一种牛副结核病间接ELISA检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种牛副结核病间接ELISA检测试剂盒及其应用。本发明专利技术属于微生物检测技术领域。本发明专利技术成功筛选出具有良好抗原性的包被原，同时应用该抗原建立了牛副结核病间接ELISA检测试剂盒及其检测方法。本发明专利技术通过对100份MAP阳性血清的检测，得出本发明专利技术方法的敏感性为93.0%。通过对200份MAP阴性血清的检测得出本发明专利技术方法的特异性为95.5%，明显高于其他检测方法。总之，本发明专利技术建立的牛副结核病间接ELISA检测的方法具有快速准确，敏感性和特异性高的特点。本发明专利技术的提出为预防和清除牛副结核病，保护我国畜牧业健康快速的发展提供了技术支撑。技术支撑。技术支撑。

【技术实现步骤摘要】
一种牛副结核病间接ELISA检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及一种牛副结核病间接ELISA检测试剂盒及其应用。本专利技术属于微生物检测


技术介绍

[0002]禽分枝杆菌副结核亚种（Mycobacterium aviumsubsp.paratuberculosis，MAP）是副结核病（Paratuberculosis，PTB）或约内氏病（Johne
’
s disease，JD）的病原菌，PTB是一种进行性、感染性、肉芽肿性的慢性肠炎，宿主范围主要为反刍动物，特别是奶牛和各种驯养动物。上世纪初，由于交通工具的发达使得动物可以在世界各地移动，导致PTB在全球开始流行，在大多数重要的乳制品生产国，奶牛中MAP感染的群体流行率超过50％，感染副结核的病牛不适用于育种，同时病牛的出售极易感染其他牛群，造成不可挽回的损失，对全球的经济产生了严重的影响。PTB的这种长距离、渐进性、不易让人察觉的传播主要是由于存在大量的潜伏感染病例，且MAP这种病原菌对不利环境因素具有高度抵抗力，这些因素都构成了MAP传播的风险。同时，P本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种牛副结核病（Paratuberculosis，PTB）间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中包括禽分枝杆菌副结核亚种（Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis，MAP）的培养滤液包被的酶标板，其中所述的禽分枝杆菌副结核亚种的培养滤液是通过以下方法制备得到的：（1）将包含10
9 CFU /mL的禽分枝杆菌副结核亚种接种至含有0.05% v/v Tween
‑
80、0.2% v/v甘油、5mM天冬酰胺以及10% v/v的自制ADC的7H9培养基中，37℃恒温 160 rpm培养10周，收集菌液；其中，所述的自制ADC是通过以下方法制备得到：NaCl 8.5 g，右旋
‑
Dextrose 20.0 g，过氧化氢酶 0.03 g，定容到1 L，0.22
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m滤器过滤除菌；（2）将收集到的菌液进行离心，上清用0.22 μm孔径的滤膜过滤后为培养滤液。2.如权利要求1所述的牛副结核病（Paratuberculosis，PTB）间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，培养滤液包被酶标板的浓度为50 μg/mL。3.如权利要求1所述的牛副结核病（Pa...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘思国，党光辉，陈利苹，李田田，
申请(专利权)人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心，
类型：发明
国别省市：