并不能有效抑制致死的神经毒性，甚至有研究表明，托珠单抗因为阻断了白介素
‑
6和其受体的结合，因而导致血液内游离的白介素
‑
6增多，继而导致进入脑部的白介素
‑
6增多，但是同时由于托珠单抗不能跨越血脑屏障，因此在一定程度上加重了神经毒性。(3)更加重要的是，CAR
‑
T诱导的细胞因子风暴管理需要综合多个非特异性的指标去判定，其是否发生，什么时候发生及发生的严重程度都有着严重的不确定性。由于这些抗体类药物会被迅速的清除至体外，因此过早的用药一方面会降低抑制效果。同时考虑到白介素
‑
6在维持正常的生理活动中也扮演着重要角色，因此对体内正常白介素
‑
6产生的干扰也会对正常的生理活动产生影响。晚于细胞因子风暴用药不会对其产生治疗效果。即使能够在风暴窗口期进行给药，其迅速代谢的特点也大大降低了其作用时间。因此，改善其药代动力学行为或者寻找更加合适的治疗方法迫在眉睫。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的主要在于提供一种可有效降低可结合抗体的物质(如炎症因子白介素
‑
6)的水平，从而避免不期望的身体反应(如细胞因子风暴)的产生，并缓解相关症状的偶
联物。
[0007]本专利技术的具体技术方案如下：
[0008]本专利技术提供一种制备偶联物的方法，其包括：
[0009](1)制备共聚物，所述共聚物为聚(N
‑
异丙基丙烯酰胺
‑
co
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甲基丙烯酸)；
[0010](2)将所述共聚物的羧基进行化学调整；
[0011](3)将步骤(2)化学调整后的共聚物与抗体偶联。
[0012]本专利技术的偶联物由特定温敏性水凝胶(共聚物)通过化学偶联抗体组成，其具有温度敏感、可注射的特点，在室温的环境中，呈现出液态的溶胶状态，在体温的环境中，可迅速转变为固态的凝胶的状态，因而可方便地注射到皮下位点，并固定在注射位点，进而使其上偶联的抗体通过特定水凝胶骨架固定在皮下位点，转变了其药代动力学作用形式，由游离的抗体阻断转变为原位的吸附，从而避免在抗体治疗时产生不期望的身体反应。
[0013]本专利技术的偶联物还具有温度可逆特性，可通过冰敷等降温的方法使其从固态的凝胶转变成液体的溶胶，然后使用注射器进行移除。
[0014]该偶联物具有类似海绵的多孔、吸附特性，通过化学偶联特异性抗体，能够在原位实时吸附间质液和血液循环中升高的可结合抗体的物质，从而避免不期望的相关症状。例如，该偶联物可作为“细胞因子海绵”降低血清和脑部其他炎症相关因子的浓度，并缓解细胞因子风暴相关的症状，如低血压，血管渗漏以及致死性。而且，该偶联物不影响CAR
‑
T的杀伤活性，没有诱导注射位点的炎症。最后皮下注射的该偶联物可通过冰敷的方法吸出。本专利技术制备方法简单易行，可解决CAR
‑
T治疗过程中发生细胞因子风暴的风险。
[0015]本专利技术方法的步骤(1)中，以N
‑
异丙基丙烯酰胺和甲基丙烯酸作为原料，偶氮二异丁腈作为引发剂，进行所述共聚物的制备；所述N
‑
异丙基丙烯酰胺和甲基丙烯酸的质量比为(35
‑
38)：1，优选为(36
‑
37):1。
[0016]本专利技术方法的步骤(1)中，在无氧条件下进行所述共聚物的制备，反应溶剂为无水甲醇，反应温度为65
‑
75℃，优选为70℃。反应时间为6.5
‑
7.5小时，优选为7小时。
[0017]本专利技术的温敏性水凝胶(共聚物)为两种单体的共聚合(自由基聚合)反应得到的特定高分子聚合物。该聚合物形成有特定的骨架结构，可为抗体提供特定的偶联载体，从而使得可结合抗体的物质能被高效吸附到偶联物上，转变了抗体的给药方式，有效避免抗体进入体内可能引起的毒副作用以及易被迅速排出至体外的弊端。
[0018]具体地，本专利技术研究发现聚(N
‑
异丙基丙烯酰胺)虽然也具有温敏性，但是其骨架结构不利于后续与抗体的连接。故而本专利技术将具有特定结构的含有羧基的甲基丙烯酸单体以特定比例引入到高分子骨架上，从而使得获得的高分子载体的结构既可有效连接抗体，具多孔结构，利于吸附可结合抗体的物质，又能很好地保持整个材料的温敏性能。
[0019]作为一个优选方案，本专利技术的共聚物制备时，所用单体N
‑
异丙基丙烯酰胺的投料范围为960
‑
980mg，优选为970mg；甲基丙烯酸的投料范围为26
‑
27mg，优选为26.4mg；反应溶剂无水甲醇的体积范围为8
‑
12mL，优选为10mL；偶氮二异丁腈的用量范围为7
‑
7.5mg，优选为7.325mg。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备偶联物的方法，其特征在于，包括：(1)制备共聚物，所述共聚物为聚(N
‑
异丙基丙烯酰胺
‑
co
‑
甲基丙烯酸)；(2)将所述共聚物的羧基进行化学调整；(3)将步骤(2)化学调整后的共聚物与抗体偶联。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，以N
‑
异丙基丙烯酰胺和甲基丙烯酸作为原料，偶氮二异丁腈作为引发剂，进行所述共聚物的制备；所述N
‑
异丙基丙烯酰胺和甲基丙烯酸的质量比为(35
‑
38)：1。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，在无氧条件下进行所述共聚物的制备，反应溶剂为无水甲醇，反应温度为65℃
‑
75℃，优选为70℃。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的方法，其特征在于，所述化学调整为将所述共聚物中的羧基调整为马来酰亚胺基团。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，以N
‑
(2
‑
氨基乙基)马来酰亚胺盐酸盐进行所述化学调整；所述共聚物中的甲基丙烯酸单体与所述N
‑
(2
‑
氨基乙基)马来酰亚胺盐酸盐的摩尔比为1：(1
‑
5)，优选为1:2。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，使用1
‑
乙基
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺和N

【专利技术属性】
技术研发人员：梁兴杰，吴雁，宫宁强，李宪磊，
申请(专利权)人：国家纳米科学中心，
类型：发明
国别省市：