一种郁金香胚轴愈伤组织的诱导及再生方法技术

本发明专利技术涉及一种郁金香胚轴愈伤组织的诱导及再生方法，该方法包括以下步骤：1、将郁金香种子进行清洗和消毒后接种到萌发培养基上，所述萌发培养基为1/2MS培养基；2、待郁金香种子萌发后，选取郁金香种子萌发出的胚轴中的一部分作为愈伤诱导外植体，接种到愈伤诱导培养基上并暗培养，3、将胚轴切成0.2～0.3cm的小段，接种在原诱导培养基上继续暗培养；4、诱导培养15天后挑选生长旺盛的愈伤组织进行继代培养获得郁金香胚轴诱导的愈伤组织；5、将郁金香胚轴诱导的愈伤组织转入不定芽诱导培养基，诱导产生不定芽。本发明专利技术采用的外植体为胚轴，该外植体来自于种胚萌发后的胚性器官，具有较高的活力，分生能力强，脱分化潜力大。脱分化潜力大。脱分化潜力大。

【技术实现步骤摘要】
一种郁金香胚轴愈伤组织的诱导及再生方法


[0001]本专利技术涉及植物快速繁殖
，具体涉及一种郁金香胚轴愈伤组织的诱导和再生方法。

技术介绍

[0002]郁金香(Tulipa gesneriana L.)为百合科郁金香属球根花卉。郁金香花型独特，色彩艳丽，深受世界人民喜爱，被广泛应用于鲜切花、盆栽和园林景观绿化，具有很高的观赏价值和经济价值。郁金香的繁殖方式包括播种繁殖和分球繁殖。其中，播种繁殖周期长，大部分栽培种从种子到形成开花球需要3～5年，时间周期长，制约了郁金香的育种和扩大再生产效率。而鳞茎是郁金香主要的营养繁殖器官，通常一个商品球的子球繁殖系数为1～6，大大低于其他一二年生草本植物的繁殖效率，因此大部分栽培种存在子球繁殖系数低、种球退化等问题。同时由于环境气候，病毒积累，栽培技术等影响，郁金香子球复花困难，需要每年从国外大量进口商品球。如何提升郁金香的繁殖效率是其育种和栽培领域中的技术瓶颈。近年来，有不少研究以花茎、腋芽、茎段、鳞茎等作为外植体进行组织培养，试图建立高效的组培快繁技术体系以克服郁金香繁殖效率低下的问题。据报道，目前郁金香组培快繁技术主要利用茎、花茎直接诱导再生小鳞茎，或利用种子和鳞片先脱分化获得愈伤组织，再通过再生芽分化诱导小鳞茎的发生与膨大。上述技术因品种不同，外植体的取样部位和取材时间不同，愈伤组织诱导和再生的效率也存在很大的差异。
[0003]本技术专利技术人前期建立了以种胚为外植体的野生郁金香的组培快繁技术体系(ZL 2020 1 0204397.1)，但是上述技术体系对郁金香栽培种的适应性比较低，说明野生种和栽培种之间由于遗传背景差异较大，可能存在不同的组培快繁技术模式。在郁金香野生种中，虽然利用种胚能够直接诱导愈伤组织，但是一个种胚在初代培养时只能诱导产生一块愈伤组织，存在外植体数量有限、利用率不高的问题，在一定程度上限制了该途径在郁金香组培快繁中的应用空间。因此，亟需建立一种外植体来源相对充足、且适用于栽培种的组培快繁技术。该技术的研发对于提升郁金香栽培种的繁殖效率、缩短育种周期、降低生产成本具有重要意义。除此之外，建立一种具有广泛品种适用性的组培快繁技术体系不仅可以解决种球退化问题，降低对国外种球的依赖度，还能加速我国郁金香育种的效率，从根本上提升我国郁金香产业的竞争力，为实现种球国产化提供技术储备。

技术实现思路

[0004]根据现有技术存在的问题，本专利技术公开了一种郁金香胚轴愈伤组织的诱导及再生方法，该方法以郁金香种子萌发后的下胚轴为外植体，该外植体在愈伤诱导培养基上可以在较短时间获得大量的愈伤组织，进行分化培养后获得再生芽，为郁金香的增殖扩繁和遗传转化提供了重要的技术支持。
[0005]为解决以上技术问题，本专利技术采用以下技术方案：
[0006]一种郁金香胚轴愈伤组织的诱导及再生方法，包括以下步骤：
[0007]步骤1、将郁金香种子进行清洗和消毒后接种到萌发培养基上，所述萌发培养基为1/2MS培养基；
[0008]步骤2、待郁金香种子萌发后，选取郁金香种子萌发出的胚轴中的一部分作为愈伤诱导外植体，将愈伤诱导外植体切成0.5cm的小段，接种到愈伤诱导培养基上暗培养，所述愈伤诱导培养基为MS培养基且包含1.0～3.0mg/L的二氯苯氧乙酸，0.5
‑
2.0mg/L的6
‑
苄氨基嘌呤和0.1～0.3mg/L的激动素；
[0009]步骤3、暗培养8
‑
12天后，将胚轴切成更短的0.2～0.3cm的小段，接种在原诱导培养基上继续暗培养；
[0010]步骤4、诱导培养15天后挑选色泽淡黄、结构致密和生长旺盛的愈伤组织进行继代培养，每30天继代一次，获得郁金香胚轴诱导的愈伤组织；
[0011]步骤5、将郁金香胚轴诱导的愈伤组织转入不定芽诱导培养基，诱导产生不定芽。
[0012]进一步的，所述步骤1中，对郁金香种子进行清洗和消毒的具体方法为：将郁金香种子置于添加0.1％吐温
‑
20和2～3滴洗洁精的溶液中浸泡20min，然后流水冲洗2h，再用无菌水浸泡8～10h，在超净台中用75％的乙醇消毒1min，无菌水冲洗三次，继而用2％的次氯酸钠溶液消毒20min，无菌水冲洗5～6次。
[0013]进一步的，所述步骤1中，培养环境为4℃暗培养40～60天。
[0014]进一步的，所述步骤2中，待郁金香胚轴生长至6～8cm，选取胚轴的白色部位为愈伤诱导的外植体。
[0015]进一步的，所述继代培养基为MS培养基，且包括1.0mg/L的二氯苯氧乙酸、0.5mg/L的6
‑
苄氨基嘌呤和0.1mg/L的激动素。
[0016]进一步的，所述萌发培养基、愈伤诱导培养基和不定芽诱导培养基中均包括30g/L的蔗糖和8g/L的琼脂，pH值为5.7～5.8。
[0017]进一步的，步骤5中的培养条件为，光照时间14～16h/d，光照强度1600～2000Lx，温度23
±
2℃。
[0018]本专利技术的有益效果为：
[0019]1、外植体来源充足、脱分化能力强。本专利技术采用的外植体为胚轴，该外植体来自于种胚萌发后的胚性器官，具有较高的活力，分生能力强，脱分化潜力大。相比较其他外植体，诱导愈伤组织更容易，且不受环境季节影响，获取保存简单，外植体来源较充足。
[0020]2、愈伤组织诱导周期短、效率高。本专利技术采用的愈伤诱导培养基，在外植体接种15天后便可诱导出愈伤组织，诱导效率高，对比其他外植体和诱导方法大大缩短了诱导愈伤周期。
[0021]3、本专利技术适用于多个郁金香栽培种。由于遗传背景的差异，郁金香组培快繁技术往往存在因品种而异的现象，同一组培技术体系很难适用于多个品种或品系。本专利技术适用于多个郁金香栽培种的组培快繁，扩大了品种适用性，具有更加广泛的应用前景。
[0022]下面结合附图和实施例对本专利技术进行详细说明。
附图说明
[0023]图1为本专利技术的技术流程，以郁金香品种
‘
范兰迪
’
、
‘
道琼斯
’
和
‘
纯金
’
的组培快繁和愈伤诱导为例，比较种胚萌发后下胚轴不同部位愈伤组织的诱导效率。
具体实施方式
[0024]以下结合附图对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。
[0025]如图1所示，一种郁金香胚轴愈伤组织的诱导及再生方法，具体实施步骤如下：
[0026](1)选择郁金香品种
‘
范兰迪
’
(
‘
Verandi
’
)(品种1)为材料，该品种观赏性状和抗性性状优良，是广受市场欢迎的切花和园林应用品种。选取形态大小一致、生长饱满、种胚良好的
‘
范兰迪
’
种子。
[0027](2)将本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种郁金香胚轴愈伤组织的诱导及再生方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、将郁金香种子进行清洗和消毒后接种到萌发培养基上，所述萌发培养基为1/2MS培养基；步骤2、待郁金香种子萌发后，选取郁金香种子萌发出的胚轴中的一部分作为愈伤诱导外植体，将愈伤诱导外植体切成0.5cm的小段，接种到愈伤诱导培养基上暗培养，所述愈伤诱导培养基为MS培养基且包含1.0～3.0mg/L的二氯苯氧乙酸，0.5
‑
2.0mg/L的6
‑
苄氨基嘌呤和0.1～0.3mg/L的激动素；步骤3、暗培养8
‑
12天后，将胚轴切成更短的0.2～0.3cm的小段，接种在原诱导培养基上继续暗培养；步骤4、诱导培养15天后挑选色泽淡黄、结构致密和生长旺盛的愈伤组织进行继代培养，每30天继代一次，获得郁金香胚轴诱导的愈伤组织；步骤5、将郁金香胚轴诱导的愈伤组织转入不定芽诱导培养基，诱导产生不定芽。2.根据权利要求1所述的郁金香胚轴愈伤组织的诱导及再生方法，其特征在于，所述步骤1中，对郁金香种子进行清洗和消毒的具体方法为：将郁金香种子置于添加0.1％吐温
‑
20和2～3滴洗洁精的溶液中浸...

【专利技术属性】
技术研发人员：王艳平，王森，杨江涛，黄含笑，谭明慧，刘开意，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：