一种胎盘抗衰老活性蛋白其分离方法技术

本发明专利技术提供一种胎盘抗衰老活性蛋白其分离方法，属于活性蛋白提取领域，该胎盘抗衰老活性蛋白其分离方法具体步骤为胎盘处理、配置生理盐水、匀浆制备、冻结溶化、超声波破碎、加入丙酮、数据对比、沉淀粉末和最终处理。本发明专利技术提供合理的活性蛋白分离方法，通过匀浆粉碎，可以提高胎盘的粉碎率，从而提高胎盘与蛋白抑制酶和生理盐水混合液的混合效果，再通过多次的取样检测，对胎盘中的蛋白活性进行检测，配合后续的拍照记录，实现分离过程中的随时追溯，提高胎盘活性蛋白的分离质量。提高胎盘活性蛋白的分离质量。提高胎盘活性蛋白的分离质量。

【技术实现步骤摘要】
一种胎盘抗衰老活性蛋白其分离方法


[0001]本专利技术活性蛋白提取
，尤其涉及一种胎盘抗衰老活性蛋白其分离方法。

技术介绍

[0002]鹿胎盘是传统名贵的鹿类中药材，鹿胎盘及其制剂作为一种特殊的中药，具有良好的滋补作用，现有专利申请号为CN201811340286.2的一种鹿胎盘活性蛋白及其提取方法和应用，所述方法包括以下步骤：取鹿胎盘进行预处理；将预处理后的鹿胎盘冷冻后切碎，加入含蛋白酶抑制剂的生理盐水，制成匀浆；将匀浆完全冻结后再迅速溶化，重复13次；将处理后的匀浆进行超声破碎细胞，然后离心分离收取上清液；将上清液冷却后加入丙酮，过滤收集沉淀，将沉淀干燥后得到粉末；将粉末溶于磷酸盐缓冲溶液中，加入饱和硫酸铵至饱和度为0.25，离心去除沉淀，然后取上清液调节pH值，加饱和硫酸铵至饱和度为0.50，得到盐析物；将盐析物溶于缓冲液中，超滤得到超滤液；将超滤液脱盐后，干燥得到鹿胎盘活性蛋白，制备过程中无法实现追溯，不能保证分离后的蛋白活性。

技术实现思路

[0003]为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种胎盘抗衰老活性蛋白其分离方法，以解决现有的技术存在着对支架表面处理时碎屑容易飞溅的问题，一种胎盘抗衰老活性蛋白其分离方法具体包括以下步骤：
[0004]步骤一：胎盘处理：工作人员将胎盘上的胎膜清理干净，并对大血管、脂肪以及结缔组织进行清理，并且将胎盘冷冻后切碎；
[0005]步骤二：配置生理盐水：将蛋白酶抑制剂按照比例与生理盐水混合；
[0006]步骤三：匀浆制备，具体包括以下操作步骤：
[0007]第一步：匀浆制备：将切碎后的胚胎放入蛋白抑制酶和生理盐水混合液中，再用搅拌棒对混合液进行搅拌；
[0008]第二步：匀浆粉碎：将匀浆放入粉碎机中进行粉碎，粉碎时间为五秒至七秒；
[0009]第三步：取样检测：用取样工具对匀浆进行取样，然后将取样后的均将样品放置到显微镜下进行观察；
[0010]第四步：数据记录：对显微镜中的样品图片进行拍照记录，并且对时间步骤进行记录；
[0011]步骤四：冻结溶化：将制备好的匀浆放置到冷冻箱中进行冷冻，间隔三分钟至五分钟观察一次，直到匀浆完全冻结，再将器皿取出放入水中进行溶化，重复四次；
[0012]步骤五：超声波破碎：将处理后的匀浆放入超声波破碎集中进行超声波破碎细胞，然后将其放入离心机中进行分离，收取上清液，并且对上清液进行取样；
[0013]步骤六：加入丙酮：将上清液冷却后加入丙酮，并且对加入丙酮后的上清液进行取样，再对上清液进行过滤收集沉淀；
[0014]步骤七：数据对比，具体包括以下操作步骤：
[0015]第一步：样品标记：将加入丙酮前的上清液与加入丙酮后的上清液分别放入取样管中进行存储，并且在取样管外侧做好标记，便于工作人员进行区分；
[0016]第二步：样品观察：将加入丙酮前的上清液与加入丙酮后的上清液分别放置到显微镜下观察，并且对数据进行拍照记录；
[0017]第三步：数据观察：将两组数据记录好之后放置到一起进行观察，保证分离过程中的蛋白活性；
[0018]步骤八：沉淀粉末，具体包括以下操作步骤：
[0019]第一步：沉淀分离：将上清液中的液体部分取出，再将沉淀物放置到平铺有吸水纸的干燥盘上进行控干；
[0020]第二步：沉淀烘干：将干燥盘放置到烘干箱中进行烘干，得到沉淀粉末；
[0021]第三步：粉末收集：将粉末从干燥盘上收集到存储盒中进行存储；
[0022]步骤九：最终处理：将粉末溶于磷酸盐缓冲液中，加入饱和硫酸铵，离心沉淀后取上清液，再次加入饱和硫酸铵得到盐析物，最后将盐析物溶于Tris
‑
Hcl缓冲液中，经过超滤脱盐干燥后分离出活性蛋白。
[0023]优选地，在步骤三，所述的第一步匀浆制备中蛋白酶抑制剂和生理盐水的混合比例为2:13。
[0024]优选地，在步骤三，所述的第二步匀浆粉碎中粉碎时间为六秒，并且重复两次至三次。
[0025]优选地，在步骤九，所述的最终处理中离心沉淀后的上清液PH值调节至4.0。
[0026]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：由于本专利技术的一种胎盘抗衰老活性蛋白其分离方法广泛应用于活性蛋白提取领域。本专利技术提供合理的活性蛋白分离方法，通过匀浆粉碎，可以提高胎盘的粉碎率，从而提高胎盘与蛋白抑制酶和生理盐水混合液的混合效果，再通过多次的取样检测，对胎盘中的蛋白活性进行检测，配合后续的拍照记录，实现分离过程中的随时追溯，提高胎盘活性蛋白的分离质量。
附图说明
[0027]图1是胎盘抗衰老活性蛋白其分离方法流程图。
[0028]图2是匀浆制备流程图。
[0029]图3是数据对比流程图。
[0030]图4是沉淀干燥流程图。
具体实施方式
[0031]以下结合附图对本专利技术做进一步描述：
[0032]图中：
[0033]如附图1至图4所示
[0034]一种胎盘抗衰老活性蛋白其分离方法具体包括以下步骤：
[0035]S101：胎盘处理：工作人员将胎盘上的胎膜清理干净，并对大血管、脂肪以及结缔组织进行清理，并且将胎盘冷冻后切碎；
[0036]S102：配置生理盐水：将蛋白酶抑制剂按照比例与生理盐水混合；
[0037]S103：匀浆制备，具体包括以下操作步骤：
[0038]S301：匀浆制备：将切碎后的胚胎放入蛋白抑制酶和生理盐水混合液中，再用搅拌棒对混合液进行搅拌；
[0039]S302：匀浆粉碎：将匀浆放入粉碎机中进行粉碎，粉碎时间为五秒至七秒；
[0040]S303：取样检测：用取样工具对匀浆进行取样，然后将取样后的均将样品放置到显微镜下进行观察；
[0041]S304：数据记录：对显微镜中的样品图片进行拍照记录，并且对时间步骤进行记录；
[0042]S104：冻结溶化：将制备好的匀浆放置到冷冻箱中进行冷冻，间隔三分钟至五分钟观察一次，直到匀浆完全冻结，再将器皿取出放入水中进行溶化，重复四次；
[0043]S105：超声波破碎：将处理后的匀浆放入超声波破碎集中进行超声波破碎细胞，然后将其放入离心机中进行分离，收取上清液，并且对上清液进行取样；
[0044]S106：加入丙酮：将上清液冷却后加入丙酮，并且对加入丙酮后的上清液进行取样，再对上清液进行过滤收集沉淀；
[0045]S107：数据对比，具体包括以下操作步骤：
[0046]S701：样品标记：将加入丙酮前的上清液与加入丙酮后的上清液分别放入取样管中进行存储，并且在取样管外侧做好标记，便于工作人员进行区分；
[0047]S702：样品观察：将加入丙酮前的上清液与加入丙酮后的上清液分别放置到显微镜下观察，并且对数据进行拍照记录；
[0048]S703：数据观察：将两组数据记录好之后放置到一起进行观察，保证分离过程中的蛋白活性；<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胎盘抗衰老活性蛋白其分离方法，其特征在于，该种胎盘抗衰老活性蛋白其分离方法具体包括以下步骤：步骤一：胎盘处理：工作人员将胎盘上的胎膜清理干净，并对大血管、脂肪以及结缔组织进行清理，并且将胎盘冷冻后切碎；步骤二：配置生理盐水：将蛋白酶抑制剂按照比例与生理盐水混合；步骤三：匀浆制备；步骤四：冻结溶化：将制备好的匀浆放置到冷冻箱中进行冷冻，间隔三分钟至五分钟观察一次，直到匀浆完全冻结，再将器皿取出放入水中进行溶化，重复四次；步骤五：超声波破碎：将处理后的匀浆放入超声波破碎集中进行超声波破碎细胞，然后将其放入离心机中进行分离，收取上清液，并且对上清液进行取样；步骤六：加入丙酮：将上清液冷却后加入丙酮，并且对加入丙酮后的上清液进行取样，再对上清液进行过滤收集沉淀；步骤七：数据对比；步骤八：沉淀粉末；步骤九：最终处理：将粉末溶于磷酸盐缓冲液中，加入饱和硫酸铵，离心沉淀后取上清液，再次加入饱和硫酸铵得到盐析物，最后将盐析物溶于Tris
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Hcl缓冲液中，经过超滤脱盐干燥后分离出活性蛋白。2.如权利要求1所述的胎盘抗衰老活性蛋白其分离方法，其特征在于，在步骤三中，所述的匀浆制备，具体包括以下操作步骤：第一步：匀浆制备：将切碎后的胚胎放入蛋白抑制酶和生理盐水混合液中，再用搅拌棒对混合液进行搅拌；第二步：匀浆粉碎：将匀浆放入粉碎机中进行粉碎，粉碎时间为五秒至七秒；第三步：取样检测：用取样工具对匀浆进行取样，然后将取样后的均将样品放置到显微镜下...

【专利技术属性】
技术研发人员：程乐杰，马静，郭馨怡，王泊，高飞，李菁菁，蔡虎，
申请(专利权)人：乐杰海南生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：