金圣草素在制备促进胚胎发育产品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了金圣草素在制备促进胚胎发育产品中的应用，属于动物医药技术领域。将金圣草素应用于制备促进胚胎发育药物中，由于金圣草素具有增强囊胚发育和抗氧化的能力，以及抑制细胞凋亡和自噬等功能，而能够提高胚胎发育潜力；本发明专利技术通过在体外培养基中添加金圣草素，证明可促进猪卵母细胞孤雌激活后发育到囊胚阶段，减弱了发育中凋亡和自噬的表达，提高了胚胎的抗氧化功能和囊胚的形成率，从而增强了猪胚胎发育能力，并抑制体外发育过程中的所产生氧化应激和过度自噬的问题。产生氧化应激和过度自噬的问题。

【技术实现步骤摘要】
金圣草素在制备促进胚胎发育产品中的应用


[0001]本专利技术涉及动物医药
，尤其是涉及金圣草素在制备促进胚胎发育产品中的应用。

技术介绍

[0002]随着1978年世界第一例试管婴儿的诞生，辅助生殖技术在全球进入了高速发展的时期。辅助生殖技术是对卵子、精子或受精卵发育的胚胎等，在体内外进行操作形成新生命的技术。由于体内外操作差异，以及环境污染、母体生育年龄上升，该技术面临着严峻的挑战，包括配子发生和成熟率下降、胚胎发育不良、胎儿缺陷率增多等问题，从而导致不良出生或子代健康等问题。
[0003]在哺乳动物胚胎的体外发生过程中，顺利发育到囊胚是非常关键的一步。囊胚具有紧密排列的滋养层和松散排列的内细胞团，一般在卵母细胞受精后的第5至7天才形成囊胚，只有质量最好的胚胎才能发育成为囊胚，使用囊胚移植能更好的提高胚胎植入率。然而，相比于体内动态平衡的微环境，体外培养胚胎受到渗透压、pH、湿度、氧气、氨基酸和微量元素等理化因素的影响。
[0004]金圣草素作为天然化合物存在于自然界多种植物和食物中，属于黄酮类化合物。分子式为：C
16
H
12
O6，即3'
‑
甲氧基
‑
4',5,7
‑
三羟基黄酮；5,7
‑
二羟基
‑2‑
(4
‑
羟基
‑3‑
甲氧基苯基)
‑
4H
‑
苯并吡喃
‑4‑
酮，其具有如下式I所示的结构式。金圣草素可从紫苜蓿、忍冬、紫苏、黄喇叭花和轮叶鼠尾草等植物中提取分离得到，具有许多生理和药理活性。然而，金圣草素对胚胎发育的影响以及相关机制仍不清楚。
[0005]
技术实现思路

[0006]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出了金圣草素在体外促进卵母细胞胚胎发育或在制备促进胚胎发育的产品中的应用，该成分能够有效促进胚胎发育。
[0007]本专利技术还提出一种促进胚胎发育的产品。
[0008]本专利技术还提出一种体外促进卵母细胞胚胎发育的方法。
[0009]根据本专利技术的第一方面实施例的金圣草素或其衍生物在体外促进卵母细胞胚胎
发育或在制备促进胚胎发育的产品中的应用。
[0010]根据本专利技术的一些实施方式，所述金圣草素或其衍生物可提高囊胚形成率。包括但不限于提高囊胚形成率。
[0011]根据本专利技术的一些实施方式，所述金圣草素或其衍生物可提高胚胎抗氧化能力。
[0012]根据本专利技术的一些实施方式，所述提高胚胎抗氧化能力包括提高GSH水平。
[0013]根据本专利技术的一些实施方式，所述金圣草素或其衍生物可抑制胚胎自噬能力。
[0014]根据本专利技术的一些实施方式，所述抑制胚胎自噬能力包括降低LC3B表达量。
[0015]根据本专利技术的一些实施方式，所述产品为试剂盒、培养基或药物。
[0016]根据本专利技术的一些实施方式，所述金圣草素或其衍生物的作用浓度为0.5μM～2μM。例如：可以为0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2μM。
[0017]根据本专利技术的一些实施方式，所述卵母细胞为经孤雌激活后的卵母细胞。
[0018]根据本专利技术的第二方面实施例的一种促进胚胎发育的产品，所述产品包括金圣草素或其衍生物。
[0019]根据本专利技术的一些实施方式，所述产品为试剂盒、培养基或药物。
[0020]根据本专利技术的一些实施方式，所述培养基用于培养孤雌激活胚胎，包括2
‑
细胞、4
‑
细胞、8
‑
细胞、16
‑
细胞、桑葚胚，最后发育到囊胚。
[0021]根据本专利技术的一些实施方式，所述培养基的原料还包括氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钾、七水硫酸镁、碳酸氢钠、丙酮酸钠、乳酸钙、谷氨酰胺、亚牛磺酸、氨基酸、庆大霉素和牛血清白蛋白中的至少一种。
[0022]根据本专利技术的一些实施方式，所述药物还包括药学上可接受的辅料。
[0023]根据本专利技术的第三方面实施例的一种体外促进卵母细胞胚胎发育的方法，包括如下步骤：将所述金圣草素或其衍生物与卵母细胞接触。
[0024]根据本专利技术的一些实施方式，所述金圣草素或其衍生物的作用浓度为0.5μM～2μM。
[0025]根据本专利技术的一些实施方式，所述卵母细胞为经孤雌激活后的卵母细胞。
[0026]根据本专利技术的一些实施方式，所述接触的时间为5～9天。
[0027]根据本专利技术的一些实施方式，所述方法具体包括如下步骤：
[0028]S1、取成熟的卵母细胞进行孤雌激活；
[0029]S2、取经步骤S1处理后的卵母细胞置于含有金圣草素的胚胎培养液中培养。
[0030]根据本专利技术的一些实施方式，所述方法还包括制备成熟卵母细胞的步骤。
[0031]与现有技术相比，本专利技术的优点和积极效果是：
[0032]本专利技术方案专利技术金圣草素可以通过抑制胚胎发生过程中的氧化应激和过度自噬等作用以增强囊胚的发育能力，并提升囊胚的形成率，其对胚胎发育具有良好的促进作用，对于卵母细胞体外培养具有重要意义，可用于制备促进胚胎发育的药物、培养基或试剂盒等，具有良好的工业应用前景。
附图说明
[0033]图1是本专利技术一实施例中不同添加量金圣草素处理后的囊胚发育情况及囊胚形成率统计结果图；
[0034]图2是本专利技术一实施例中金圣草素处理组及空白对照组的细胞内CMF2HC的相对荧光强度检测结果图；
[0035]图3是本专利技术一实施例中金圣草素处理组及空白对照组的细胞内自噬体蛋白LC3B表达量的检测结果图。
具体实施方式
[0036]以下将结合实施例对本专利技术的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本专利技术的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本专利技术的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本专利技术的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本专利技术保护的范围。
[0037]实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0038]在本专利技术的描述中，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
[0039]若无特殊说明，本专利技术中“约”表示允许误差在
±
2％之内。
[0040]若无特殊说明，本专利技术中“室温”指25℃。
[0041]本专利技术的实施例中，所用的含台氏缓冲液(Tyro本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.金圣草素或其衍生物在体外促进卵母细胞胚胎发育或在制备促进胚胎发育的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述金圣草素或其衍生物可促进囊胚形成。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述金圣草素或其衍生物可提高胚胎抗氧化能力；优选地，所述提高胚胎抗氧化能力包括提高GSH水平。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述金圣草素或其衍生物可抑制胚胎自噬能力；优选地，所述抑制胚胎自噬能力包括降低LC3B表达量。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为试剂盒、培养基或药物...

【专利技术属性】
技术研发人员：金南衡，王朝睿，许永男，李英花，
申请(专利权)人：五邑大学，
类型：发明
国别省市：