一种宫颈癌检测分子标记物及基于其的单克隆抗体与应用制造技术

本申请生物诊断及医药的技术领域，尤其涉及一种宫颈癌检测分子标记物及基于其的单克隆抗体与应用。本申请首先公开一种宫颈癌检测的分子标记物，分子标记物为朊蛋白结构中的疾病特异性表位，该疾病特异性表位的氨基酸序列为MDEYSNQMVFVHDC，其在PrPc中被包埋，在PrPsc中被暴露。本申请其次公开能够与上述疾病特异性表位特异性结合的单克隆抗体及其制备方法，最后公开一种含有该单克隆抗体的宫颈癌检测剂盒。本申请制备构象型单克隆抗体可以特异性识别宫颈癌变发生时所引起的病变蛋白中结构异常位点，而不识别正常结构蛋白，在检测的灵敏度、特异性、便捷性及检测成本上达到了一定的平衡，能够达到在比较低的检测成本下获得相对准确检测结果的效果。对准确检测结果的效果。对准确检测结果的效果。

【技术实现步骤摘要】
一种宫颈癌检测分子标记物及基于其的单克隆抗体与应用


[0001]本申请涉及生物诊断及医药的
，尤其是涉及一种宫颈癌检测分子标记物及基于其的单克隆抗体与应用。

技术介绍

[0002]宫颈癌是女性生殖系统的常见恶性肿瘤，大量研究发现,人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)是导致宫颈癌的元凶。据统计，约20％的低度宫颈损伤将转变为高度损伤，如果不及时治疗，其中30％将会进一步转为恶性肿瘤。因此，早期诊断和预防HPV感染是降低宫颈癌等相关疾病死亡率和减少宫颈癌治疗开支的重要突破口。
[0003]目前宫颈癌筛查主要采用的是巴氏涂片检验，检测宫颈脱落细胞的细胞学形态。细胞形态学检测具有一定的主观性，制片困难，批内和批间重复性差，具有较高的假阳性和假阴性率，因此对早期癌症检测灵敏度低、漏诊率高，阳性检出率仅在30％～50％；在一些地区，巴氏涂片检验已经被液基细胞学(LBC)所取代，LBC是半自动或全自动标本处理新技术，能够自动分析检测样本并可提供剩余的细胞样本供其他HPV感染分析。另一种临床上使用的分子检测HPVDNA检测(如HC2)可以辅助细胞学检测高危HPV病毒的存在，他是以具有致病性的高危型HPV核酸为目的基因，基于定量PCR的原理进行的，虽然检测的灵敏度高，但是检测过程中耗材较多且检测流程比较繁琐，导致检测成本较高。
[0004]我们知道，抗原抗体检测的灵敏度、特异性和便捷度都比较高，但是目前临床宫颈癌抗原抗体检测的方法尚未普遍，临床HPV检测没有合适的抗体主要有三个原因：1、HPV蛋白在临床组织或细胞样本中表达量较低，需要度高亲和力的抗体进行检测；2、HPV病毒在现有的标准组织培养技术下不能在实验室培养存活；3、E7蛋白本身存在免疫抑制，使得采用E7蛋白免疫动物不能获得很好的免疫反应，另外使制备得到的抗体往往与其他的HPV蛋白存在交叉反应对E7蛋白不具有特异性。因此，本领域有必要研究一种基于抗原抗体检测的、灵敏度高的、操作简便的、成本较低的宫颈癌检测技术。

技术实现思路

[0005]为了改善目前宫颈癌抗原抗体检测技术比较缺乏，现行检测技术存在灵敏度不高或操作繁琐、成本较高的问题，本申请的第一个目的在于提供一种宫颈癌检测分子标记物，其为朊蛋白结构中的疾病特异性表位，能够特异性表征宫颈癌疾病，且其基于朊蛋，很容易获得。
[0006]本申请的第二个目的在于提供一种单克隆抗体及其制备方法，能够特异性识别宫颈癌细胞系或宫颈癌组织细胞，可用于宫颈癌的检测，检测灵敏度比较高。
[0007]本申请的第三个目的在于提供一种免疫磁珠和一种基于抗原抗体免疫检测的宫颈癌检测试剂盒，具有检测操作简便、成本较低的优点。
[0008]为了实现本申请的第一个目的，本申请提供一种宫颈癌检测的分子标记物，采用如下的技术方案：
[0009]一种宫颈癌检测的分子标记物，其特征在于，所述分子标记物为朊蛋白结构中的疾病特异性表位，所述疾病特异性表位在PrPc中被包埋，在PrPsc中被暴露，所述疾病特异性表位的氨基酸序列为MDEYSNQMVFVHDC。
[0010]肮病毒(Prion)是一类可引起人和动物的可转移性神经退化疾病的感染因子,病原为致病型肮蛋白(PrPsc)，它是由宿主体内正常表达的肮蛋白(PrPC)空间结构异常变化而形成的。PrPC和PrPSC来源于同一基因，具有相同的氨基酸序列和共价修饰，但在空间结构上存在很大的差异，导致理化性质发生了显著的改变，已经发现肿瘤病变发生时，细胞表面PrPc发生构型变化，转化为PrPsc。基于此，专利技术人在进一步的研究中发现了上述技术方案中的疾病特异性表位的氨基酸序列，其在PrPc中被包埋，在PrPsc中被暴露，在宫颈癌细胞系和宫颈癌组织中都可以检测到，能够作为特异性表征宫颈癌疾病的分子标记物。
[0011]实现方式可以包括以下任何特征或全部特征。
[0012]在另一实施例中，所述分子标记物的N端和C端分别叠加所述疾病特异性表位的氨基酸序列。
[0013]通过序列的叠加，能够增加本技术方案中分子标记物的免疫源性，以提高该分子标记物动物免疫的成功率。
[0014]在另一实施例中，所述分子标记物与免疫载体白细胞素偶联。
[0015]通过采用上述技术方案来增加本技术方案中分子标记物的免疫刺激性，以提高该分子标记物动物免疫的成功率。
[0016]为了实现本申请的第二个目的，本申请提供一种单克隆抗体及其制备方法，采用如下的技术方案：
[0017]一种单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体可与上述的分子标记物特异性结合。
[0018]本技术方案中的抗体可和PrPsc的特异性表位相结合，通过抗体
‑
抗原表位的特异性结合来检测宫颈癌细胞的存在。
[0019]进一步地，本申请提供一种单克隆抗体的制备方法，包括制备目标抗原、动物免疫、细胞融合和单抗筛选的步骤，其特征在于，所述制备目标抗原步骤中包括：
[0020]S1，合成疾病特异性表位序列MDEYSNQMVFVHDC；
[0021]S2，在疾病特异性表位序列的N端和C端各叠加四次所述的疾病特异性表位序列，获得目标多肽序列；
[0022]S3，将所述目标多肽序列与具有强免疫刺激的免疫载体白细胞素偶联，获得免疫复合物；
[0023]S4，将所述免疫复合物克隆到表达载体中并进行表达、纯化，获得目标抗原。
[0024]通过上述技术方案所制备的构象型单克隆抗体特异性极强，可以特异性识别宫颈癌病变发生时所引起的病变蛋白中结构异常位点，而不识别正常结构蛋白，从而可以实现检测宫颈癌细胞的目的，可以作为宫颈癌疾病早期诊断的辅助手段。
[0025]为了实现本申请的第三个目的，本申请首先提供一种免疫磁珠，进一步提供一种含有上述单克隆抗体或免疫磁珠的宫颈癌检测试剂盒，采用如下的技术方案：
[0026]一种免疫磁珠，其特征在于，采用链霉亲和素修饰的纳米磁珠与上述的单克隆抗体偶联得到。
[0027]通过上述技术方案处理抗体获得的免疫磁珠在应用于宫颈癌检测时，免疫磁珠捕获抗原后，由于其在磁场中具有与其他组分不同的磁响应性，在磁力作用下，带有抗原的细胞容易被分离，能够减少检测步骤，提高检测效率。
[0028]一种宫颈癌检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求4所述的单克隆抗体或所述单克隆抗体的活性片段或所述单克隆抗体的融合蛋白。
[0029]一种宫颈癌检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求5所述的免疫磁珠。
[0030]相对现行的宫颈癌检测技术，上述技术方案中的宫颈癌检测剂盒基于抗原抗体免疫检测，在检测的灵敏度、特异性、便捷性及检测成本上达到了一定的平衡，能够在比较低的检测成本下获得相对准确的检测结果，适合在经济不发达的地区作为宫颈癌早期筛查手段广泛使用。
[0031]综上所述，本申请提供了一种宫颈癌检测分子标记物及基于其的单克隆抗体与应用，具有以下有益效果：本申请依据朊蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种宫颈癌检测的分子标记物，其特征在于，所述分子标记物为朊蛋白结构中的疾病特异性表位，所述疾病特异性表位在PrPc中被包埋，在PrPsc中被暴露，所述疾病特异性表位的氨基酸序列为MDEYSNQMVFVHDC。2.根据权利要求1所述的一种宫颈癌检测的分子标记物，其特征在于，所述分子标记物的N端和C端至少一端叠加所述疾病特异性表位的氨基酸序列。3.根据权利要求2所述的一种宫颈癌检测的分子标记物，其特征在于，所述分子标记物与免疫载体白细胞素偶联。4.一种单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体可与权利要求1
‑
3任一项所述的分子标记物特异性结合。5.一种如权利要求4所述的单克隆抗体的制备方法，包括制备目标抗原、动物免疫、细胞融合...

【专利技术属性】
技术研发人员：苑国忠，
申请(专利权)人：博迈医疗科技常州有限公司，
类型：发明
国别省市：