基于动态限域空间的一管式分子诊断方法及其应用技术

本发明专利技术涉及生化分析和分子诊断领域，具体为一种基于动态限域空间的一管式分子诊断方法及其应用。利用蔗糖、甘油等溶液将两种互不兼容的等温扩增反应体系置于一个反应器中，实现一管式分子诊断。本发明专利技术检测方法应用于核酸、蛋白等靶标的快速、多重、可视化高灵敏检测。以病原体诺如病毒为例，可在1小时内实现单拷贝检测。本发明专利技术的优点：操作简单方便、快速肉眼可视、费用低、多重、高灵敏、适用现场即时检测等。测等。测等。

【技术实现步骤摘要】
基于动态限域空间的一管式分子诊断方法及其应用


[0001]本专利技术涉及生化分析和分子诊断领域，具体为一种基于动态限域空间的一管式分子诊断方法及其应用。

技术介绍

[0002]目前，生化分析和分子诊断领域的检测靶标主要有核酸、蛋白质等。检测的方法主要有免疫学方法、电子显微镜和分子生物学方法(如金标准qRT
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PCR)等。然而，这些方法成本高、劳动强度大、需要专业的操作人员和庞大的设备，难以在资源有限的地区实施。与上述传统检测方法相比，等温核酸扩增是一种潜在的快速检测技术。例如重组酶聚合酶扩增(RPA)和环介导的等温扩增(LAMP)，以其快速、简便和低成本的显著优势成为快速扩增核酸的有吸引力的替代方法。然而，它们仍存在着一定的局限性。例如，RPA有可能产生虚假扩增、对探针要求很高；而LAMP易产生气溶胶污染。因此，结合RPA和LAMP的级联扩增已成为解决这些问题的有效方法。在第一阶段的RPA反应中，所有的靶标将同时被扩增；并可结合第二阶段的高特异性LAMP反应。且RPA
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LAMP受益于RPA对抑制剂的耐受性，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于动态限域空间的一管式分子诊断方法，其特征在于：利用蔗糖或甘油将两种互不兼容的等温扩增反应体系置于一个反应器中，实现一管式对核酸或蛋白靶标的快速、多重、可视化检测。2.按权利要求1所述的基于动态限域空间的一管式分子诊断方法，其特征在于，利用蔗糖溶液或甘油溶液将两种互不兼容的重组酶聚合酶扩增反应体系与环介导等温扩增反应体系置于一个反应器中，并通过体系内指示剂利用颜色变化进行对核酸、蛋白等靶标的检测；且，上层为LAMP体系，下层为RPA体系。3.按权利要求1所述的基于动态限域空间的一管式分子诊断方法，其特征在于，所述RPA体系与LAMP体系两体系体积比为1
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3:9
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7。4.按权利要求2或3所述的基于动态限域空间的一管式分子诊断方法，其特征在于，所述RPA体系为40
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60μL，往1管RPA基础反应单元里加入15
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35μL RPA缓冲液、1
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10μM F3、1
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10μM B3、5
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15μL H20、5
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15μL蔗糖溶液或甘油、1
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6μL乙酸镁以及1
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8μL的待检测样本；其中，蔗糖溶液为浓度为5
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6％的蔗糖水溶液，甘油溶液为浓度为10
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30％的甘油水...

【专利技术属性】
技术研发人员：殷堃，陈福民，胡沁沁，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院，
类型：发明
国别省市：