肝母细胞瘤动物模型、其构建方法及其应用技术

本公开涉及一种肝母细胞瘤动物模型、其构建方法及其应用。所述动物通过导入基因转移载体进行制备，其中所述基因转移载体选自：(1)所述基因转移载体包含转座子表达载体以及表达转座酶的辅助质粒，其中，所述转座子表达载体包含转座子5

【技术实现步骤摘要】
肝母细胞瘤动物模型、其构建方法及其应用


[0001]本专利技术涉及生命科学和生物
，具体涉及肝母细胞瘤动物模型、其构建方法及其应用。

技术介绍

[0002]肝母细胞瘤(Hepatoblastoma，HB)是儿童中最常见的肝脏恶性肿瘤，其大多发生于3岁以下的婴幼儿，常为散发病例，然而其中一些病例报道与先天遗传变异、畸形、以及Beckeith
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Widedmann综合征和家族性腺瘤性息肉病等家族性癌症相关。近来全球范围内HB发病率的增长速度高于所有其他儿童恶性肿瘤。该疾病的5年存活率在发达国家中约为80％，但对于复发或难治的HB患者存活率低于50％，其具有更复杂的肿瘤生物学特征，如肝细胞癌样的突变特征和侵袭能力，导致化疗耐药、血管侵袭和肿瘤的转移扩散。目前HB的致病机理尚未十分清楚，现有的治疗方案不能够有效缓解高风险HB的进展，因此，深入研究HB发病的分子机制对HB的治疗具有重要意义。目前对于HB治疗相关的研究进展缓慢，其主要限制因素之一为缺乏有效的临床前模型。有效的动物模型有助于探索HB的发生、发展过程，为HB药物开发和筛本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
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种基因转移载体，其选自：(1)所述基因转移载体包含转座子表达载体以及表达转座酶的辅助质粒，其中，所述转座子表达载体包含转座子5
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末端重复序列和转座子3
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末端重复序列以及在两者之间的多克隆插入位点，所述辅助质粒包含转座酶编码基因及其启动子；或(2)所述基因转移载体包含转座子5
’
末端重复序列和3
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末端重复序列以及在两者之间的多克隆插入位点、转座酶编码序列以及控制所述转座酶表达的启动子；其中，所述多克隆插入位点用于可操作地插入外源基因编码序列以及可选的控制外源基因表达的启动子；所述外源基因选自癌基因和FGF基因中的一种或多种。2.权利要求1所述的基因转移载体，其中，所述转座子选自piggyBac、Sleeping Beauty、Mos1、Tc1/mariner、Tol2、微型Tol2(mini
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Tol2)、Tc3、MuA、Himar I和Frog Prince；优选地，所述转座子为piggyBac转座子；优选地，所述转座子5
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末端重复序列为PiggyBac转座子5
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末端重复序列；更优选地，所述PiggyBac转座子5
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末端重复序列的核苷酸序列包含与SEQ ID NO:1所示核苷酸序列具有80％或以上同一性的核苷酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的核苷酸列，更优选具有98％或99％以上同一性的核苷酸序列；更优选地，所述5
’
末端重复序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；优选地，所述转座子3
’
末端重复序列为PiggyBac转座子3
’
末端重复序列；更优选地，所述PiggyBac转座子3
’
末端重复序列的核苷酸序列包含与SEQ ID NO:2所示核苷酸序列具有80％或以上同一性的核苷酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的核苷酸列，更优选具有98％或99％以上同一性的核苷酸序列；更优选地，所述3
’
末端重复序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；优选地，所述转座酶为PiggyBac转座酶；优选地，所述PiggyBac转座酶的氨基酸序列包含与SEQ ID NO:3所示氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；更优选地，所述PiggyBac转座酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；优选地，所述PiggyBac转座酶基因的核苷酸序列包含与SEQ ID NO:4所示核苷酸序列具有80％或以上同一性的核苷酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的核苷酸列，更优选具有98％或99％以上同一性的核苷酸序列；更优选地，所述PiggyBac转座酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；优选地，所述癌基因选自MYC、CCND1、CTNNB1、JAK1、MET、NFE2L2、EGFR、RAS、AKT和PIK3CA；优选地，所述MYC选自c
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MYC、n
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MYC、L
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MYC、r
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MYC；优选地，所述癌基因为c
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MYC和CCND1；优选地，所述c
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MYC的氨基酸序列包含与SEQ ID NO:5所示氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；更优选地，所述c
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MYC的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；更优选地，所述c
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MYC基因的核苷酸序列包含与SEQ ID NO:6所示核苷酸序列具有80％或以上同一性的核苷酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的核苷酸列，更优选具有98％或99％以上同一性的核苷酸序
列；更优选地，所述c
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MYC基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；优选地，所述CCND1的氨基酸序列包含与SEQ ID NO:7所示氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；更优选地，所述CCND1的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；优选地，所述CCND1基因的核苷酸序列包含与SEQ ID NO:8所示核苷酸序列具有80％或以上同一性的核苷酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的核苷酸列，更优选具有98％或99％以上同一性的核苷酸序列；更优选地，所述CCND1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示；优选地，所述FGF为FGF19；优选地，所述FGF19的氨基酸序列包含与SEQ ID NO:9所示氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；更优选地，所述FGF19的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示；优选地，所述FGF19基因的核苷酸序列包含与SEQ ID NO:10所示核苷酸序列具有80％或以上同一性的核苷酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的核苷酸列，更优选具有98％或99％以上同一性的核苷酸序列；更优选地，所述FGF19基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；优选地，所述启动子选自CMV启动子、CAG启动子、EF1α启动子、SV40启动子、Ubiquitin B启动子、HSP70启动子、PGK
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1启动子...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵斌，唐梅，方渝珊，张予超，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：