一种抗多种病原菌的无前导肽细菌素subticinA3及制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种抗多种病原菌的无前导肽细菌素subticin A3及制备方法与应用，属于医药应用领域。所述无前导肽细菌素subticin A3的氨基酸序列为MVTFLRIVAQLGARAARWAWANKDRILGWIRDGMAIDWIINKINDMVN，氨基酸序列的第一个氨基酸为甲酰化的甲硫氨酸。所述无前导肽细菌素subticin A3的制备方法包括利用芽孢杆菌Bacillus subtilis发酵产物分离获取，或者化学合成方法获取。经实验验证，所述无前导肽细菌素subticin A3能高效杀灭猪链球菌等病原微生物，可用于抗菌药物、饲料、食品等领域，具有广阔的应用前景。阔的应用前景。阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种抗多种病原菌的无前导肽细菌素subticin A3及制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及医药应用领域领域，特别是涉及一种抗多种病原菌的无前导肽细菌素subticin A3及制备方法与应用。

技术介绍

[0002]猪链球菌(Streptococcus suis)是一种重要的人畜共患病病原菌，可通过呼吸道、破损皮肤和消化道传染，造成关节炎、淋巴结肿胀、败血症、脑膜炎及腹泻，若人直接接触，会使人患有脑膜炎和败血病等；乙型溶血性链球菌(β
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Hemolytic streptococcus)可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎等人类和动物的多种疾病，严重威胁养殖业和人类公共安全。目前，临床上主要采用抗生素或疫苗进行防治，因抗生素的残留或大量抗性病原菌的产生会对人类健康造成危害，抗生素替代品的开发成为人们关注的热点。
[0003]细菌素是细菌在代谢过程中由核糖体合成的、对产生菌具有自身免疫性的一类具有抗菌活性的多肽类物质，具有体内外抑菌活性高，对人体无毒，可选择性强，不易产生交叉抗性，易于生物改造等特点，是抗生素的最佳替代品之一，其中无前导肽细菌素是一类由细菌核糖体合成、翻译后不经任何修饰即对某些病原微生物有抗菌活性的多肽类物质，该类细菌素遗传结构简单，易在其它微生物细胞中表达，便于通过生物工程进行规模化生产，抗菌机制独特，有巨大的商业应用潜能。因此，开发新型细菌素成为人们预防或治疗由病原微生物导致疾病的重要途径。研究表明，很多芽孢杆菌基因组中含有未被鉴定的新型细菌素基因簇，具有生物合成新型细菌素的潜能，这些新型细菌素可被鉴定、开发成抗猪链球菌药物，具有重要的开发应用前景。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种抗多种病原菌的无前导肽细菌素subticin A3及制备方法与应用，以解决上述现有技术存在的问题，该细菌素subticin A3对猪链球菌及乙型溶血性链球菌具有显著的抑菌作用，在饲料、抗菌药物、食品等领域具有广阔的开发前景。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0006]本专利技术提供一种无前导肽细菌素subticin A3，其氨基酸序列为MVTFLRIVAQLGARAARWAWANKDRILGWIRDGMAIDWIINKINDMVN，氨基酸序列的第一个氨基酸为甲酰化的甲硫氨酸。
[0007]本专利技术还提供无前导肽细菌素subticin A3的制备方法，包括利用枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis发酵产物分离获取，或者化学合成方法获取。
[0008]优选的是，所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的保藏编号为CGMCC No.25552；保藏时间为2022年8月19日；保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0009]优选的是，所述发酵产物通过将所述枯草芽孢杆菌接种于LB液体培养基中，37℃，220rpm振摇培养8h获取；
[0010]所述发酵产物通过依次经过离子交换树脂、高效液相色谱分离纯化，得到所述细菌素subticin A3。
[0011]优选的是，所述离子交换树脂的分离条件为：分别用蒸馏水、30％乙醇、80％乙醇洗脱，获取活性组分；
[0012]用所述高效液相色谱分离纯化所述活性组分，其中色谱分离条件为：上样量10μL，流速1mL/min，梯度洗脱程序为乙腈浓度由10％增加到80％洗脱55min，收集保留时间51min的馏分。
[0013]本专利技术还提供所述的无前导肽细菌素subticin A3在抑菌方面的应用。
[0014]优选的是，所述菌包括猪链球菌和乙型溶血链球菌。
[0015]本专利技术还提供所述的无前导肽细菌素subticin A3在制备抗猪链球菌和/或抗乙型溶血性链球菌的药物中的应用。
[0016]本专利技术还提供一种抑菌剂，含有所述的无前导肽细菌素subticin A3。
[0017]本专利技术还提供一种抗菌药物，含有所述的无前导肽细菌素subticin A3。
[0018]本专利技术公开了以下技术效果：
[0019]本专利技术公开了一种新型的无前导肽细菌素subticin A3，结构简单，合成容易。经试验验证，该细菌素subcitin A3安全低毒，能高效杀灭猪链球菌、乙型溶血性链球菌多种病原微生物，可用于抗菌药物、饲料、食品等领域，具有广阔的应用前景。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0021]图1为细菌素subticin A3的一级质谱图；图中M.W.表示分子量；
[0022]图2为细菌素subticin A3的氨基酸序列及二级质谱图；“*”表示该氨基酸被甲酰化形成甲酰甲硫氨酸，小写字母表示碎片离子；
[0023]图3为细菌素subticin A3的HPLC纯化结果；
[0024]图4为不同浓度细菌素subticin A3的溶血活性；不同小写字母表示显著性差异(P<0.01)。
具体实施方式
[0025]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0026]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括
或排除在范围内。
[0027]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
[0028]在不背离本专利技术的范围或精神的情况下，可对本专利技术说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本专利技术的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本申请说明书和实施例仅是示例性的。
[0029]关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
[0030]以下实施例中所使用的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis ZXF04，是专利技术人从自然界的土壤中分离得到的一株菌，已本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种无前导肽细菌素subticin A3，其特征在于，其氨基酸序列为MVTFLRIVAQLGARAARWAWANKDRILGWIRDGMAIDWIINKINDMVN，氨基酸序列的第一个氨基酸为甲酰化的甲硫氨酸。2.如权利要求1所述的无前导肽细菌素subticin A3的制备方法，其特征在于，包括利用枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis发酵产物分离获取，或者化学合成方法获取。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.25552。4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述发酵产物通过将所述枯草芽孢杆菌接种于LB液体培养基中，37℃，220rpm振摇培养8h获取；所述发酵产物通过依次经过离子交换树脂、高效液相色谱分离纯化，得到所述细菌素subticin A3。5.如权利要求4所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：王海花，张晓峰，刘宁，潘春梅，
申请(专利权)人：河南牧业经济学院，
类型：发明
国别省市：