具有抗乙型肝炎病毒功能的德氏乳杆菌Q80和短乳杆菌SR52-2及其应用制造技术

本发明专利技术公开了具有抗乙型肝炎病毒功能的德氏乳杆菌Q80和短乳杆菌SR52

【技术实现步骤摘要】
acid，SCFA)还能促进GM中有益SCFA产生菌的生长。已知SCFA调节抗炎反应，调节细胞分化和增殖；还可通过限制肠道细菌及其代谢产物进入肝脏来保护肠道上皮功能，防止细菌内毒素血症，如增加杯状细胞粘液分泌和释放抗菌肽的能力保护肠道上皮免受病原菌的影响。通过喂食SCFA的HBx转基因(HBxTg)小鼠研究证实，SCFA促进肿瘤抑制因子、失能同源蛋白2的表达增加，还以剂量依赖性的方式降低HBx转染细胞系的细胞活力，且人的原代肝细胞活力不受此影响，这有效延缓慢性肝病的发病进程。另外有学者发现青春双岐杆菌(Bifidobacterium adolescentis)SPM0212的细胞提取物以剂量依赖性降低细胞外HBsAg水平达50％，其基因表达也被抑制40％，同时显著提高IFN诱导的抗粘液病毒A(Myxovirus resistance A)的表达水平。随着对乳酸菌研究日渐深入，全球许多国家已经在医药、食品、日用品、畜牧业等多个领域广泛运用，其相关产品更是琳琅满目。但是，乳酸菌的抗病毒研究和应用起步较晚，尤其是我国，且市面上的抗病毒乳酸菌产品仍然一片空白，真正投入应用并不多。因此，定向筛选对HBV具有抗病毒作用的功能性乳酸菌并且进行深入的抗HBV机制研究和相关产品开发具有重要意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供具有抗HBV功能的德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaicus)Q80(简称Q80，下同)和短乳杆菌(Levilactobacillus brevis)SR52
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2(简称SR52
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2，下同)及其应用，本专利技术的乳酸菌在动物体内有很好的抑制HBV DNA复制的作用，在人体内抗HBV方面具有巨大的潜力。
[0006]本专利技术的第二个目的是提供德氏乳杆菌保加利亚亚种Q80或短乳杆菌SR52
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2在制备抗乙型肝炎病毒药物中的应用或抗菌药物中的应用。也可以用于食品或保健品中。
[0007]所述的抗菌药物是抗小肠结肠炎耶尔森氏菌、阪崎肠杆菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、枯草芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、单核增生李斯特菌、椰毒假单胞菌或溶血葡萄球菌药物。
[0008]本专利技术的第三个目的是提供一种抗乙型肝炎病毒药物或抗菌药物，其含有德氏乳杆菌保加利亚亚种Q80或短乳杆菌SR52
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2、或其培养物或其发酵液或其加工物作为活性成分。
[0009]所述的德氏乳杆菌保加利亚亚种Q80或短乳杆菌SR52
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2其可以用MRS培养基作为培养基。
[0010]本专利技术的第四个目的是提供用于鉴定德氏乳杆菌保加利亚亚种Q80的特异分子靶标，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，还提供了用于鉴定短乳杆菌SR52
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2的特异分子靶标，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0011]本专利技术的第五个目的是提供检测上述的特异性分子靶标的引物组。
[0012]优选，针对德氏乳杆菌保加利亚亚种Q80，其引物组为：Forward primer：GATCGTACA TGCCTTCCGGT，Reverse primer：AAGCCCATCTGCCAGTACAC；针对短乳杆菌SR52
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2，其引物组为：Forward primer：AGCGGTGGACAGAATAAAGCA；Reverse primer：TCCAA GCGTTCAAATTGGGG。
[0013]本专利技术的第五个目的是提供一种德氏乳杆菌保加利亚亚种Q80或短乳杆菌SR52
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2的鉴定方法，其包括如下步骤：
[0014]S1：使用上述引物组进行PCR扩增；
[0015]S2：进行凝胶电泳检测扩增产物；
[0016]S3：观察扩增产物是否符合预期。
[0017]优选的，所述S1中的PCR扩增体系包括2
×
PCR Mix、模板DNA、引物组和灭菌双蒸水。
[0018]优选的，所述PCR扩增体系为2
×
Taq PCR Mastermix 10μL，乳酸菌模板DNA 1μL，引物各1.0μmoL(终浓度)，RNase
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Free Water补足体系的体积至20μL。
[0019]优选的，所述S1中的德氏乳杆菌保加利亚亚种Q80株菌的PCR扩增程序为：95℃预变性3min；95℃变性30s；64℃退火30s；72℃延伸30s；变性、退火、延伸共进行30个循环；最后72℃延伸10min。
[0020]优选的，所述S1中的短乳杆菌SR52
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2株菌的PCR扩增程序为：95℃预变性3min；95℃变性30s；68.1℃退火30s；72℃延伸30s；变性、退火、延伸共进行30个循环；最后72℃延伸10min。
[0021]本专利技术经过筛选得到两株具有抗HBV功能的乳酸菌，分别命名为德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaicus)Q80和短乳杆菌(Levilactobacillus brevis)SR52
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2。经体内外试验证明，该两株乳酸菌体内外均具有抑制HBV DNA复制的能力，同时具备胃肠道消化耐受能力及较好的益生特性，并且无溶血性以及对多种抗生素敏感；通过16S rRNA基因序列比对分析，Q80菌株鉴定为德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaicus)，SR52
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2菌株鉴定为短乳杆菌(Levilactobacillus brevis)SR52
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2。
[0022]本专利技术提供所述乳酸菌在制备用于抗HBV的医药组合物中的应用。
[0023]本专利技术提供所述乳酸菌在制备抗HBV或防控致病菌的食品中的应用。
[0024]本专利技术提供一种包含任一所述的乳酸菌的培养物或其加工物。
[0025]本专利技术提供一种医药组合物，包括所述乳酸菌、所述的培养物或其加工物。
[0026]本专利技术还提供一种食品、保健品组合物，包括所述乳酸菌、所述的培养物或其加工物。
[0027]本专利技术的有益效果：
[0028]本专利技术提供的乳酸菌均分离自传统腌制食品的菌株。在体外能够抑制HBV DNA的复制与HBeAg和HBsAg的产生；同时对胃肠道环境耐受，且安全性能较好；并能在体内抑制HBV DNA的复制与HBeAg和HBsAg的产生，还可以延缓荷瘤裸鼠肿瘤的发生。本专利技术所筛选提供的乳酸菌Q80和SR52
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2均同时具备益生菌良好的益生特性和安全性，且在体内外的功能显著，这在开发预防和治疗HBV感染及其相关性疾病等功能食品或药品方面具有较大的应用潜力和利用价值。
[0029]Lactobacillus delb本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaicus)Q80，保藏编号为GDMCC No：62325。2.短乳杆菌(Levilactobacillus brevis)SR52
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2，保藏编号为GDMCC No：62608。3.权利要求1所述的德氏乳杆菌保加利亚亚种Q80或权利要求2所述的短乳杆菌SR52
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2在制备抗乙型肝炎病毒药物中的应用或抗菌药物中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的抗菌药物是抗小肠结肠炎耶尔森氏菌、阪崎肠杆菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、枯草芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、单核增生李斯特菌、椰毒假单胞菌或溶血葡萄球菌药物。5.一种抗乙型肝炎病毒药物或抗菌药物，其特征在于，含有权利要求1所述的德氏乳杆菌保加利亚亚种Q80或权利要求2所述的短乳杆菌SR52
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2、或其培养物或其发酵液或其加工物作为活性成分。6.根据权利要求5所述的药物，其特征在于，所述的德氏乳杆菌保加利亚亚种Q80或短乳杆菌SR52
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2其可以用MRS培养基作为培养基。7.一种用于鉴定德氏乳杆菌保加利亚亚种Q80的特异分子靶标，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示或用于鉴定短乳杆菌SR52
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2的特异分子靶标，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。8.一种检测权利要求1所述的德氏乳杆菌保加利亚亚种Q80或权利要求2所述的短乳杆菌SR52
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2的特异性分子靶标的引物组；针对德氏乳杆菌保加利亚亚种Q80，其引物组为：Fo...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴清平，杨娟，谢新强，李滢，丁郁，陈谋通，薛亮，王涓，叶青华，吴诗，古其会，张菊梅，张友雄，韦献虎，高鹤，赵辉，
申请(专利权)人：广东环凯生物科技有限公司广东科环生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：