一种极速基因合成方法技术

本发明专利技术公开了一种极速基因合成方法，属于生物合成技术领域，设计并合成寡核苷酸后通过重叠延伸PCR技术进行组装，再加入引物和聚合酶等进行第二轮PCR，对最终的PCR产物进行分析和纯化，得到纯化的DNA片段，将纯化后的DNA片段克隆进pUC19载体，转化大肠杆菌后挑选单克隆菌落并进行菌落PCR，抽提质粒并进行测序验证；将质粒纯化，纯化后的质粒采用基因测序技术对克隆产物进行验证，对比是否有突变、SNPs、插入或缺失，进行QC酶切验证后完成基因合成；转化克隆过程所采用的改良型大肠杆菌的质粒拷贝数增加；所采用的聚合酶具有DNA合成活性、常温和高温条件下小片段连接活性，缩短了基因合成的时间。合成的时间。

【技术实现步骤摘要】
一种极速基因合成方法


[0001]本专利技术属于生物合成
，具体涉及一种极速基因合成方法。

技术介绍

[0002]基因合成是指在体外人工合成双链DNA分子的技术，与寡核苷酸(oligo)的合成有所不同，寡核苷酸是单链的，所能合成的最长片段仅为100nt左右，而基因合成则为双链DNA分子合成，所能合成的长度范围为50bp
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12kb。现有行业内小于1k的基因从头合成，需要先合成数个100
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150个核苷酸长度的序列，虽然更长的片段(300
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600nt)也可以直接合成，但是DNA的人工合成随着长度的延长，合成产率会急剧降低，所以有需求的客户一般委托相关企业合成所需片段。
[0003]企业提供的基因合成服务一般包括引物合成、片段拼接、转化克隆、QC验证，最终向客户进行产品交付，长片段基因合成全过程一般需要4
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9天。客户为了科研进度需要尽快拿到合成的产品，所以提供服务的企业需要不断提高基因合成的效率，因此提出一种极速基因合成方法。
专利
技术实现思路

[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种极速基因合成方法，其特征在于，包括如下步骤：通过DNAWorks程序设计寡核苷酸序列，然后合成寡核苷酸，通过重叠延伸PCR技术组装这些寡核苷酸，再加入引物和聚合酶等进行第二轮PCR，对最终的PCR产物进行分析和纯化，得到纯化的DNA片段，将纯化后的DNA片段克隆进pUC19载体，转化大肠杆菌后挑选单克隆菌落并进行菌落PCR，抽提质粒并进行测序验证；将质粒纯化，纯化后的质粒采用基因测序技术对克隆产物进行验证，对比是否有突变、SNPs、插入或缺失，进行QC酶切验证后完成基因合成。2.根据权利要求1所述的一种极速基因合成方法，其特征在于，步骤一中聚合酶为TaqDNA聚合酶的DNA合成活性结构域、T4DNA连接酶连接活性结构域和Thermusaquaticus连接酶的连接活性结构域通过柔性linker线性连接形...

【专利技术属性】
技术研发人员：喻明军，王维坤，骆晓文，寿文静，陈健，
申请(专利权)人：通用生物安徽股份有限公司，
类型：发明
国别省市：