SC1-70抗原截短体、其制备方法和应用技术

本申请公开了一种SC1

【技术实现步骤摘要】
SC1
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70抗原截短体、其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及基因工程领域，特别涉及SC1
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70抗原截短体、其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]Sc1
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70的本质为DNA拓扑异构酶I(topisomeraseI，TOP1)的C末端片段的70kDa大小的蛋白，因其抗原分子量为70kDa而得名。DNA拓扑异构酶I天然分子量为100kDa,位于核浆及核仁,核仁中浓度最高,在DNA复制及转录中起松解局部螺旋的作用。Sc1
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70抗体属于抗可提取性核抗原抗体范畴，识别的抗原为DNA拓扑异构酶I，并且该抗体见于多种自身免疫病，是系统性硬皮症相对特异性的抗体。因此，检测Sc1
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70抗体可提高系统性硬皮症的诊断率，有利于系统性硬皮症的鉴别诊断和治疗效果的提高。
[0003]目前临床上对于Sc1
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70抗体的检测方法有多种，如间接免疫荧光法、免疫双扩散法、酶联免疫吸附法等。这些方法均需用到Sc1
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70蛋白。现有技术中，获取Sc1
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70蛋白的常见方法是提取法和重组蛋白法。纯化提取天然的Sc1
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70蛋白存在工艺繁琐、产量低和纯度低，无法满足日益增长的检测需求；基于基因工程的重组Sc1
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70蛋白法，虽然克服了提取法原材料短缺的缺陷，但制备所得的蛋白均以包涵体形式表达，产率极低、所得蛋白活性低且纯化困难，无法满足生产需要。
>[0004]因此，本领域尚需开发一种产率高、所得蛋白活性高且易于纯化的Sc1
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70蛋白制备方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种SC1
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70抗原截短体。
[0006]本专利技术的目的在于提供一种重组SC1
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70抗原截短体的制备方法。
[0007]本专利技术的另一目的在于提供一种编码SC1
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70抗原截短体的多核苷酸序列。
[0008]本专利技术的另一目的在于提供与编码SC1
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70抗原截短体的多核苷酸序列适配的载体。
[0009]本专利技术的另一目的在于提供含有编码SC1
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70抗原截短体的多核苷酸序列的试剂盒。
[0010]为解决上述技术问题，本专利技术第一方面，一种SC1
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70抗原截短体，所述SC1
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70抗原截短体选自以下任一种：
[0011](i)具有如SEQ ID NO.2所示序列的多肽；和
[0012](ii)具有与SEQ ID NO.2的同源性大于95％的多肽。
[0013]本专利技术的第二方面，提供了一种编码SC1
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70抗原截短体的多核苷酸，所述多核苷酸经密码子优化，且所述多核苷酸选自以下任一种：
[0014](i)具有如SEQ ID NO.3所示序列的多核苷酸；
[0015](ii)具有与如SEQ ID NO.3所示序列的同源性大于95％的多核苷酸；和
[0016](iii)具有与(i)或(ii)中所述的多核苷酸序列互补的多核苷酸。
[0017]本专利技术第三方面，提供了一种表达载体，所述表达载体包括本专利技术第一方面提供的多核苷酸。
[0018]在一些优选的方案中，所述表达载体包括表达His
×
6标签的多核苷酸序列，更优选地，所述表达载体中，所述的多核苷酸的5
’
端连接于表达His
×
6标签的多核苷酸序列。
[0019]在一些优选的方案中，所述表达载体为大肠杆菌表达载体，更优选为pET
‑
28a(+)。
[0020]本专利技术第四方面，提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包括本专利技术第二方面提供的表达载体；或者
[0021]所述宿主细胞的基因组中整合有如本专利技术第一方面提供的多核苷酸。
[0022]在一些优选的方案中，所述宿主细胞为大肠杆菌(Escherichia coli)。
[0023]在一些优选的方案中，所述宿主细胞为大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株。
[0024]本专利技术第五方面提供了一种制备SC1
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70抗原截短体的方法，所述方法包括步骤：培养本专利技术第三方面所述的宿主细胞，以表达出目的蛋白；和
[0025]分离所述目的蛋白，即得所述SC1
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70抗原截短体；
[0026]其中，所述目的蛋白具有如氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
[0027]在一些优选的方案中，所述宿主细胞通过含有本专利技术第一方面所述多核苷酸的质粒转化大肠杆菌获得。
[0028]在一些优选的方案中，用SB、TB或SOC培养基培养所述的宿主细胞。为获得大量可溶性表达，在更优选的方案中，用SB培养基培养所述的宿主细胞。
[0029]在一些优选的方案中，在振荡的环境中培养所述的宿主细胞。
[0030]在一些优选的方案中，培养所述的宿主细胞时，所用培养基中含有卡那霉素抗性基因。
[0031]在一些优选的方案中，培养所述的宿主细胞时，使用IPTG进行诱导，以表达出目的蛋白。
[0032]在一些优选的方案中，培养所述的宿主细胞时，培养至OD600在0.6至0.8，后使用IPTG进行诱导，以表达出目的蛋白。
[0033]在一些优选的方案中，所述分离所述目的蛋白的步骤包括：
[0034]将经破碎的目的蛋白上清液通过层析柱，进行洗脱，收集洗脱液。
[0035]在一些优选的方案中，所述层析柱为Ni
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柱亲和层析柱，例如HisTrapTMFF。
[0036]本专利技术第六方面提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括：如本专利技术第一方面提供的的多核苷酸；或者
[0037]如本专利技术第二方面提供的表达载体；或者
[0038]如本专利技术第三方面所述的宿主细胞；或者
[0039]或者根据本专利技术第四方面所述的方法制备的SC1
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70抗原截短体。
[0040]本专利技术相对于现有技术而言，至少具有下述优点：
[0041](1)本专利技术开发了基于基因工程的SC1
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70抗原截短体的制备方法，实现了在大肠杆菌表达系统中高效稳定的可溶性表达，并且所得的SC1
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70抗原截短体活性与SC1
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70抗原相当；
[0042](2)本专利技术优选的实施方式N端携带编码(His)6标签的多核苷酸序列，进一步提升了体系产生可溶性表达的量，且无需再进行切除标签和二次纯化等步骤，一步法获得高纯
度、高产率目的蛋白，简化了纯化步骤，提高回收率及纯度，能够获得高活性的重组Sc1
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70蛋白，为临床上对系统性硬皮症的鉴别诊断提供诊断试剂原料，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种SC1
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70抗原截短体，其特征在于，所述SC1
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70抗原截短体选自以下任一种：(i)具有如SEQ ID NO.3所示序列的多肽；和(ii)具有与SEQ ID NO.3的同源性大于95％的多肽。2.一种编码如权利要求1所述的SC1
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70抗原截短体的分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸经密码子优化，且所述多核苷酸选自以下任一种：(i)具有如SEQ ID NO.3所示序列的多核苷酸；(ii)具有与如SEQ ID NO.3所示序列的同源性大于95％的多核苷酸；和(iii)具有与(i)或(ii)中所述的多核苷酸序列互补的多核苷酸。3.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括如权利要求2所述的多核苷酸。4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体包括表达His
×
6标签的多核苷酸序列。5.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为大肠杆菌表达载体，优选为pET
...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋析文，黄黉，骆丽，汪育泰，何祖强，
申请(专利权)人：广州达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：