一种改进的分光光度计测试土壤及发酵液中乳酸的方法技术

本发明专利技术提供一种改进的分光光度计测试土壤及发酵液中乳酸的方法，包括以下步骤：步骤S1：配置试验相关试剂；步骤S2、浸提土壤中的乳酸并收集发酵液；步骤S3、离心并过滤待测样品；步骤S4、待测样品进行预处理；步骤S5、待测样品过程处理；步骤S6、扫描并确定最适吸收波长；步骤S7、验证并确定测试修正系数；步骤S8、样品测定。本发明专利技术通过测定定容后的样品溶液在最适波长处的吸光度，计算测定试验过程中土壤里以及发酵液中乳酸的含量，从而提高了检测效率和检测精度、缩短了检测时间、简化了测定条件并且降低了检测成本、可重复操作，回收率高。回收率高。回收率高。

【技术实现步骤摘要】
一种改进的分光光度计测试土壤及发酵液中乳酸的方法


[0001]本专利技术属于环境检测
，具体的说是一种改进的分光光度计测试土壤及发酵液中乳酸的方法。

技术介绍

[0002]在环境保护工程中，环境检测技术是非常重要的一项内容，相关技术的发展对环境工程有积极意义。我国环境检测发展起步较晚，当前环境检测仍存在不少问题，如检测资源比较匮乏、缺乏合理的资源配置、检测效率较低，试剂检测工作缺乏科学和专业人员指导等。其中。土壤环境检测是指通过对影响土壤环境质量因素的代表值的测定，确定环境质量及其变化趋势，微生物发酵液代谢物质检测能确定微生物发酵反应的变化情况。土壤以及发酵液中的乳酸含量能够反映厌氧反应过程中是否存在乳酸代谢途径及代谢程度，具有重要检测意义。
[0003]目前很多土壤的培养试验以及微生物厌氧发酵的试验会用到乳酸作为底物或者是目标的产物，而在需要检测乳酸的试验中目前主要使用高效液相色谱或试剂盒进行测试，但是这两种方法测试条件比较严格，检测效率低，其中高效液相色谱对待检测样品和流动相要求较严格，即样品中如含有钙镁离子容易堵塞色谱柱，而本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种改进的分光光度计测试土壤及发酵液中乳酸的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤S1、配置试验相关试剂，即配置20％(质量/体积)配置硫酸铜、1.5％对羟基联苯溶液、钨酸溶液和0.5mg/ml乳酸标准储存液；步骤S2、浸提土壤中的乳酸并收集发酵液：将鲜土样品和蒸馏水混合在20
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40℃条件下充分搅拌后将悬浊液转移到离心管中，然后进行震荡浸提土壤中的乳酸作为待测样品；步骤S3、离心并过滤待测样品；步骤S4、预处理待测样品：吸取步骤S3所得的待测样品分别置于若干支离心管内后加入等体积硫酸充分混匀、静置、离心除去硫酸钙类沉淀，吸取离心后的上清液于离心管中，向其中加入步骤S1中配置的钨酸溶液混匀后在20
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25℃环境下静置至溶液出现絮状沉淀后，进行离心，然后转移上清液至离心管中进行水浴保温，最后取出水浴冷却；步骤S5、待测样品过程处理：吸取步骤S4冷却后的液体于离心管后加入蒸馏水定容混匀后，向样品内加入氢氧化钙和步骤S1中配置的20％硫酸铜混匀后进行沸水浴，然后取出再进行冷水浴后进行离心，吸取离心后的上清液在比色管内，加入浓硫酸混匀后进行沸水浴取出进行冰水浴，再向冰水浴后的比色管内加入步骤S1配置的1.5％对羟基联苯溶液充分混匀后静置后，将其置于沸水浴后再取出进行冰水浴直至溶液澄清透明，冷却待测；步骤S6、扫描并确定最适吸收波长：利用紫外分光光度计在400
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700nm波长范围内对测试标准样品进行扫描，标准样品同步骤S4和步骤S5进行预处理和过程处理，用蒸馏水为空白做参比液，读取具有最大吸光度的波长值，记录相应波长和吸光度，绘制读取的波长下吸光度与标准样品浓度的关系曲线得到标线；步骤S7、验证并确定测试修正系数：以乳酸测试分析纯制备测试样品，经过步骤S4和步骤S5进行预处理和过程处理后，然后同步骤S6，扫描并读取相应波长和吸光度值，计算标准样品实际浓度(真值)和测试浓度(测量值)的误差，在误差允许范围内，确定最适吸收波长，并通过计算建立等量关系，得到相应的修正系数；步骤S8、样品测定：将步骤S5中最终冰水浴冷却后的样品取出，以步骤S6中确定的最适波长作为测试波长，测定其在该波长处的吸光度，再与步骤S7中得到的修正系数相乘，从而计算得到测定试验过程中土壤里以及发酵液中乳酸的含量。2.根据权利要求1所述的一种改进的分光光度计测试土壤及发酵液中乳酸的方法，其特征在于：所述步骤S1中配置1.5％对羟基联苯溶液的方法是将对羟基联苯1.5g溶于0.125mol/L氢氧化钠100ml中，配置过程中用需要加热助溶，完全溶解后为澄清液体。3.根据权利要求1所述的一种改进的分光光度计测试土壤及发酵液中乳酸的方法，其特征在于：所述步骤S1中配置钨酸溶液的方法是将0.667mol硫酸与10％钨酸钠溶液等体积混合后充分搅拌。4.根据权利要求1所述的一种改进的分光光度计测试土壤及发酵液中乳酸的方法，其特征在于：所述步骤S1中配置0.5mg/ml乳酸标准储存液的方法是将无水乳酸锂溶于50ml蒸馏水中，加0.5mol硫酸10ml，然后加蒸馏水定容到100ml，混匀后于4℃冰箱中保存。5.根据权利要求1所述的一种改进的分光光度计测试土壤及发酵液中乳酸的方法，其特征在于：所述步骤S2的具体操作方法是：用电子天平称取15g鲜土样品装入50ml的烧杯中，再向里加入15ml蒸馏水，放在智能控温磁力搅拌器上25℃条件下充分搅拌20
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30min，然
后转移悬浊液到50ml离心管中，放在震荡仪上充分震荡5min，浸提土壤中的乳酸，作为待测样品。6.根据权利要求1所述的一种改进的分光光度计测试土壤及发酵液中乳酸的方法，其特征在于：所述步骤S3的具体操作方法是：将待测样品5000r/min离心10min，取上清液用0.45μm滤膜过滤，将滤液收集在灭菌的离心管内留存待用。7.根据权利要求1所述的一种改进的分光光度计测试土壤及发酵液中乳酸的方法，其特征在于：所述步骤S4的具体操作方法是：吸取步骤S3所得的待测样品分别置于若干支离心管内，加入等体积浓度为1mol/L硫酸充分混匀，静置10min后10000r/min离心10min除去硫酸钙类沉淀，吸取离心后的上清液2ml于10ml离心管中，向其中加入2ml步骤S1中配置的钨酸溶液混匀后在20
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25℃环境下，静置15
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20min至溶液出现明絮状沉淀，10000r/min离心10min，转移上清液至10ml离心管中进行60℃水浴保温30min，最后取出水浴冷却10
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15min。8.根据权利要求1所述的一种改进的分光光度计测...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭婉茜，邓琳，任韦同，吴清莲，孟昭辉，
申请(专利权)人：哈尔滨工业大学，
类型：发明
国别省市：